老翘的化学成分研究

陈梦莹，李 钦，韩晶晶，李晓娅，张 峰

河南大学药学院，开封 475004

连翘为木犀科连翘属植物连翘(Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl)的干燥成熟果实[1]。早在《本草图经》中就有记载，其味苦，性微寒，归肺、心、小肠经，具有清热解毒、消肿散结之功效，常用于风热感冒、温病初起、温热入营、高热烦渴、热淋尿闭、痈疽、瘰疬、乳痈、丹毒和肿毒等症。连翘主要分布于我国山西、陕西、山东、安徽西部、河南等地。连翘的化学成分主要为挥发油，连翘苷，木脂素类为主。连翘又根据其果实成熟程度，可分为青翘和老翘[2]，目前有关青翘和老翘中化学成分研究相对较少。因此，为了细分连翘化合物成分研究，本次实验对老翘进行了化合物的提取与分离工作[3]以及抗肿瘤活性筛选，丰富了其化合物的种类。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

摇摆式高速万能粉碎机(林大机械有限公司)；JHBE-100A闪式提取器(智晶生物)；LC-6AD高效液相色谱仪-制备型(日本，岛津)；飞行质谱检测仪(日本)；Bruker Avance AV-500/300 型核磁共振仪(德国布鲁克公司)；Sephadex LH-20凝胶(Pharmacia公司)；柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶板(青岛海洋化工有限公司)；甲醇、乙腈(江苏汉邦科技有限公司，色谱纯)；其余化学试剂均为分析纯；HCT-116(人结直肠癌细胞株)、A549(人肺腺癌细胞株)购自南京凯基生物技术股份有限公司。

老翘(河南佐今明药业有限公司，批号20171209，产地为河南新乡)，经河南大学药学院袁王俊副教授鉴定。

1.2 提取与分离

本实验对老翘9 550 g，经粉碎机粉碎后按料液比(1∶10)，50%乙醇经闪式提取器提取，提取时间每次4 min(1档2 min，2档1 min，三档1 min)，闪式提取重复三次，旋转蒸发仪进行减压浓缩，合并滤液，浓缩至1 L，分别用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇进行分次萃取，对萃取液进行减压浓缩得到干浸膏，最终干燥称重得到石油醚部位(浸膏约322.78 g)、乙酸乙酯部位(451.72 g)、正丁醇部位(1 500 g)，剩余为水相部位。

然后通过对正丁醇部位进行提取分离。正丁醇部位：取600 g用D101大孔吸附树脂进行(10%、30%、50%、95%乙醇)梯度洗脱，经TLC检测合并，得到4个流分Frs.1～4。又对流分Fr.2(150 g)用二氯甲烷∶甲醇系统(10∶1)洗脱系统经硅胶柱进行梯度分离，在(10∶1)中直接分离得到了化合物9(28 mg)、13(9 mg)。10∶1比例中TLC检测合并相同流分得到3个流分Frs.1～3。在Frs.2(50 g)中又用ODS柱层析，洗脱剂采用甲醇∶水系统，梯度洗脱比例为10%、20%、40%、60%甲醇水比例，其中在20%甲醇水进行洗脱时分离得到化合物纯品为化合物1(168 mg)、2(83 mg)，40%甲醇水进行洗脱时分离得到化合物3(131 mg)、4(8 mg)。后经制备型HPLC(液相条件：0～60 min，水-乙腈40∶60，流速：3 mL/min)，得到化合物5(62 mg)、6(39 mg)、7(46 mg)、8(10 mg)。在二氯甲烷∶甲醇系统(5∶1)经硅胶柱进行梯度分离中经TLC检测合并，得到6个流分Frs.1～6。流分Fr.3(61 g)经制备型HPLC(液相条件：0～60 min，水-乙腈40∶60，流速：3 mL/min)，得到化合物10(44 mg)、11(21 mg)、12(11 mg)，Fr.6(83 g)中又用ODS柱层析，洗脱剂采用甲醇-水系统，梯度洗脱比例为10%、20%、40%、60%甲醇水比例，其中在20%甲醇水进行洗脱时分离得到化合物14(24 mg)、15(51 mg)、16(11 mg)、17(34 mg)。

