血清miR-155 miR-122在丙型肝炎患者中的表达及其临床意义

赵 婧 徐微微 李会平 周红艳

丙型肝炎是一种由丙型肝炎病毒(hpatitis C virus,HCV)感染引起的病毒性肝炎，易转变为慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)，且多数患者可能发展为肝硬化甚至肝癌，对患者的生命健康造成极大危害[1]。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一类具有调控功能的非编码RNA片段，在丙型肝炎患者中存在不同的miRNA异常表达，miRNA可能与丙型肝炎的发病过程有关[2]。研究[3-4]指出，miR-155及miR-122表达水平与HCV的感染和致病密切相关，参与介导肝细胞的发育及肝细胞免疫应答等多种生理功能，在肝癌的发生发展中起着重要作用。本研究通过检测丙型肝炎患者血清miR-155及miR-122表达水平，分析miR-155及miR-122诊断肝癌的价值，以期为肝癌的治疗提供帮助。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年1月至2020年1月河北省唐山市中心血站和唐山市人民医院收治的128例HCV感染的丙型肝炎患者，根据《丙型肝炎防治指南》[5]中的诊断标准，分为CHC组 (52例)、肝硬化组(45例)与肝癌组(31例)。另选择同期健康体检正常者50例作为对照组。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：①符合《丙型肝炎防治指南》[5]中的诊断标准者；②自愿参与本次研究者。排除标准：①其他类型肝病、感染性疾病、恶性肿瘤及自身免疫性疾病者；②孕妇或妊娠期妇女。本研究经医院伦理委员会通过，患者或家属签署知情同意书。

1.3 方法 丙型肝炎患者在治疗前采集标本，对照组在体检时采集标本，所有研究对象均采集空腹静脉血5 mL，置于未加抗凝剂的离心管中，以离心半径13.5 cm，3 500 r/min离心10 min，分离血清，-80℃低温冰箱保存待测。使用ABI 7500型荧光定量PCR仪，采用RT-PCR技术检测HCV-RNA载量。应用日立7600 型全自动生化分析仪及配套试剂检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)水平。采用ABI 7500型荧光定量PCR仪(美国ABI公司)应用实时荧光定量PCR(real time PCR, RT-PCR)技术检测miR-155及miR-122水平。反应体系为20 μL∶1 μL 引物及探针Mix(20×)，10 μL TaqMan通用混合物溶液(2×)，1.33 μL反向转录脱氧核糖核酸，7.67 μL双蒸水；扩增条件：95℃预变性10 min、95℃变性15 s、60℃退火60 s进行45个循环。采用2-△△Ct法计算miR-155及miR-122的相对表达水平。

1.4 观察指标 观察比较各组对象血清ALT、AST、HCV-RNA、miR-155及miR-122水平，分析血清miR-155及miR-122表达水平诊断肝癌的价值，并采用Pearson相关分析miR-155与miR-122的相关性。

2 结果

2.1 4组对象一般资料比较 与对照组比较，肝癌组、肝硬化组和CHC组ALT及AST水平均升高，差异有统计学意义(P<0.001)；肝癌组、肝硬化组和CHC组ALT、AST及HCV-RNA水平两两比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。4组对象性别、年龄、身体质量指数及HCV-RNA等进行比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 4组对象一般资料比较

2.2 4组对象血清miR-155及miR-122表达水平比较 肝癌组、肝硬化组与CHC组患者血清miR-155及miR-122表达水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；肝癌组患者血清miR-155及miR-122表达水平均高于CHC组和肝硬化组，差异有统计学意义(P<0.001)。CHC组和肝硬化组患者血清miR-155及miR-122表达水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 4组对象血清miR-155及miR-122表达水平比较

2.3 miR-155、miR-122单项及联合诊断肝癌的价值 以miR-155及miR-122为检验变量，以肝癌为状态变量(肝癌31例，CHC组、肝硬化组97例非肝癌患者为对照)，诊断金标准为肝癌病理结果，绘制ROC曲线，探讨miR-155、miR-122单项及二者联合对肝癌诊断的价值。其中miR-155及miR-122的曲线下面积(area under curve，AUC)均大于0.8，准确性较高，将miR-155及miR-122二者联合，其诊断肝癌的AUC为0.937，敏感度为97.24%，特异度为85.80%(P<0.001)。见表3、图1。

2.4 肝癌组患者血清miR-155表达水平与miR-122的相关性分析 Pearson相关分析显示，肝癌组患者血清miR-155表达水平与miR-122呈正相关(r=0.803，P<0.001)。见图2。

表3 miR-155、miR-122单项及联合诊断肝癌的价值

图1 miR-155、miR-122单项及联合诊断肝癌的ROC曲线

图2 肝癌组患者血清miR-155表达水平与miR-122的相关性

3 讨论

丙型肝炎是临床上常见的传染病之一，已成为严重的社会和公共卫生问题。miRNA是一类参与基因转录后调控的小分子 RNA，可通过与HCV RNA基因组的相互作用或通过间接控制与病毒复制相关的宿主途径来直接调节HCV复制，从而最终诱发HCV相关的肝病[6]。研究[7]指出，miR-155在肝癌细胞中是一个直接的下游靶点和功能介质，可促进肝癌细胞增殖、细胞周期和凋亡，可能成为肝癌的一个新的预后标志物和治疗靶点。马仁舒等[8]研究表明，miR-122是肝癌的启动子，其在肝细胞癌中的表达与肿瘤细胞増殖、迁移、侵袭能力及预后相关，可能是肝癌诊断和预后的非侵入性生物标志物。

本研究结果显示，肝癌组、肝硬化组与CHC组患者血清miR-155及miR-122表达水平均高于对照组，且肝癌组高于CHC组、肝硬化组。提示miR-155及miR-122表达水平升高与丙型肝炎患者的病情进展有关，可能参与丙型肝炎的发生发展过程。研究[9]发现，CHC患者miR-155水平显著高于健康对照组，提示miR-155可能参与CHC的发病过程，这有助于了解CHC的靶向治疗。李华民等[10]研究发现，与对照组相比，丙型肝炎患者血清miR-122的表达水平均升高，肝癌患者升高更显著，miR-122调控异常与丙型肝炎密切相关，监测miR-122表达可能有助于肝癌的诊断。本研究ROC曲线分析显示，miR-155及miR-122二者联合诊断肝癌的AUC最大，其敏感度最高。本研究结果显示，肝癌组患者血清miR-155表达水平与miR-122呈显著正相关。表明miR-155及miR-122表达水平二者联合检测有助于提高肝癌的诊断效能。Ning等[11]研究显示，与正常肝组织和健康对照者比较，肝癌组织和血清中miR-155表达水平升高，miR-155对肝癌的诊断具有较高的敏感度和特异度，可能是肝癌诊断的一个潜在的生物标志物。另有研究[12]表明，在感染HCV患者中，血清miR-122表达水平升高，miR-122有望成为HCV相关性肝病新的抗病毒药物靶点或新的诊断生物标志物。

综上所述，丙型肝炎患者血清miR-155及miR-122表达水平明显升高，miR-155及miR-122二者联合对诊断HCV感染导致的肝癌具有较好的价值。但本研究样本量小，影响miR-155及miR-122因素较多，未来仍需更多的临床研究来验证。