病原微生物快速检测的临床研究进展概述

高静 天津市武清区人民医院检验科 （天津 301700）

内容提要：病原微生物快速检测属于临床较为常用的检测技术，伴随多种类型微生物的出现，具备周期较长、操作较为繁杂、特异性较差特征的传统微生物检测方式，并不能够满足现代诊断治疗的需求。在人们传统检测方式基础之上，不断地发展以及提高，能够探索出多类新型微生物检测方式，具备快速、准确且安全性较高的特征，从而促进微生物检验技术的不断发展。本次研究传统生物法培养鉴定技术与免疫学，而另一个方面对新型检测方法进行分析。比如分子生物学、生物传感器与生物芯片等等，对此进行综合性概述。

随着环境污染的不断加重，感染性疾病呈现出逐年上升的趋势，对人们的身体健康产生严重威胁[1]。导致感染病原微生物主要是霍乱弧菌、鼠疫耶尔森菌与分歧杆菌之类传统病原微生物重新繁殖，并且病原微生物的种类不断增多、耐药性相对增强，增大临床诊断与治疗困难的程度。随着人口的流动不断增大，加大了传染病疾病的感染[2]。因此，微生物检验技术要快速且准确，能够早发现、早诊断与早隔离、治疗，有助于减少感染性疾病的不断传播。本文主在探讨病原微生物快速检测属于临床较为常用的检测技术的进展，现综述如下。

1.采用生化方式对病原微生物实施检测

生化方式对病原微生物进行检测，实质上是对微生物特异性酶进行测定，因为各类微生物所具备酶系统并不完全相同，对多重物质分解的能力并不相同[3]。所以采用不同的底物所产生不同代谢产区能够对微生物酶进行间接性检测，至此达到检测特定微生物目的。李春凤[4]等人的研究显示，沙门氏菌可以产生辛酯酶，这一种性能是除了沙门氏菌以外各类属肠杆菌科的细菌所不具备的。按照这一种特征，对沙门氏菌采用快速检测辛酯酶法，这种方式是通过4-甲基伞形酮辛酯作为底物，通过沙门氏菌酶降解之后，释放出4MU，在紫外灯下对所发出蓝色荧光进行观察。这种方法简单易行，从而将底物加入到紫外灯下进行观察，结果则只要几分钟便能够完成。检测的灵敏度与特异度达到95%、90%。对底物与H2S反应为阳性的沙门氏菌则这类检查方式更为灵敏，灵敏度与特异度接近100%。

2.血清免疫学检测方法

免疫检测学技术主要是采用特异性抗原抗体反应，对组织细胞、特定抗原定性与定量技术进行观察。为显示与观察相应的抗原抗体反应，要将相应的标记物结合至相应的抗体上，借用标记物荧光或者酶有色性反应、放射性或者高电子密度，通过在光镜、电镜下实施定性、定位或者定量的研究[5]。各类形式免疫分析方式，例如放射性免疫分析法、酶免疫分析法、间接性酶联免疫吸附法、荧光免疫分析方式、生物发光免疫分析法、化学发光免疫分析法，直接或者间接对微生物的成分进行检测，这种检测方式在临床上得到广泛运用。

2.1 荧光抗体技术法

荧光抗体技术主要是按照抗原抗体的反应具备较高特异性，将荧光素当做抗原标记物，通过在荧光显微镜下的检查，显示出荧光特异性抗原抗体的复合物与抗原抗体所存在的位置。荧光抗体技术主要特征是特异性较强、速度较快、灵敏度相对较高，同时也会存在较多缺点，若没有特异染色问题，则需要按照完全解决、操作程序相对繁琐、需要特殊昂贵仪器与染色标本不能够长期的进行保存。采用快速检测法对病原菌进行检测多采取直接检测法与间接检测法。直接检测法主要是在检测的样品上面直接获得特异性的荧光抗血清，通过洗涤之后则可在荧光显微镜之下进行观察[6]。间接检测方法主要是在检测样品上滴加相应的细菌特异性抗体，等到出现作用后进行洗涤，加入荧光标记第二抗体。

2.2 酶联免疫技术

酶联免疫技术法主要是按照抗原-抗体免疫反应和酶高效催化作用的原理进行有机的结合，经酶催化底物，从而出现一系列化学性反应，让溶液显现颜色性变化，表明抗原抗体特异性反应明显存在。随着酶联免疫技术不断应用，可以大幅度提高检测敏感度与特异度，并且被广泛应用在多种病原微生物的检测当中。唐俊妮[7]等人的研究显示，MP膜结合蛋白抗原制备相应的MP单抗建立相应的双抗体夹心酶联免疫检测肺炎支原体抗原的方式，和PCR检测方式的符合度达到95%。

3.分子生物学检测法

随着分子生物学与分子遗传学不断发展，让人们对于微生物认识逐渐由外部的结构特征转向内部的基因结构，微生物检测从生化与免疫的方式逐渐转向到基因水平进行检测[8]。

4.生物传感器实施病原微生物检测

生物传感器属于新兴传感器技术与分子诊断技术结合属于新型的检测技术。生物传感器主要是分子识别器件与换能器。待测物质、识别器件与转换器件之间通过生物、化学与生化、物理性作用之间相互联系[9]。因为生物传感器检测相对准确、操作相对简单，在相关的领域取得相对较大的进展。但是生物传感器还是存在灵敏度不足、极易遭受干扰等缺陷，需要进一步改善[10]。

5.结论

综上所述，病原检测的方式相对较多，各类方式均存在优缺点，为弥补相应检测方式的缺陷，需要进一步的提高灵敏度与特异度，需要采用多种方式联合应用。在选择检测方式的时候需要考虑相应的条件，包括检测所要求灵敏度，提高灵敏度与除去假阳性属于检测方式所发展的重要趋势。伴随计算机技术不断发展，病原菌检测会往高度自动化与开发简便快速检测技术方面发展。分子生物学技术经过自动化仪器应用，病原菌诊断、鉴定与耐药基因检测方面逐渐应用在临床。而实现高效、高质与价格低廉统一，需要改变临床病原菌检测现状与传统的观念。伴随各学科交叉的发展，则会出现相对较多新型检测技术。