1.3 MTT法检测细胞的增殖抑制率

取对数生长期细胞以1×105/mL将细胞悬液接种到96孔板中，90 μL/孔，37 ℃、5%CO2培养箱下培养12 h，使细胞稳定。设定空白组、阳性对照组(紫杉醇)，实验组加入不同浓度的药物(200、400、600、800、1 000、1 200、1 400 μg/mL)分别加入96孔板中，每个浓度设置6个平行复孔，继续培养48 h。在避光条件下每孔给予10 μL MTT(5 mg/mL)，继续置于37 °C、5%CO2培养箱中，4 h后，每孔加入100 μL DMSO，置摇床上震荡直至MTT反应的紫色结晶体产物甲瓒全部溶解。置于多功能酶标仪中，设置570 nm的波长下检测吸光度OD值，读出OD值带入公式中，求得细胞抑制率，并计算IC50值。实验重复3次。

细胞抑制率=[(对照组平均OD值-实验组

平均OD值)/对照组平均OD值]×100%

2 实验结果

2.1 结构鉴定

化合物1白色粉末；分子式C16H24O10；ESI-MS：m/z376 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.43(1H，s，H-3)，5.15(1H，d，J= 5.3 Hz，H-1)，5.05(1H，d，J= 7.2 Hz，H-1′)，3.66(1H，dd，J= 11.0，7.1 Hz，H-10b)，3.46～3.38(1H，m，H-10a)，2.80～2.69(1H，m，H-5)，2.26～2.21(1H，m，H-9)，2.12～2.02(1H，m，H-8)，1.97～1.88(1H，m，H-7a)，1.80～1.70(1H，m，H-7b)，1.60～1.54(1H，m，H-6a)，1.47～1.37(1H，m，H-6b)；13C NMR(101 MHz，DMSO-d6)δ：97.4(C-1)，152.2(C-3)，110.8(C-4)，36.3(C-5)，33.6(C-6)，27.2(C-7)，41.3(C-8)，36.3(C-9)，61.2(C-10)，98.9(C-1′)，73.1(C-2′)，76.6(C-3′)，70.1(C-4′)，77.3(C-5′)，65.8(C-6′)，以上波谱数据与文献数据一致[4]，故鉴定化合物为五福花苷酸。

化合物2白色粉末；分子式C27H34O11；ESI-MS：m/z535 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.05(1H，d，J= 8.5 Hz，H-5)，6.97(1H，d，J= 2.0 Hz，H-2)，6.93(2H，dd，J= 5.1，3.3 Hz，H-2′，5′)，6.87(2H，ddd，J= 8.5，3.6，1.8 Hz，H-6，6′)，5.21(1H，d，J= 4.5 Hz，H-9′)，5.07(1H，d，J

图1 化合物1～17的化学结构Fig.1 Chemical structures of compounds 1-17

=3.8 Hz，H-9′)，4.88(1H，d，J= 7.0 Hz，H-1′′)，4.80(1H，d，J= 5.9 Hz，H-7′)，4.53(1H，t，J= 5.7 Hz，H-9eq)，4.38(1H，d，J= 6.8 Hz，H-7)，4.12～4.08(1H，m，H-9ax)，3.67(3H，s，3′-OCH3)，3.24(3H，s，4′-OCH3)，2.87～2.81(1H，dd，H-8)；13C NMR(101 MHz，DMSO-d6)δ：135.2(C-1)，110.4(C-2)，145.9(C-3)，148.9(C-4)，115.2(C-5)，118.1(C-6)，86.6(C-7)，54.0(C-8)，70.3(C-9)，55.6(C-OCH3-3)，131.1(C-1′)，109.4(C-2′)，147.5(C-3′)，148.4(C-4′)，117.5(C-5′)，111.5(C-6′)，81.2(C-7′)，49.3(C-8′)，68.9(C-9′)，100.1(C-1′′)，73.2(C-2′′)，76.8(C-3′′)，69.6(C-4′′)，77.0(C-5′′)，60.6(C-6′′)，以上波谱数据与文献数据一致[5]，故鉴定化合物为连翘苷。

