利用SPME-GC-NPD法分析三七中异菌脲消解动态规律

杨 莉，冯光泉，曾鸿超，毛忠顺，张文斌，曾 江，刘云芝

（文山学院 文山三七研究院，云南 文山 663099）

异菌脲（iprodione）是一种非内吸性保护性二甲酰亚胺类杀菌剂，又名扑海因。其化学名为3（3，5-二氯苯基）-1-异丙氨基甲酰基乙内酰脲[1]。作为一种广谱性杀菌剂，异菌脲能够抑制孢子萌发和菌丝生长，对葡萄孢属、链核盘菌属和核盘菌属真菌有效，同时对链格孢属和丝核菌属真菌也有效，可以作叶面喷雾或种子处理[2-3]。

三七Panax Notoginseng（Burk）F.H.Chen，主产于云南省文山州，是我国的名贵中药材[4]。三七是多年生喜阴性宿根植物，三年生三七才具有较好的药用价值[3]，由于在地时间长且生长环境潮湿，在生长过程中病虫害较多。在三七生产上，异菌脲主要用于防治三七黑斑病、灰霉病、炭疽病、立枯病等病害[5]，防治效果较好，得到了广泛应用。三七上异菌脲的检测方法鲜有报道，为此，本文开展了三七样品中异菌脲检测方法的研究，建立了三七中异菌脲的检测方法，并对50%的异菌脲可湿性粉剂进行了消解动态和残留规律的研究。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试三七为三年生三七干燥块根，用中药材高速粉碎机粉碎、过60目筛，置于阴凉处备用。

1.2 仪器与试剂

Agilent 7890B 带NPD气相色谱仪（美国安捷伦公司），电子天平TE1502S（梅特勒托利多仪器有限公司），Floril固相萃取柱 （雅源科技公司），热恒温水浴锅HHS型（上海博迅实业有限公司），正己烷、丙酮（色谱纯，ikampure公司），氯化钠（优级纯，京精细化学品有限责任公司）。

1.3 标准储备液与工作液的制备

准确称取适量异菌脲标准品，并用丙酮溶解、定容，得到浓度为1.00 g/L的异菌脲标准储备液。用丙酮再将储备液稀释为1.00 mg/L的标准工作液。

1.4 试验方法

1.4.1 田间施药及采样方法

根据NY/T 788—2004《农药残留试验准则》（以下简称为“准则”）的要求，施用50%的异菌脲可湿性粉剂1 912.5 g/hm2，三七的供试面积为60 m2（含3个重复，每个重复20 m2），施用量为3.06 g/m2，土壤的供试面积为36 m2（含3个重复，每个重复12 m2），施用量为0.510 g/m2。于2015年8月7日施药后，采集样品8次，即施药后1～2 h、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、30 d、45 d进行三七整株样品的采集，每次每组试验按照不同处理、不同重复分别随机采集三七植株50株，分离地上与地下部分，清洗干净并晾干后，装入自封袋中，于-20℃下贮藏备用。

1.4.2 超声提取法

准确称取2.0 g三七粉末样品21份，分为5组，分别精密加入浓度为1.00 mg/mL异菌脲标准溶液0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.0 mL及 2.0 mL置于150 mL具塞三角瓶中，加入体积比为4∶1的正己烷-丙酮混合液进行超声提取30 min后，将上清液过滤至100 mL的具塞三角瓶中，重复提取两次，每次振荡20 min，滤液减压浓缩至近干后用正己烷溶解，待净化。

1.4.3 净化

上述样品溶液用Florisil固相萃取小柱进行净化，用体积比为1∶4的丙酮-正己烷混合溶液进行洗脱。用正己烷溶液预淋洗小柱两次，弃去淋洗液，然后立即倒入待净化的样品溶液，取2 mL洗脱液进行洗脱，收集滤液，将收集的淋洗液于40 ℃水浴减压浓缩至近干，之后分别用体积比为1∶2的丙酮-正己烷混合液进行溶解，摇匀。

1.4.4 GC-NPD色谱条件

毛细管柱类型：HP-5；检测器温度：300 ℃；进样口温度：250 ℃；柱温：初始温度为50 ℃，以20 ℃/min的速率升温至190 ℃，再以30 ℃/min的速率升温至270 ℃，保持5 min；进样体积：1 uL。

2 结果与分析

2.1 标准曲线绘制

配制标准曲线，浓度分别为0.1 mg/L，0.2 mg/L，0.3 mg/L，0.4 mg/L，0.5 mg/L，以面积对浓度作图，面积为纵坐标，浓度为横坐标，得图1。

图1 异菌脲的标准曲线图

求得回归方程：y=100.9x +31.1，r2=0.994。

2.2 方法的精密度与准确度

当异菌脲标准品的添加浓度在0.2～2.0 mg/kg时，三七中的添加回收率为80.2%～94.6%，标准偏差为0.6%～3.0%，变异系数为0.7%～4.4%，说明该方法完全符合异菌脲残留量检测与分析的要求（见表1）。

表1 方法回收率、标准偏差 n=19

2.3 异菌脲在三七茎叶及块根中的消解动态：

异菌脲在三七茎叶中原始沉积量为0.031 mg/kg，在三七块根中是0.007 mg/kg。试验结果发现，施药48 d后，异菌脲在三七茎叶中的消解率均达到70%以上，块根中的达到90%以上，见表2。

表2 异菌脲在三七茎叶和块根的消解动态试验结果

由表2可以看出，三七茎叶和块根中的异菌脲残留量（c，mg/kg）与异菌脲施用后的取样时间（t，d）之间呈较明显的负指数函数关系，可以用一级动力学方程式ct=c0e-kt（其中：c0为施药后的原始沉积量，ct为施药后间隔t时的农药浓度，e为常数，k为消解速率常数，t为施药后的天数）来拟合试验数据，如图2、图3。对数据进行拟合后得到异菌脲在三七茎叶及块根中的降解动态方程分别为ct=0.031e-0.025t、ct=0.007e-0.052t；其半衰期分别为28.12 d、13.211 d，相关系数（R）分别为0.953和0.766。

图2 三七茎叶中异菌脲的消解动态图

图3 三七块根中异菌脲的消解动态图

3 讨论

本文建立了三七中异菌脲的残留检测方法，以正己烷：丙酮（4∶1，v∶v）提取后，超声提取30 min，然后，以正己烷：丙酮（2∶1，v∶v）作为淋洗液，Frolisil 小柱净化，该方法重复性高，添加回收率可达 80%以上，符合农药残留检测的要求，可用于三七中异菌脲的提取及检测。同时，通过对50%的异菌脲可湿性粉剂在三七地上及地下部分的消解动态研究可看出，异菌脲是一种易降解的农药，可以在三七上按说明书使用。