全自动血型检测系统在无偿献血者血液检测中的应用及其临床价值探讨

宋飞峰 吴安明 张柳英 欧靖 杨倩

(黔南州中心血站 1.行政科，2.检验科，贵州黔南 558000)

对无偿献血者血液标本中的不规则抗体、Rh(D)、ABO 血型检测是血站血液筛查的重点工作，Rh(D)血型、ABO 血型鉴定的要求是准确率100%，因其会对输血患者的生命安全造成直接的影响。ABO 定型的方法主要有梯型板法、U 型板法、试管法、纸片法等。常规的试管法、纸片法检测效率较低，且结果容易受到主观因素影响，另外，不能进行较长时间的保存，也无法进行批量血型检测[1]。全自动血型检测系统不仅可以提高血液标本检测效率，而且还能减少由于人为原因导致的差错发生，有利于保证输血患者的生命安全。因此，应用高效率、高通量、结果精确的自动化检测系统对于提高血液标本质量非常重要。全自动血型检测系统省时省力，可以减少人为失误的发生，使最终的结果判断更加直接、客观，数据可以长时间进行保存，近几年在无偿献血标本中应用越来越广泛[2]。我站在无偿献血者血液检测中，使用全自动血型检测系统进行检测，检测结果准确、可靠，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源

选取2019 年本站无偿献血者2 634 例，对所有献血者的血液样本进行全自动血型检测系统检测、试管法检测、U 形微板法检测。2 634 例献血者中，男1 661 例，女973 例；年龄18～55 岁，平均年龄（33.3±1.2）岁；均知晓并同意此次检测。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂

试剂主要有血清抗A、抗B（上海血液生物医药有限公司提供）；Rh(D)（德国Biotest 公司提供）；A 细胞、B 细胞、O 细胞悬液（2%，北京金豪制药股份有限公司提供）[3]。

1.2.2 仪器、材料

全自动血型检测系统、预稀释板、0LYMPUS120孔V 型梯度板。

1.2.3 试管法

严格按照全国临床检验规程进行此操作，应用可调微量移液器在试管中加入自制的血浆、新鲜红细胞，离心1min 后进行轻微震荡观察，如果存在细沙状或者是凝块则为凝集，反之为不凝集[4]。

1.2.4 U 形微板法

U 型微板法又叫做半自动法，主要是根据红细胞通过微板在盐水介质中凝集的原理进行，在U 型微板上经过全自动样本加样仪(ML-STAR)对标本与试剂进行处理。反定型板布局为Oc、Bc、Ac，每块样板检测标本30 份，正定型布局抗-A、抗-B，每块样板检测标本44 份；Rh(D)检测在单独的微板上，Rh(D)与正、反定型检测样本与试剂的比例为30μL :50μL[5]。完成分配微板手工后将其转入到孵育振荡器中，选择转速400r、振荡6min、振幅3F；手工转移到平板离心机中，选择500r 转速离心1min；后将其转移到孵育振荡器中，选择转速1000r、振荡2min、振幅1F，后静置3min，使用HT3 酶标仪进行判读，同时通过ITSWELL 软件对结果进行分析与判断，同时用肉眼对结果符合性进行判断[6]。对可疑的标本进行重复检测，如果仍然无法对结果进行明确，后送到血型室进行确认。

1.2.5 全自动血型检测系统

编制加样程序，按照ABO 正、反定型、不规则抗体、Rh(D)检测。①Xantus 加样：取样本血浆13μl 加入3 孔，分别为不规则抗体1 孔、反定型2孔，分别加入30μl 的O 细胞悬液(2%)、B 细胞悬液(2%)、A 细胞悬液(2%)。②将16μl 红细胞样本与450μl 生理盐水混合，使之形成红细胞悬液，再分别取25μl 加入到两孔中，再次加入生理盐水对抗A、抗B 血清进行稀释，各25μl[7]。③Rh(D)在另一块V 型梯度板中单独进行，将稀释好的红细胞悬液25μl 加入到V 型板孔中，再次加入生理盐水1 :20 稀释25μl 的Rh(D)试剂。④加样完成后充分振荡10s，放到室温下静置1h 后自动对结果进行判读[8]。