化合物3白色粉末；分子式C27H30O16；ESI-MS：m/z610 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，MeOD-d4)δ：7.69～7.60(1H，m，H-6′)，5.11(1H，d，J= 7.4 Hz，H-Glc)，3.81～3.38(6H，m，H-2′′，6′′)，3.64(d，J= 4.0 Hz，H-2′′′)，3.55(1H，dd，J= 9.5，3.3 Hz，H-5′)，1.12(d，J= 6.1 Hz，H-CH3)；13C NMR(101 MHz，MeOD-d4)δ：158.4(C-2)，135.6(C-3)，179.3(C-4)，162.9(C-5)，99.9(C-6)，165.9(C-7)，94.8(C-8)，159.2(C-9)，105.5(C-10)，123.0(C-1′)，116.0(C-2′)，145.7(C-3′)，149.7(C-4′)，117.6(C-5′)，123.5(C-6′)，104.7(C-1′′)，75.7(C-2′′)，78.1(C-3′′)，71.3(C-4′′)，77.1(C-5′′)，68.5(C-6′′)，102.3(C-1′′′)，72.0(C-2′′′)，72.2(C-3′′′)，73.9(C-4′′′)，69.6(C-5′′′)，17.8(C-6′′′)，以上波谱数据与文献数据一致[6]，故鉴定化合物为芦丁。

化合物4白色粉末；分子式C26H32O11；ESI-MS：m/z521 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.16(1H，d，J= 8.3 Hz，H-5)，7.03(1H，d，J= 1.8 Hz，H-2)，6.93(1H，d，J= 1.8 Hz，H-2′)，6.90(1H，dd，J= 8.4，1.8 Hz，H-6)，6.79(1H，dd，J= 8.4，1.8 Hz，H-6′)，6.76(1H，d，J= 8.4 Hz，H-5′)，4.23(2H，m，H-9a，9′)，3.86(1H，s，H-3，3′OMe)，3.11(2H，m，H-8，8′)；13C NMR(101 MHz，CD3OD)δ：137.4(C-1)，110.9(C-2)，150.8(C-3)，147.2(C-4)，116.0(C-5)，119.7(C-6)，87.0(C-7)，55.2(C-8)，72.6(C-9)，133.7(C-1′)，111.6(C-2′)，149.0(C-3′)，147.4(C-4′)，117.9(C-5′)，120.0(C-6′)，87.4(C-7′)，55.4(C-8′)，72.6(C-9′)，102.7(C-1′′)，74.8(C-2′′)，77.7(C-3′′)，71.3(C-4′′)，78.1(C-5′′)，62.4(C-6′′)，56.4(C-OCH3)，以上数据与文献报道的一致[7]，故鉴定化合物(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物5白色粉末；分子式C26H32O11；ESI-MS：m/z520 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：8.85(1H，brs，H-4)，7.05(2H，d，J= 8.4 Hz，H-5)，6.96(2H，d，J= 1.9 Hz，H-2)，6.92(1H，d，J= 1.6 Hz，H-2′)，6.91(1H，dd，J= 8.3，1.6 Hz，H-6)，6.77(1H，d，J= 8.3 Hz，H-5′)，4.99(1H，d，J= 7.6 Hz，H-1″)，4.74(1H，d，J= 3.6 Hz，H-7)，4.70(1H，d，J= 4.3 Hz，H-7′)，4.27(2H，m，H-9a，9a′)，3.66(2H，m，H-9b，9′b)，3.45(1H，m，H-5″)，3.42(1H，m，H-2″)，3.40(1H，m，H-3″)，3.13(1H，m，H-6″a)；13C NMR(101 MHz，DMSO-d6)δ：135.3(C-1)，110.4(C-2)，148.9(C-3)，145.8(C-4)，115.2(C-5)，118.1(C-6)，86.6(C-7)，53.9(C-8)，70.2(C-9)，129.6(C-1′)，109.7(C-2′)，147.2(C-3′)，145.8(C-4′)，115.1(C-5′)，117.8(C-6′)，81.3(C-7′)，49.3(C-8′)，68.9(C-9′)，100.1(C-1′′)，73.1(C-2′′)，76.7(C-3′′)，69.6(C-4′′)，76.9(C-5′′)，60.5(C-6′′)，55.5(C-OCH3)，以上数据与文献报道的一致[8]，故鉴定化合物(+)-表松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物6白色粉末；分子式C26H32O12；ESI-MS：m/z536 [M+H ]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.14(2H，d，J= 8.0 Hz，H-5，5′)，6.67(2H，d，J= 1.6 Hz，H-2，2′)5.10～4.97(2H，dd，J= 8.0，1.6 Hz，H-6，6′)，4.84(2H，d，J= 7.6 Hz，H-Glu-1′′，1)，4.54(2H，d，J= 4.0 Hz，H-7，7′)，4.25(2H，dd，J= 8.8，6.8 Hz，H-9a，9′a)，3.77(6H，s，H-3′，OCH3)，3.07(2H，m，H-8，8′)；13C NMR(101 MHz，DMSO-d6)δ：132.4(C-1)，110.0(C-2)，148.5(C-3)，145.9(C-4)，115.1(C-5)，117.5(C-6)，81.1(C-7)，60.6(C-8)，70.3(C-9)，132.2(C-1′)，110.2(C-2′)，147.5(C-3′)，145.9(C-4′)，114.8(C-5′)，118.6(C-6′)，86.9(C-7′)，9(C-8′)，7(C-9′)，100.1(C-1′′)，73.2(C-2′′)，76.8(C-3′′)，69.6(C-4′′)，77.0(C-5′′)，55.5(C-OCH3)，以上数据与文献报道的一致[9]，故鉴定化合物(+)-羟基表松脂素-4′′-β-D-葡萄糖苷。

