针刺不同腧穴组方对SHR大鼠血压及血清CGRP、ET-1和AngⅡ水平的影响

崔依依,郭继龙,董爱爱,刘高峰,来小云,冀来喜

·动物实验·

针刺不同腧穴组方对SHR大鼠血压及血清CGRP、ET-1和AngⅡ水平的影响

崔依依1,郭继龙1,董爱爱2,刘高峰2,来小云1,冀来喜1

(1.山西中医药大学,太原 030006;2.天津中医药大学,天津 300193)

通过针刺不同穴位组方,观察对自发性高血压(SHR)大鼠血压及血清活性因子的影响,以期找到最佳的腧穴配伍组方。将72只9周龄雄性SHR大鼠随机分为9组,每组8只,即模型组、人迎组、曲池组、足三里组、曲池＋足三里组、人迎＋足三里组、人迎＋曲池组以及三穴配伍组。另设8只Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为空白对照组,不予针刺干预。每7天测定1次血压值,比较各组的血压变化水平,14周龄后检测大鼠血清中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、降钙素基因相关肽(CGRP)和内皮素-1(ET-1)含量。针刺1周后,人迎组、人迎＋曲池组、人迎＋足三里组和三穴配伍组血压较针刺前下降(＜0.05),较模型组下降(＜0.05);针刺4周后各针刺组血压较模型组下降(＜0.05,＜0.01),与三穴配伍组比较,差异有统计学意义(＜0.05,＜0.01)。针刺后,各针刺组大鼠血清中的CGRP、ET-1和AngⅡ含量与模型组比较,差异均有统计学意义(＜0.05,＜0.01);除人迎＋曲池组和人迎＋足三里组的CGRP外,各针刺组的CGRP、ET-1和AngⅡ含量与三穴配伍组比较,差异均有统计学意义(＜0.05)。针刺不同腧穴组方可以降低SHR大鼠血压水平,其中人迎、曲池、足三里的三穴配伍组较其他腧穴组的降压效果显著,其机制可能通过调节血清中的CGRP、ET-1和AngⅡ含量来发挥作用。

针刺疗法;高血压;SHR大鼠;降钙素基因相关肽;内皮素-1;血管紧张素Ⅱ

根据2002年最后1次流行病学调查,我国约有2亿高血压患者,占全世界高血压总人数的1/5,高血压患病率呈明显上升趋势。而随高血压发生发展产生的一系列并发症如卒中、心血管疾病等日益影响居民的健康水平。临床上大量的病例研究显示针刺降压疗效显著[1],但是穴位的配伍方法没有较为明确的规律。而近年的机制研究从不同的方面也证实了针刺降压的有效性[2],其中大多数以单穴的实验观察较多,对于穴位配伍的研究较少,笔者通过课题前期的研究及查阅大量的文献资料筛选出针刺治疗高血压较常用的3个腧穴[3-5],即人迎、曲池和足三里,通过针刺3个腧穴之间不同的配伍来观察对自发性高血压(SHR)大鼠血压及血清中血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, AngⅡ)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide, CGRP)和内皮素-1(endothelin-1, ET-1)的影响,探讨不同腧穴组合的降压作用,以期选出最佳的腧穴配伍组合。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

雄性自发性高血压(SHR)大鼠9周龄72只和雄性清洁级Wistar-Kyoto(WKY)大鼠8只,体重(180±20)g,均购自北京维通利华动物中心。先根据SHR大鼠体重编号,随后用Excel随机分为9组,每组8只,分别为模型组、人迎组、曲池组、足三里组、曲池和足三里组、人迎和足三里组、人迎和曲池组以及三穴配伍组,另8只WKY大鼠作为空白对照组。大鼠在良好环境下适应性喂养1周后进行针刺干预。

