临床病理诊断中显示弹性纤维的Gomori醛品红法优于地衣红法

连家燕，谢文林

（中山大学附属第七医院病理科，深圳 518107）

弹性纤维（elastic fibers, EFs）广泛分布于全身各处，在肺泡壁、动脉壁和皮肤尤其丰富。在HE 染色中，弹性纤维和胶原纤维都呈红色，量少时两者较难区别。弹性纤维染色可用于多种疾病的诊断，如：观察动脉粥样硬化动脉壁的改变以诊断心血管疾病，鉴别肌上皮瘤与涎腺多形性腺瘤，诊断皮肤弹力纤维病变等[1]。同时，弹性纤维也是肺泡及支气管的构成骨架，与肺癌的生长、分化、转移及预后均有极为密切的关系[2]。常用的弹性纤维染色方法很多，各有其优、缺点。本文采用常用的Gomori醛品红和地衣红两种染色方法对皮肤、肺和血管组织进行对比染色观察，以筛选出更有利于临床病理诊断的弹性纤维染色方法。

材料与方法

1 材料

收集中山大学附属第七医院2018年1月－12月来源于皮肤、肺和血管的含有弹性纤维的组织石蜡标本90例，全部组织均用4%中性缓冲福尔马林溶液固定（pH=7.0），常规脱水、透明、包埋及切片。每个组织均连续切取2张片，切片厚度均为4～5μm。

2 试剂配制

醛品红溶液：0.5g碱性品红溶于100ml 70%乙醇中，再慢慢加入1ml浓盐酸和1ml三聚乙醛，紧塞瓶盖，轻轻摇匀混合，室温下放置约1～2d（冬季约4～5d）。观察溶液转变为深紫色，此时醛品红液成熟，可过滤于小口砂塞瓶，于4℃冰箱保存备用。

桔黄G液：2g桔黄G、5g磷钨酸溶于100ml蒸馏水，摇匀混合，4℃冰箱保存。

酸化高锰酸钾水溶液：A液—0.5g高锰酸钾溶于100mL蒸馏水，混匀倾入棕色瓶，置4℃冰箱保存；B液—0.5ml硫酸溶液慢慢滴入99.5ml蒸馏水中，慢慢摇匀，切勿大力摇动，保存于玻璃瓶，4℃冰箱保存。A、B两液分瓶存放，临用前分别取等量混合使用。

2%草酸溶液：2g草酸溶于100ml蒸馏水，4℃冰箱保存备用。

地衣红酒精液：地衣红1g+70%酒精100ml+浓盐酸1ml，先将地衣红溶于70%酒精，然后慢慢滴入浓盐酸，放置1～2d后即可使用。

3 Gomori醛品红染色法

常规石蜡切片5μm厚，脱蜡至水，流水冲洗5min，蒸馏水冲洗1min；酸化高锰酸钾氧化5min，蒸馏水洗1min；2%草酸漂白1min， 蒸馏水洗1min；70%酒精稍洗1min；然后于组织中滴入醛品红液染5～10min左右， 70%酒精反复洗涤3次，每次约20s，显微镜下观察切片不再脱色，背景对比清晰鲜明为止；最后用橙黄G液滴染约2min，快速水洗，脱水、透明、封片。

4 地衣红染色法

常规石蜡切片5μm厚， 脱蜡至70%酒精；入地衣红酒精液染2.5～3h；反复用70%酒精洗涤数次，显微镜下观察至切片不再脱色，背景清晰鲜明为止；Mayer苏木素复染，流水冲洗返蓝10min，脱水、透明、封片。

图1 皮肤弹性纤维Gomori醛品红染色（A）和地衣红染色（B）。比例尺，50μmFig. 1 Gomori’s aldehyde-fuchsin staining (A) and orcein staining (B) of elastic fibers in the skin. Scale bar, 50μm

图2 肺中弹性纤维Gomori醛品红染色（A）和地衣红染色（B）。比例尺，50μmFig. 2 Gomori’s aldehyde-fuchsin staining (A) and orcein staining (B) of elastic fibers in the lung. Scale bar, 50μm