化合物7白色粉末；分子式C29H36O15；ESI-MS：m/z624 [M+H ]+；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.50(d，J= 15.9 Hz，H-1)，7.05(1H，brs，H-2)，6.76(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5)，7.00(1H，brs，H-6)，6.65(1H，d，J= 1.8 Hz，H-2)，6.63(1H，d，J= 7.8 Hz，H-5)，6.50(1H，dd，J= 7.8，1.8 Hz，H-6)，6.20(1H，d，J= 15.6 Hz，H-8)，4.54(1H，brs，H-1′′)，4.26(1H，d，J= 7.8 Hz，H-1′)，3.88(1H，m，H-7)；13C NMR(101 MHz，CD3OD)δ：131.4(C-1)，116.3(C-2)，146.0(C-3)，144.6(C-4)，117.1(C-5)，121.2(C-6)，36.6(C-7)，71.9(C-8)，104.4(C-1′)，74.7(C-2′)，75.1(C-3′)，72.3(C-4′)，75.8(C-5′)，67.6(C-6′)，102.2(C-1′′)，72.3(C-2′′)，72.2(C-3′′)，73.9(C-4′′)，69.8(C-5′′)，18.0(C-6′′)，127.6(C-1′′′)，115.2(C-2′′′)，147.6(C-3′′′)，149.6(C-4′′′)，116.5(C-5′′′)，123.0(C-6′′′)，146.7(C-7′′′)，114.7(C-8′′′)，168.2(C-9′′′)，以上数据与文献报道的一致[10]，故鉴定化合物连翘脂苷A。

化合物8白色粉末；ESI-MS：m/z625 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.58(1H，d，J= 16.0 Hz，H-7′)，7.06(1H，d，J= 1.6 Hz，H-2′)，6.94(1H，dd，J= 8.0，1.6 Hz，H-6′)，6.77(1H，d，J= 8.0，H-5′)，6.67(1H，d，J= 2.0 Hz，H-2)，6.66(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5)6.56(1H，dd，J= 8.0，2.0 Hz，H-6)，6.32(1H，d，J= 16.0 Hz，H-8′)，5.03(1H，t，J= 9.2 Hz，H-3′′)，4.73(1H，d，J= 0.8 Hz，H-1′′′)，3.99(1H，m，H-8)，3.98(1H，dd，J= 12.4，2.0 Hz，H-6′′)，3.71(1H，m，H-3′′′)，3.37(1H，t，J= 8.0 Hz，H-4′′′)，2.79(2H，m，H-7)，1.26(1H，d，J= 6.5 Hz，H-6′′′)；13C NMR(101 MHz，DMSO-d6)δ：169.0(C-1)，115.4(C-2)，149.5(C-3)，127.8(C-4)，115.1(C-5)，146.9(C-6)，146.7(C-7)，116.5(C-8)，122.8(C-9)，104.3(C-1′)，74.0(C-2′)，78.9(C-3′)，70.0(C-4′)，76.6(C-5′)，67.8(C-6′)，102.2(C-1′′)，72.1(C-2′′)，72.3(C-3′′)，73.4(C-4′′)，69.8(C-5′′)，18.0(C-6′′)，72.3(C-1′′′)，36.6(C-2′′′)，131.3(C-3′′′)，117.0(C-4′′′)，144.6(C-5′′′)，146.0(C-6′′′)，116.3(C-7′′′)，121.2(C-8′′′)，以上数据与文献报道的一致[11]，故鉴定化合物连翘新苷。