1.2 主要仪器

全自动大小鼠无创血压测量系统(BP-600A,成都泰盟软件有限公司);中研太和牌无菌针灸针0.22 mm×25 mm(无锡佳健医疗器械有限公司);酶标仪(SM600型,上海永创医疗器械有限公司);高速离心机(HC-3018安徽中科中佳科学仪器有限公司);超低温冷冻储存箱(DW-HL388中科美菱);超级恒温水浴箱(HW-500成都泰盟软件有限公司)。

1.3 治疗方法

参考《实验针灸学》选取曲池、足三里。曲池,桡骨近端的关节外侧前方凹陷中。足三里,膝关节后外侧,腓骨小头下约5 mm处。参照中国针灸学会实验针灸研究会制定的“动物针灸穴位图谱”选取人迎,根据人和大鼠解剖特点和人迎穴定位特点,在颈部三角区内,胸骨舌骨肌与胸锁乳突肌上缘交点,约当颈总动脉分叉处,体表可触及搏动,大鼠两侧下颌骨隅突连线下(8±0.3)mm,前正中线旁开(5.5±0.4)mm,左右各一。

空白组不进行任何干预。模型组和各针刺组固定方法、时间一致,但模型组不做针刺。人迎组,选取双侧人迎穴,待大鼠安静状态下,于每日下午14:00—16:00进行针刺,进针时需注意避免刺伤重要血管组织,每次30 min,针刺5 d间歇2 d,连续干预28 d,针刺操作者需统一。足三里组、曲池组、曲池和足三里组、人迎和足三里组、人迎和曲池组以及三穴配伍组分别针刺相应名称穴位,其余操作同人迎组。实验期间所有大鼠均正常等量喂养。

1.4 观察指标

1.4.1 血压

采用大鼠尾动脉无创测量法进行血压测量,将仪器预热至36℃,把大鼠装在固定鼠筒,置于该环境下15 min后,使鼠尾温度上升,待大鼠心率、呼吸稳定时,用尾袖套法测量血压。测量血压时间分别安排在针刺前1天及接受针刺刺激的第7、14、21、28天。每次在上午9:00—11:00开始测量,连续测3次,求其均值。

1.4.2 血清指标

各组干预结束后(即第4周末),大鼠均禁食12 h,自由饮水,10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠后腹主动脉取血,静置2 h后以3000 r/min离心15 min分离血清,按试剂盒说明采用ELISA法检测指标AngⅡ、ET-1和CGRP含量。

1.5 统计学方法

所有数据用SPSS22.0统计软件处理。符合正态分布的计量资料以均数±标准差表示,同一时间多组样本均数的比较采用多因素方差分析,不同时间点的各组SHR大鼠血压组内比较,采用重复测量数据两因素多水平方差分析。以＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组不同时间收缩压变化比较

空白组与模型组针刺前后大鼠血压比较,差异有统计学意义(＜0.05)。针刺1周后,人迎组、人迎＋曲池组、人迎＋足三里组和三穴配伍组较针刺前血压下降(＜0.05),较模型组血压下降(＜0.05);除曲池组和足三里组,其余针刺组与三穴配伍组血压比较,差异均无统计学意义(＞0.05)。针刺2周后,除曲池组外其余针刺组大鼠血压与模型组比较,差异均有统计学意义(＜0.05);曲池组与三穴配伍组血压比较,差异有统计学意义(＜0.05)。针刺3周后各针刺组血压较模型组下降(＜0.05);人迎组、曲池组、足三里组和曲池＋足三里组血压与三穴配伍组比较,差异有统计学意义(＜0.05)。针刺4周后各针刺组血压较模型组下降(＜0.05,＜0.01),与三穴配伍组比较,差异有统计学意义(＜0.05,＜0.01)。详见表1、图1。

表1 各组不同时间收缩压变化比较 (±s,mmHg)

