羊口疮病毒与支原体肺炎混合感染的诊断与防治

覃廷玉，邓华成，鲜思美，张太华，彭晓军，汪德生，张 明，徐雄真，杨 芳，陈 勇，林华方

(1.贵州省思南县动物疫病预防控制中心，贵州 思南 565100；2.贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025；3.贵州绿量农业发展有限公司，贵州 思南 565100)

2018年6月，贵州省某养殖场发生一起以唇、会阴出现丘疹、脓疱、溃疡以及结成疣状物厚痂为主要特征的传染性疾病，现将诊断过程和处理方法报告如下。

1 流行病学调查

该养羊场地理位置与主要交通干线距离5 000 m；与居民区距离1 000 m；与最近畜禽群距离1 000 m。采用全放牧+冬季补料。2018年2月末存栏44只,其中母羊30只,羔羊4只,断奶羊10只，于3月24日开始发病,初嘴角出现米粒大小白点，次日唇部、鼻部出现水疱，破裂后形成结痂，羊群呈现食欲减退，2 d内全体发病，进而出现咽喉部肿大，吞咽障碍、进食困难。部分出现呼吸困难，鼻孔、口腔流出黏液，发病率高达100%。死亡6只，其中：哺乳期4只、断奶期1只、生长育肥期1只。免疫：2017年8月21日对空怀母羊进行牛羊O型亚洲Ⅰ型口蹄疫疫苗免疫；2018年3月9日山羊痘活疫苗免疫，尾根内侧皮内注射0.5 mL；3月18日小反刍兽疫活疫苗免疫，颈部皮下注射1 mL。

2 剖检病变观察

对病死羊进行剖检，仅部分羊在胸部出现肺炎变化，胸腔有淡黄色液体，一侧有纤维素性肺炎，肺小叶变宽、界限明显，肾脏肿大，包膜下有出血点。

3 实验室诊断

3.1 细菌分离培养 取病死羊的心、肝、脾、肺、肾分别在鲜血琼脂平板上划线，37 ℃培养24 h后观察。

3.2 羊口疮病毒(OrfV) 取送检羊口腔痂皮，充分研磨后，提取其DNA，使用针对OrfV的特异性引物(目的片段1 137 bp)进行PCR扩增，产物通过1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。

3.3 小反刍兽疫病毒(PPRV)病原核酸检测 取送检羊肺组织，加入适量的DEPC水充分研磨后，提取其RNA，采用小反刍兽疫病毒核酸检测试剂盒进行反转录PCR扩增，产物通过1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。

3.4 山羊痘病毒(GPV)病原核酸检测 取送检羊淋巴结和肺组织，充分研磨后，提取其DNA，使用针对GPV的特异性引物进行PCR扩增，产物通过1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。

3.5 支原体病原核酸检测 取送检羊淋巴结和肺组织，充分研磨后，提取其DNA，使用针对支原体病毒的特异性引物(目的片段500 bp)进行PCR扩增，产物通过1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。

4 结果

4.1 细菌分离培养 取病死羊的心、肝、脾、肺、肾分别在鲜血琼脂平板上划线，37 ℃培养24 h后观察，未见细菌生长。

4.2 羊口疮病毒(OrfV) 羊口腔痂皮，充分研磨后，提取其DNA，使用针对OrfV的特异性引物进行PCR扩增，扩增出特异性目的条带，片段大小1 137 bp。

4.3 小反刍兽疫病毒(PPRV)病原核酸检测 取送检羊肺组织，加入适量的DEPC水充分研磨后，提取其RNA，采用小反刍兽疫病毒核酸检测试剂盒进行反转录PCR扩增，未扩增出目的条带。

4.4 山羊痘病毒(GPV)病原核酸检测 羊淋巴结和肺组织，提取其DNA，未扩增出针对GPV的特异条带。

4.5 支原体病原核酸检测 通过肺组织提取其DNA，使用针对支原体病毒的特异性引物进行PCR扩增，扩增出特异性目的条带，片段大小500 bp。

5 小结

5.1 根据流行病学调查、剖检病变观察以及实验室诊断，造成本次疫病发生的主要原因是羊口疮病毒和支原体混合感染。

5.2 目前预防该病无疫苗，且无特效药物，一旦发生本病应立即进行隔离，同时注意环境消毒。对症治疗仅能对发病羊群进行患部冲洗、聚维酮碘喷雾、涂擦百桐膏。咽喉肿大的羊只，咽喉部用云南白药喷雾剂喷雾，同时注射硫酸庆大霉素、黄芪多糖、鱼腥草。蒲公英、紫背天葵、忍冬藤、千里光、鱼腥草、黄岺、贝母、杏仁、枇杷叶、甘草、冰糖煎水，作为羊群饮用水。通过近2周对发病羊进行治疗与环境消毒处理，未有新的病例发生。