化合物9白色粉末；分子式C23H26O11；ESI-MS：m/z478 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.58(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7′′)，7.05(1H，d，J= 1.9 Hz，H-2′′)，6.90(1H，dd，J= 8.2，1.9 Hz，H-6′′)，6.79(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5′′)，6.67(1H，d，J= 2.0 Hz，H-2)，6.63(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5)，6.55(1H，dd，J= 8.0，2.0 Hz，H-6)，6.30(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8′′)，4.52(1H，dd，J= 11.9，1.8 Hz，H-6a′)，4.50(1H，dd，J= 11.9，1.8 Hz，H-6a′)，4.32(1H，m，H-6b′)，3.94(1H，m，H-8a)，3.70(1H，m，H-8b)，2.78(2H，t，J= 7.6 Hz，H-7)；13C NMR(101 MHz，CD3OD)δ：131.3(C-1)，117.0(C-2)，146.0(C-3)，144.5(C-4)，116.3(C-5)，121.2(C-6)，36.6(C-7)，72.3(C-8)，127.6(C-1′)，115.0(C-2′)，147.1(C-3′)，149.5(C-4′)，116.5(C-5′)，123.1(C-6′)，146.6(C-7′)，114.8(C-8′)，169.1(C-9′)，104.4(C-1′′)，74.9(C-2′′)，77.8(C-3′′)，71.6(C-4′′)，75.3(C-5′′)，64.5(C-6′′)，以上数据与文献报道的一致[12]，故鉴定化合物为木通苯乙醇苷B。

化合物10白色粉末；分子式为C26H32O12；ESI-MS：m/z559 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.02(1H，d，J= 1.5 Hz，H-2)，7.06(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5)，6.90(1H，dd，H-6)，6.95(1H，d，J= 1.5 Hz，H-2′)，6.70(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5′)，6.76(1H，dd，J= 1.5，8.0 Hz，H-6′)，4.88(1H，d，J= 7.5 Hz，H-Glu-1)，4.36(1H，t，J= 9.0 Hz，H-9′)，3.77(3H，s，H-OCH3-3)，3.75(3H，s，H-OCH3-3′)，3.02(1H，m，H-8′)；13C NMR(101 MHz，CD3OD)δ：128.9(C-1)，111.8(C-2)，148.6(C-3)，147.3(C-4)，115.6(C-5)，120.1(C-6)，89.1(C-7)，92.7(C-8)，76.1(C-9)，56.3(C-OCH3-3)，137.1(C-1′)，112.6(C-2′)，150.7(C-3′)，147.4(C-4′)，117.7(C-5′)，121.5(C-6′)，87.2(C-7′)，62.4(C-8′)，71.9(C-9′)，56.7(C-OCH3-3′)，102.6(C-Glc-1′′)，74.8(C-Glc-2′′)，77.7(C-Glc-3′′)，71.2(C-Glc-4′′)，78.0(C-Glc-5′′)，62.3(C-Glc-6′′)，以上数据与文献报道的一致[13]，故鉴定化合物为(7R，8S，7′R，8′S)-8-hydroxypinoresinol-4-O-β-D-glucopyranoside。