注:与空白组比较1)＜0.01;与模型组比较2)＜0.05,3)＜0.01;与三穴配伍组比较4)＜0.05;与针刺前比较5)＜0.05

图1 各组不同时间收缩压变化

2.2 各组大鼠血清CGRP、ET-1、AngⅡ含量比较

针刺4周后,模型组CGRP、ET-1、AngⅡ含量与空白组比较,差异均有统计学意义(＜0.05);各针刺组与模型组比较,差异均有统计学意义(＜0.05,＜0.01);人迎组、曲池组、足三里组和曲池＋足三里组CGRP含量与三穴配伍组比较,差异有统计学意义(＜0.05),其余针刺组之间比较,差异无统计学意义(＞0.05);与单穴及双穴组比较,三穴配伍组的ET-1和AngⅡ含量明显下降,差异有统计学意义(＜0.05,＜0.01)。详见表2。

表2 各组大鼠血清CGRP、ET-1、AngⅡ含量比较 (±s,pg/mL)

注:与空白组比较1)＜0.01;与模型组比较2)＜0.05,3)＜0.01;与三穴配伍组比较4)＜0.05,5)＜0.01

3 讨论

原发性高血压是指以体循环动脉血压增高,大于或等于140/90 mmHg为主要特征,随着疾病的进行性发展,可造成心、脑、肾、血管系统等器官的损害,是最常见的心血管疾病之一。近年来国内外对高血压有了新的认识,由美国心脏协会(AHA)/美国心脏病学会(ACC)联合颁布的新指南中首次将高血压定义修改为≥130/80 mmHg,是一个由复杂性的和相互联系的病因学引起的心血管症状。关于本病,中医学并无高血压病名,也未有统一的阐述,根据其表现的症状以及临床上常见的证型,将其划分为中医学的“眩晕”“头痛”范畴。近年来,也有学者以血脉理论为基础,提出以“脉胀”作为高血压病的中医病名的可行性[6]。在高血压病的发病中,中医学理论遵循整体观念,以脏腑论治,《素问·至真要大论》就有“诸风掉眩,皆属于肝”,认为本病的眩晕与肝肾关系密切,发病原因多与髓海不足、气血亏虚等多种因素有关。随着中西医结合对高血压病研究的不断深入,气血阴阳失调、津液代谢障碍作为高血压病的总病机也有了越来越多的理论支持[7]。本实验以自发性高血压大鼠(SHR)为模型,SHR最初是由血压较高的Wistar大鼠交配而来。在没有任何干预手段下,从4～6周时出现高血压,其血压升高的原因多由基因遗传决定,与人类原发性高血压的病理生理学相似,是研究高血压病发病机制较为理想且十分常用的动物模型[8]。

高血压的发生和发展与血管内皮损伤有着密切的关系。血管内皮细胞不仅可以维持血管张力和结构,也可以调节血管细胞增殖。其功能的失调会引起血管活性物质之间的紊乱,造成血管内皮舒张功能障碍和血管舒缩状态的异常[9]。CGRP是维持血管舒张张力的重要因素,它不只作用于内皮细胞,而且还作用于血管壁中的平滑肌细胞。可能通过外周受体的介导对血管产生保护作用[10]。CGRP与其他血管活性物质存在相互制约的作用,共同调节血管的舒缩状态。内皮素(ET)主要由血管内皮细胞分泌,收缩血管能力极强,对心血管的影响较为突出,其中ET-A受体存在于血管平滑肌细胞中并介导内皮素诱导的血管收缩。CGRP的释放增加和血管舒张之间平衡的结果可能使ET-A受体介导后收缩血管导致的高血压降低,在调节机体血压的动态平衡中起了至关重要的作用[11]。AngⅡ通常被认为是肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)中最活跃的血管活性物质,也是内皮细胞中最重要的收缩因子之一。与AT-1受体结合后,AngⅡ诱导血管收缩能够刺激生长和增殖因子,改变了内皮细胞维持的血管组织稳态,导致血管舒缩功能的异常[12]。而AngⅡ、ET-1和CGRP可能不是单一地作用于高血压,而是相互联系的直接或间接地产生作用[11-13]。