1.2.6 结果判断

U 形微板法、试管法：阳性：有凝集；阴性：无凝集。全自动血型检测系统：对血型进行自然沉降反应，根据孔底透光率对结果进行判断。阳性：细胞均匀的分布在V 型孔底；阴性：细胞沉降且主要聚集在孔底中央；Rh(D)血型、ABO 正反定型血型相同且正常后对血型进行判断，如果结果不相同，则进行进一步鉴定[9]。

1.3 观察指标

（1）比较试管法与全自动血型检测系统检测结果符合率。

（2）比较全自动血型检测系统检测与U 形微板法检测结果。

（3）比较全自动血型检测系统检测与U 形微板法Oc 凝集发现的盐水不规则抗体参比结果。

（4）比较全自动血型检测系统检测与U 形微板法对倍比稀释后血浆反定型检测结果。

（5）比较全自动血型检测系统检测与U 形微板法对溶血、脂血标本检查结果。

1.4 统计学方法

数据应用SPSS 18.0 进行分析，其中计数进行χ2检验，计量数据进行t检验，P＜0.05 提示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 试管法与全自动血型检测系统检测结果符合率对比

从2 634份样本中抽取480份样本的Rh(D)血型、ABO 正反定型血型进行试管法与全自动血型检测系统检测，符合率为100%，见表1。

2.2 全自动血型检测系统检测与U 形微板法检测结果对比

在2 634 份样本中，有10 份样本正反定型不符，通过血型室检测有2 份为亚型，其中的1 份送至相关血液中心血液研究所，发现该标本为少见的cisAB 型，通过PCR-SSP 分型法进行进一步检测发现，该标本确定为cisAB 中的01 型，同时进行DNA 基因测序后，发现该献血者的血型为001 型与cisAB01 型杂合，同时发现该标本中有cisAB01型的803G＞C、467C＞T、467C＞T 典型变异，同时还有724C＞T 的突变，抗体减弱有1 份，不规则抗体阳性6 份；检出的Rh(D)阴性有3 份，通过血型室确定为阴性，一次结果判断准确性为100%。U 形微板法检出的正反定型不符有43 份，有38 份经过试管法检测与全自动血型检测系统检测与判读结果相同，还有3 份经过血型室确定为不规则抗体阳性；Rh(D)阴性检出2 份，经过血型室确定为阴性，见表2。

2.3 全自动血型检测系统检测与U 形微板法Oc 凝集发现的盐水不规则抗体参比结果对比

全自动血型检测系统检测Oc 凝集结果与正反定型不符的例数多于U 形微板法检测结果，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

2.4 全自动血型检测系统检测与U 形微板法对倍比稀释后血浆反定型检测结果对比

随着稀释倍数的增加，全自动血型检测系统检测的阳性率比U 形微板法检测的阳性率高，见表4。

2.5 全自动血型检测系统检测与U形微板法对溶血、脂血标本检查结果对比

全自动血型检测系统判断正确率高于U 形微板法，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表5。

表1 试管法与全自动血型检测系统检测结果符合率对比（例）

表2 U 形微板法检测与全自动血型检测系统检测结果对比（例）

表3 全自动血型检测系统检测与U 形微板法Oc 凝集发现的盐水不规则抗体参比结果对比[例（%）]

表4 全自动血型检测系统检测与U 形微板法对倍比稀释后血浆反定型检测结果对比

表5 全自动血型检测系统检测与U 形微板法对溶血、脂血标本检查结果对比[例（%）]

3 讨论

3.1 临床血液标本检测现状

随着无偿献血人数的不断增加，提高血液标本检测质量非常重要，血液的安全对输血患者的生命安全有直接的影响，且Rh(D)血型、ABO 血型的准确率必须达到100%[10]。