化合物11白色粉末；分子式为C23H26O11；ESI-MS：m/z478 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.60(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7′′)，7.06(1H，d，J= 1.9 Hz，H-2′′)，6.96(1H，dd，J= 8.2，1.9 Hz，H-6′′)，6.77(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5′′)，6.67(1H，d，J= 2.0 Hz，H-2)，6.63(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5)，6.53(1H，dd，J= 8.0，2.0 Hz，H-6)，6.30(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8′′)，4.37(1H，m，H-6b′)，3.94(1H，m，H-8a)，3.85(1H，m，H-8b)，3.23(1H，m，H-2′)，3.38(1H，m，H-3′)，3.36(1H，m，H-4′)，3.52(1H，m，H-5′)，2.80(2H，t，J= 7.6 Hz，H-7)；13C NMR(101 MHz，CD3OD)δ：131.4(C-1)，117.1(C-2)，146.0(C-3)，144.5(C-4)，116.2(C-5)，121.2(C-6)，72.1(C-7)，36.5(C-8)，127.6(C-1′)，115.2(C-2′)，147.6(C-3′)，149.6(C-4′)，116.5(C-5′)，123.0(C-6′)，146.7(C-7′)，114.6(C-8′)，168.5(C-9′)，104.2(C-1′′)，75.1(C-2′′)，76.0(C-3′′)，72.4(C-4′′)，75.7(C-5′′)，62.3(C-6′′)，以上数据与文献报道的一致[14]，故鉴定化合物为木通苯乙醇苷A。

化合物12白色粉末；ESI-MS：m/z501 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.61(1H，d，J= 15.9 Hz，H-β′′)，7.08(1H，d，J= 0.6 Hz，H-2′′)，6.96(1H，dd，J= 8.1 Hz，H-6′′)，6.79(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5′′)，6.70(1H，d，J= 2.1 Hz，H-2)，6.67(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5)，6.57(1H，dd，J= 8.1，2.1 Hz，H-6)，6.33(1H，d，J= 15.6 Hz，H-α′′)，5.05(1H，t，J= 9.3 Hz，H-3′)，4.42(1H，d，J= 7.8 Hz，H-1′)，3.93～3.85(1H，m，J= 12，2.4 Hz，H-6′)，3.79～3.68(2H，m，H-α)，3.54(1H，t，J= 9.3 Hz，H-4′)，3.38(1H，m，H-5′)，2.79(2H，m，H-β)；13C NMR(101 MHz，CD3OD)δ：131.4(C-1)，117.0(C-2)，146.7(C-3)，144.6(C-4)，116.2(C-5)，121.2(C-6)，69.8(C-7)，36.5(C-8)，127.8(C-1′)，115.4(C-2′)，146.9(C-3′)，149.4(C-4′)，116.4(C-5′)，122.8(C-6′)，146.0(C-7′)，115.1(C-8′)，169.0(C-9′)，104.2(C-1′′)，73.5(C-2′′)，78.9(C-3′′)，72.1(C-4′′)，77.7(C-5′′)，62.3(C-6′′)，以上数据与文献报道的一致[15]，故鉴定化合物为车前草苷A。

化合物13白色粉末；分子式为C20H30O12；ESI-MS：m/z462[M+Na]+；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：2.77(2H，m，H-7)，4.26(1H，m，H-8a)，4.74(1H，m，H-8b)，6.57(1H，dd，J= 7.8，2.1 Hz，H-6)，6.72(1H，d，J= 7.8 Hz，H-5)，6.60(1H，d，J= 2.1 Hz，H-2)，1.25(3H，d，J= 6.2 Hz，H-6′′)；13C NMR(101 MHz，CD3OD)δ：134.4(C-1)，111.1(C-2)，150.6(C-3)，147.0(C-4)，117.7(C-5)，119.2(C-6)，82.4(C-7)，58.6(C-8)，69.0(C-9)，128.9(C-1′)，112.7(C-2′)，148.6(C-3′)，147.4(C-4′)，115.6(C-5′)，121.6(C-6′)，90.7(C-7′)，91.5(C-8′)，76.8(C-9′)，102.7(C-1′′)，74.8(C-2′′)，78.1(C-3′′)，71.3(C-4′′)，77.7(C-5′′)，62.4(C-6′′)，56.3(C-OCH3)，以上数据与文献报道的一致[16]，故鉴定化合物为连翘酯苷E。