结 果

Gomori醛品红染色法结果显示，在皮肤（图1A）、肺（图2A）和血管（图3A）组织中的弹性纤维均清晰可见，弹性纤维呈深紫色，背景色为不同程度的黄色，二者对比明显。

地衣红染色法结果显示，在皮肤（图1B）、肺（图2B）和血管（图3B）组织中的弹性纤维呈深棕红色，背景色为不同程度的淡红色，二者反差相对较小，区分度不如Gomori醛品红染色法明显。

图3 血管中弹性纤维Gomori醛品红染色（A）和地衣红染色（B）。比例尺，50μmFig. 3 Gomori’s aldehyde-fuchsin staining (A) and orcein staining (B) of elastic fibers in the blood vessels. Scale bar, 50μm

讨 论

弹性纤维是由集合成束的弹性微纤维和均质状的弹性蛋白组成的，弹性蛋白赋予弹性纤维弹性。在新鲜标本中，弹性纤维呈黄色发亮的细线条状；在HE染色下，组织细胞核呈蓝色，胞质、红细胞和胶原纤维等呈不同程度的粉红色，弹性纤维也被染成粉红色，导致在显微镜下很难区分到底哪些是弹性纤维，哪些是胶原纤维，不利于临床诊断。同时弹性纤维在肺腺癌、慢性支气管炎、动脉粥样硬化等病理状态下发生改变，由于增生、断裂而排列紊乱，更加导致对弹性纤维的辨认难度增加[3]。

弹性纤维的特殊染色方法有多种，Gomori醛品红染色和地衣红染色这两种方法都能显示弹性纤维，但它们也各有优缺点。地衣红染色时，不仅染色时间长，一般需要3h，而且70%酒精分化后，对比效果相对较差，在显微镜下观察分化效果时，背景中的红细胞、细胞核、平滑肌和胶原纤维也染上了色，背景脱色效果较差，弹性纤维与背景的区分度相对较差，容易影响结果判断，尤其是含出血、胶原纤维多的组织不易观察弹性纤维。醛品红染色时，染色时间短，一般需要10min，着色鲜艳、清晰，对比效果相对较好，染色结果比较稳定，特别在显示肺组织肺膜弹性纤维时非常清晰，对比度相对较好。Travis等［4］报道癌组织破坏脏层胸膜弹性层才能视为侵犯脏层胸膜，建议HE切片难以评价时，应加做弹性纤维染色进一步明确诊断。因此清晰地显示脏层胸膜对于临床诊断至关重要。

醛品红染色具有较好的染色效果，但也需要注意一些细节问题。首先，醛品红染色的关键是醛品红液的配制，配制好的醛品红液需要静置4～5d，待变为深紫色即为成熟方可使用，此液可保存3-6月，如染液时间过长，则染色时间要加长，但选染能力下降，会出现共染现象。其次，弹性纤维经强氧化剂酸性高锰酸钾氧化后，对于醛品红的亲和性大为增加，染色鲜艳，对比清晰，效果明显。根据笔者多年来的经验，在皮肤弹性纤维染色中，弹性纤维的形态是单条状，镜下不容易观察，弹性纤维经过氧化后着色鲜艳、清晰，对比度较好，但在脏层胸膜、动脉弹性纤维染色中，弹性纤维的形态是膜样结构，镜下容易观察，经过氧化后的弹性纤维和背景分别染为深紫色和浅紫色，对比不够鲜明。因此，经过反复优化，对于不同的组织我们采用不同的前处理方法，皮肤组织需经酸性高锰酸钾氧化、草酸漂白，而动脉、脏层胸膜组织可不经酸性高锰酸钾氧化、草酸漂白，可取得更佳的染色效果。另外，切片浸入70%酒精分化时，必须在显微镜下控制分化效果，时间不宜太久，否则弹性纤维着色较淡。

综上所述，两种特殊染色方法均可用于检测组织的弹性纤维，但Gomori醛品红染色法具有颜色鲜艳，对比明显，结构清晰，更容易观察等优点，是优选的弹性纤维染色方法；同时，此方法可以缩短弹性纤维染色时间，提高弹性纤维染色效率，节省弹性纤维染色成本，值得在临床病理中推广，能够为临床病理工作提供一种观察弹性纤维的好方法。