在针刺治疗高血压的临床病例中,取穴多集中于手足阳明经上[14-16]。阳明经本身多气多血,《素问·太阴阳明论》中提到:“阳明者,表也,五藏六府之海也,亦为之行气于三阳”,是脏腑气血的生化之源,人体阳气的通达之所。《灵枢·根结》:“足阳明根于厉兑,溜于冲阳,注于下陵,入于人迎、丰隆也。”人迎为足阳明胃经之穴,胃为腑,以此通六腑之气,为脉气起始之处,有调畅气血之功。足三里为通治内腑的下合穴,足阳明胃经经气所入之穴,《灵枢·海论》:“胃者,水谷之海,其输上在气街,下至三里。”与脾经互表里合于土,健脾土旺既可伏火,亦可使阳气归根。手阳明大肠经合穴曲池,与足三里同合于土,善理气血共调脾胃,有疏经通络、清热降火之效。从现代解剖学和机制研究角度分析,人迎穴位于双侧颈部喉结旁开约1.5寸,胸锁乳突肌的前缘,颈总动脉搏动处。其解剖位置在颈动脉分叉处,该处分布有动脉窦压力感受器。通过抑制血管运动中枢和兴奋迷走神经中枢,使心率减慢,心肌收缩力减弱,扩张了外周血管使心排血量减少,从而使外周阻力降低血压下降[17]。针刺SHR的足三里和曲池穴有较好的降压效果,可能通过体液调节促进血管内皮舒血管物质的释放,抑制缩血管活性物质的分泌,直接或间接地调控血压水平,并且对靶器官损害有一定的预防和延缓作用[18-20]。

在针刺过程中影响治疗效果的因素有很多,包括穴位的选择、针刺的手法以及腧穴与腧穴配伍之间所产生的效应[21-25]。在治疗同一疾病时,选择不同的腧穴可能会产生相似的疗效,周慧等[26]在针刺干预高血压大鼠过程中观察到太冲组的降压效应要高于其他单穴及非穴组,且随时间的累积效果持续,从单穴对比疗效中可以看出太冲穴可以作为降压的主要穴位。忻尚平等[27]在观察不同穴位配伍针刺的降压效果时发现,以足三里为主穴的同名经配穴在对SHR大鼠的降压效应上产生了较好的协同作用,其中针刺足三里配曲池穴的稳定性与持续性最佳。在临床上,针刺治疗疾病以多穴位的组合为主,而腧穴组合中基础方的选择多由文献的查阅以及临床经验的传承来进行筛选,其中配伍的规律缺乏一定的研究依据。通过本实验结果表明,针刺不同腧穴组均有一定的降压疗效。治疗前,模型组与各干预组之间比较,差异无统计学意义(＞0.05),具有可比性。针刺干预1周后,人迎组、人迎和曲池组、人迎和足三里组以及三穴配伍组较针刺前收缩压均有下降,对比模型组,差异有统计学意义(＜0.05);说明人迎加减的配伍组在较短的时间内有良好的降压效果,在临床上针刺人迎穴的即刻血压下降明显[28];第2周治疗结束后观察血压值发现,除曲池组外,其他各针刺组与三穴配伍组比较差异无统计学意义(＞0.05);说明除曲池组外,各针刺组的降压水平在治疗2周后相当,单穴组、双穴组和三穴配伍组的血压下降幅度无明显差异;针刺3周后,各单穴组以及曲池和足三里组与三穴配伍组的降压效果比较差异有统计学意义(＜0.05);可以看出针刺配伍组的治疗效果较单穴组开始逐渐发挥作用,而曲池和足三里组较模型组有降压疗效,但其配伍效果低于人迎加减的配伍组;4周治疗结束后,各针刺组较模型组差异均有统计学意义(＜0.01),而其中三穴配伍组的降压效果最为明显;说明针刺治疗高血压大鼠有一定的降压疗效,穴位配伍所产生的效应可能大于单穴组。