化合物14白色粉末；分子式为C26H34O11；ESI-MS：m/z545 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.13(1H，d，J= 8.3 Hz，H-5′)，6.98(1H，d，J= 1.7 Hz，H-2′)，6.88(1H，dd，J= 8.3，1.7 Hz，H-6′)，6.79(1H，d，J= 1.7 Hz，H-2)，6.71(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5)，6.63(1H，dd，J= 8.0，1.7 Hz，H-6)，4.00(1H，d，J= 7.6 Hz，H-4′)，3.86(1H，d，J= 6.4 Hz，H-7′)，3.85(1H，dd，J= 8.2，6.4 Hz，H-9a)，3.85(3H，s，H-OCH3-3)，3.82(3H，s，H-OCH3-3′)，3.72(1H，dd，J= 8.2，2.1 Hz，H-9b)，2.90(1H，dd，J= 13.4，4.7 Hz，H-7b)，2.50(1H，dd，J= 13.4，11.2 Hz，H-7a)；13C NMR(101 MHz，CD3OD)δ：133.4(C-1)，113.3(C-2)，150.8(C-3)，147.2(C-4)，116.1(C-5)，122.1(C-6)，33.6(C-7)，43.8(C-8)，73.6(C-9)，139.4(C-1′)，111.3(C-2′)，150.8(C-3′)，148.9(C-4′)，117.8(C-5′)，119.5(C-6′)，83.8(C-7′)，54.1(C-8′)，60.4(C-9′)，56.7(C-OCH3)，102.8(C-Glc-1′′)，74.9(C-Glc-2′′)，78.1(C-Glc-3′′)，71.3(C-Glc-4′′)，77.8(C-Glc-5′′)，62.4(C-Glc-6′′)以上数据与文献报道的一致[17]，故鉴定化合物为落叶松脂醇-4′-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物15白色粉末；ESI-MS：m/z482[M+Na]+；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：3.15(2H，t，J= 7.2 Hz，H-7)，3.91(1H，m，H-8a)，3.64(1H，m，H-8b)，4.25(1H，d，J= 7.8 Hz，H-1)，0.98(3H，brd，J= 6.0 Hz，H-6′′)，4.17(1H，d，J= 7.2 Hz，H-1)，7.09(1H，brs，H-2′′)，6.94(1H，brd，J= 7.8 Hz，H-6′′)，7.47(1H，d，J= 16.2 Hz，H-7′′)，6.14(1H，d，J= 16.2 Hz，H-8′′)；13C NMR(101 MHz，CD3OD)δ：69.1(C-1)，154.3(C-2)，127.9(C-3)，187.7(C-4)，127.8(C-5)，154.4(C-6)，40.9(C-7)，65.8(C-8)，104.3(C-1′)，75.3(C-2′)，77.8(C-3′)，71.6(C-4′)，74.9(C-5′)，64.6(C-6′)，131.1(C-1′′)，141.5(C-2′′)，28.5(C-3′′)，45.4(C-4′′)，24.4(C-5′′)，26.3(C-6′′)，168.7(C-7′′)，72.8(C-8′′)，27.0(C-9′′)，26.4(C-10′′)，以上数据与文献报道的一致[18]，故鉴定化合物为连翘酯苷G。

化合物16白色粉末；分子式为C29H36O15；ESI-MS：m/z625[M+Na]+；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.57(1H，d，J= 1.8 Hz，H-2)，6.65(1H，d，J= 8.4 Hz，H-5)，6.51(1H，dd，J= 8.4，1.8 Hz，H-6)，2.70(1H，m，H-7)，4.08(1H，d，J= 7.8 Hz，H-1′)，4.52(1H，brs，H-1′′)，1.14(1H，d，J= 6.6 Hz，H-6′′)，7.11(1H，brs，H-2)，6.81(1H，d，J= 7.2 Hz，H-5)，7.00(1H，brs，H-6)，7.59(1H，d，J= 16.0 Hz，H-7)，6.31(1H，d，J= 16.0 Hz，H-8)；13C NMR(101 MHz，CD3OD)δ：131.4(C-1)，117.0(C-2)，145.9(C-3)，144.5(C-4)，116.3(C-5)，121.5(C-6)，36.6(C-7)，71.9(C-8)，127.8(C-1′)，115.2(C-2′)，146.7(C-3′)，149.5(C-4′)，117.0(C-5′)，123.0(C-6′)，147.1(C-7′)，115.2(C-8′)，168.4(C-9′)，102.3(C-1′′)，75.1(C-2′′)，76.1(C-3′′)，71.7(C-4′′)，76.9(C-5′′)，67.8(C-6′′)，102.1(C-1′′′)，72.3(C-2′′′)，72.2(C-3′′′)，74.0(C-4′′′)，69.8(C-5′′′)，18.0(C-6′′′)，以上数据与文献报道的一致[19]，故鉴定化合物为连翘酯苷H。