3.2 全自动血型检测系统检测在无偿献血标本检测中的应用

无偿献血标本检测在临床上属于重要工作，临床上一般鉴定血型的方法为试管法，该方法是鉴定Rh(D)血型、ABO 血型的经典方法，结果比较准确、可靠，但是操作步骤不够规范、科学，很容易使大量的样本无法很好地处理与长时间保存[11]。U 型微板法是临床上检测血液血型的常规方法，主要用于血站血型鉴定，但是，该方法的全自动加样仪需要试剂与标本，还需要一系列其他的步骤,比如结果比对、比色、振荡、微板离心等都需要人为进行操作，操作人员的操作水平与临床经验会对最终的血型鉴定结果造成直接的影响[12]。全自动血型检测系统是近些年兴起的一种血型检测方法，不管是加样还是判定，整个过程都是通过血型仪完成，同时在进行试验的期间，CCD 成像结果、凝集结果会进行自动保存，全部过程都可以进行监控，可以真正达到全自动血型检测，有效减少了人为因素导致的误差发生[13]。本研究显示，从2 634 份样本中抽取480 份样本的Rh(D)血型、ABO 正反定型血型进行试管法与全自动血型检测系统检测，符合率为100%，这就说明，在无偿献血者血液检测中，应用全自动血型检测系统检测，检测结果准确、可靠，且有效减少了由于人为原因所导致的误差发生。

研究显示，随着稀释倍数的增加，全自动血型检测系统检测的阳性率比U 形微板法检测的阳性率高，这就说明，在无偿献血者血液检测中，应用全自动血型检测系统检测，检测结果准确度、灵敏度较高，且对每一份标本均进行全自动血型检测系统检测，有效降低了血型试剂成本，提高了准确率。

红细胞血型不规则抗体是导致输血患者发生交叉配型困难、血型鉴定困难、输血出现不良反应的主要原因[14]。临床为了提高输血标本的质量，减少为输血患者输注不规则抗体血液，保证患者生命安全，使用全自动血型检测系统检测，检测结果显著，可以检出血液中的盐水不规则抗体，提高了血液标本安全性[15]。本研究显示，全自动血型检测系统检测Oc 凝集结果与正反定型不符的例数多于U 形微板法检测结果(P＜0.05)，在2 634 份样本中，有10份样本正反定型不符，通过血型室检测有2 份为亚型，其中的1 份送到了相关血液中心研究室，发现该标本为少见的cisAB 型，通过PCR-SSP 分型法进行进一步检测，该标本确定为cisAB 中的01 型，同时进行DNA 基因测序后，发现该献血者的血型为001 型与cisAB01 型杂合，同时发现该标本中有cisAB01 型的803G＞C、467C＞T、467C＞T 典型变异，同时还有724C＞T 的突变，抗体减弱有1 份，不规则抗体阳性6 份。检出的Rh(D)阴性有3 份，通过血型室确定为阴性，一次结果判断准确性为100%。U 形微板法检出的正反定型不符有43 份，有38 份经过试管法检测与全自动血型检测系统检测与判读结果相同，还有3 份经过血型室确定为不规则抗体阳性；Rh(D)阴性检出2 份，经过血型室确定为阴性。这就说明，对无偿献血者血液标本进行检测时，应用全自动血型检测系统检测，可以对盐水不规则抗体进行初筛，更容易检出血液标本中的盐水不规则抗体，从而提高了血液标本质量，保证了输血患者生命安全。

3.3 全自动血型检测系统检测在无偿献血标本检测中对准确率的影响

研究显示，全自动血型检测系统判断正确率高于U 形微板法(P＜0.05)，这就说明，对无偿献血者血液标本进行检测时，应用全自动血型检测系统检测，可以提高结果判读准确性。常规检测方法出现判读误差后，需要工作人员进一步进行试管法确定，这从一定程度上增加了工作人员的工作量，同时还延误了报告的输出时间。应用全自动血型检测系统，可以显著提高溶血标本、脂血标本的检测准确率，这主要与全自动血型仪所使用的试剂量较少、标本血浆量较少、反应体积较小、生理盐水的稀释都有很大的关系，从而降低了结果判读误差率。另外,全自动血型仪判读时从板底进行，有效降低了上清液的浑浊程度，提高了判读结果准确性。

综上所述，无偿献血者血液检测中，全自动血型检测系统的检测结果准确可靠，应该在临床上广泛推广与应用。