本实验结果中,各针刺组与模型组CGRP、ET-1、AngⅡ含量比较,差异均有统计学意义(＜0.05,＜0.01);说明针刺的降压效应可能与血清中的CGRP、ET-1、AngⅡ含量有关;与单穴组和曲池＋足三里组比较,人迎＋曲池组、人迎＋足三里组和三穴配伍组的CGRP含量明显上升,而且3个针刺组之间差异性不大,可以看出不同的穴位配伍产生不同的作用水平,针刺人迎配伍不同穴位组的降压机制可能与CGRP因子有关;而三穴配伍组的ET-1和AngⅡ含量较单穴及双穴组下降明显,这可能与穴位配伍的综合效应有关。

综合来看,各针刺组均可显著降低SHR大鼠收缩压,并且可有效调节SHR大鼠血清中的CGRP、ET-1、AngⅡ含量,其中以针刺人迎、曲池、足三里的穴位配伍效果最佳,不同的针刺组合也会随着干预时间的不同产生不同的降压效应。在临床上穴位配伍十分重要,其临床疗效较单穴更有优势。李贞晶[29]认为组穴的作用更多倾向于单个穴位特有激活区域的组合,不是刺激单个穴位时出现的共同作用。本实验从部分机制角度观察到穴位组合的有效性,但是高血压的发病机制复杂,血压的调节与心血管活动中枢关系密切,有学者[30]通过PET脑功能成像技术发现针刺人迎穴对SHR大鼠的中枢降压效应可能是通过激发相关多个脑区的功能来发挥双向良性调节作用,还需进一步探讨穴位配伍与中枢机制的关联性。

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Effect of Acupuncture at Different Prescriptions of Acupoints on Blood Pressure and Serum CGRP, ET-1 and AngⅡ Levels in SHR

-1,-1,-2,-2,-1,-1.

1.,030006,; 2.,300193,

To investigate the effect of acupuncture at different prescriptions of acupoints on SHR blood pressure and serum active factors to find an acupoint prescription with the best effect.Seventy-two nine-week-old male SHRs were randomized to nine groups, namely model, Renying, Quchi, Zusanli, Quchi plus Zusanli, Renying plus Zusanli, Renying plus Quchi and three-acupoint combination groups, eight rats each. A blank control group composed of eight Wistar-Kyoto (WKY) rats was not treated with acupuncture. Blood pressure was measured once every seven days and compared between the groups. Serum angiotensin Ⅱ (Ang Ⅱ), calcitonin gene related peptide (CGRP) and endothelin-1 (ET-1) contents were measured in the rats after 14 weeks of age.After one week of acupuncture, blood pressure decreased in the Renying, Renying plus Quchi, Renying plus Zusanli and three-acupoint combination groups compare with before (＜0.05) and with the model group (＜0.05). After four weeks of acupuncture, blood pressure decreased in every acupuncture group compared with the model group (＜0.05,＜0.01) and had a statistically significant difference compared with the three-acupoint combination group (＜0.05,＜0.01). After acupuncture, there were statistically significant differences in serum CGRP, ET-1 and Ang Ⅱ contents between every acupuncture group and the model group (＜0.05,＜0.01), and between every acupuncture group and the three- acupoint combination group except CGRP in the Renying plus Quchi and Renying plus Zusanli groups (＜0.05).Acupuncture at different prescriptions of acupoints can reduce SHR blood pressure. The hypotensive effect is more marked in the three-acupoint (Renying, Quchi and Zusanli) combination group than in the other acupoint groups. Its mechanism of action may be through regulating serum CGRP, ET-1 and Ang Ⅱ contents.

Acupuncture therapy; Hypertension; SHR; CGRP; ET-1; Ang Ⅱ

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2020.01.0084

1005-0957(2020)01-0084-06

2019-06-11

国家自然科学基金项目(81673887)

崔依依(1992—),女,2016级硕士生

冀来喜(1964—),男,教授,博士,Email:tyjilaixi@126.com