化合物17白色粉末；分子式为C27H34O11；ESI-MS：m/z534[M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.14(2H，dd，J= 2.0 Hz，H-2，2′)，6.90(2H，d，J= 8.2 Hz，H-5，5′)，6.69(2H，dd，J= 8.2，2.0 Hz，H-6，6′)，4.91(1H，d，J= 8.0 Hz，H-1′′)，3.74(3H，s，H-OCH3)，3.75(3H，s，H-OCH3)，3.77(3H，s，H-OCH3)，4.62(2H，d，J= 4.4 Hz，H-7，7′)，3.08(2H，m，H-8，8′)，4.21(2H，dd，J= 9.0，4.0 Hz，H-9a，9′a)，3.85(2H，dd，J= 9.0，6.6 Hz，H-9b，9′b)；13C NMR(101 MHz，DMSO-d6)δ：135.1(C-1)，110.5(C-2)，148.9(C-3)，145.8(C-4)，115.1(C-5)，118.1(C-6)，84.8(C-7)，53.6(C-8)，71.0(C-9)，133.8(C-1′)，109.8(C-2′)，148.7(C-3′)，148.1(C-4′)，111.5(C-5′)，118.1(C-6′)，84.9(C-7′)，53.6(C-8′)，71.0(C-9′)，100.1(C-1′′)，73.1(C-2′′)，76.8(C-3′′)，69.6(C-4′′)，77.0(C-5′′)，60.6(C-6′′)，55.4(C-OCH3)，以上数据与文献报道的一致[20]，故鉴定化合物为(+)松脂素单甲基醚-β-D-葡萄糖甙。

2.2 MTT法检测细胞的增殖抑制作用结果

通过对化合物1～17进行MTT筛选，结果表明，17个化合物均没有抑制肿瘤细胞增殖作用。

3 讨论

迄今为止，从该属植物中分离的化学成分主要为苯乙醇苷类、木脂素及其苷类、乙基环己醇及其苷类、黄酮类、有机酸类、萜类、甾醇类、挥发油类等化合物[21]。本次从老翘正丁醇提取物中分离得到17个化合物，利用理化性质及光谱特征鉴定了17个化合物的结构，其中包括六个木脂素类化合物、一个黄酮类化合物、六个苯乙醇苷类化合物、一个萜类化合物，及其他类型化合物。以上化合物中(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、(+)-羟基表松脂素-4′′-β-D-葡萄糖(6)、木通苯乙醇苷B(9)、(7R，8S，7′R，8′S)-8-hydroxypinoresinol-4-O-β-D-glucopyranoside(10)、落叶松脂醇-4′-O-β-D-葡萄糖苷(14)、(+)松脂素单甲基醚-β-D-葡萄糖甙(17)均为首次从该属植物中分离得到的已知化合物。同时采用MTT法考察了17个单体化合物的抗肿瘤活性，实验结果表明化合物1～17均没有表现出明显的抑制肿瘤细胞增殖作用。本次实验中分离的化合物最多的是苯乙醇苷类，木脂素类，说明这与课题组前期对老翘化学成分的研究结果相似，说明老翘的主要化学成分在正丁醇部位，但在临床上对其老翘的药效学研究尚不清楚。为了合理开发利用该药用植物资源，进一步对老翘的化学成分进行系统研究是非常必要的。而本次实验丰富了连翘属植物的化学结构，该研究为进一步开发和利用老翘提供了研究依据。