肉牛口蹄疫免疫抗体、3ABC抗体、RT-PCR核酸检测结果分析

朵玉明， 何彦春

(1.甘肃省肃南县畜牧兽医技术服务中心，甘肃 肃南 734000；2.张掖市动物疫病预防控制中心，甘肃 张掖 734000)

2017年11月，张掖市动物疫病预防控制中心对甘州区3个肉牛养殖户临床检查健康的28头肉牛开展了免疫抗体检测和口蹄疫非结构蛋白3ABC检测，对口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体阳性牛间隔14 d分2次采集O-P液，开展了口蹄疫病毒核酸RT-PCR检测。现就检测过程和结果分析如下，以供广大同行参考。

1 材料与方法

1.1 样品采集

张掖市某地拟外调的肉牛共28头，分属3户养殖户，均为6～8月龄牛，临床检查健康。注射牛口蹄疫O型、亚洲I型二价口蹄疫灭活疫苗后21 d采集血清样品开展O型口蹄疫免疫抗体和3ABC抗体检测。检测结果出来后对3ABC抗体阳性的27头牛分2次采集O-P液，并开展口蹄疫病毒核酸实时荧光RT-PCR检测，2次采样间隔时间14 d。

1.2 检测试剂

口蹄疫O型正向间接血凝抗原、口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测ELISA试剂盒、口蹄疫病毒通用型实时荧光RT-PCR检测试剂盒均为中国农业科学院兰州兽医研究所生产，批号分别为：20170802201、20171027129和20170703101。

1.3 检测方法

口蹄疫O型正向间接血凝实验被检血清稀释度从(1∶2)～(1∶2048)，其余步骤按照试剂盒说明，由张掖市动物疫病预防控制中心实验室完成检测。口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测完全按照试剂盒说明书进行，由张掖市动物疫病预防控制中心实验室和甘肃省动物疫病预防控制中心实验室同步进行检测。口蹄疫病毒核酸实时荧光RT-PCR检测完全按照试剂盒说明进行，由甘肃省动物疫病预防控制中心实验室完成检测。

2 检测结果

2.1 O型口蹄疫免疫抗体检测结果

共检测28份样品，其中2份样品抗体效价达26，5份达27，7份达28，6份达29，6份达210，2份达212。农业部《2017年国家动物疫病监测与流行病学调查计划》口蹄疫监测方案规定，正向间接血凝试验：抗体效价≥25判为合格，据此判定，28份被检样品抗体全部合格，合格率100%。

2.2 口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测结果

共检测28份样品，其中阳性27份、阴性1份，阳性率96.4%。

2.3 口蹄疫O-P液PCR检测结果

对3ABC检测结果为阳性的27头牛分2次采集O-P液，2次间隔时间14 d，27头牛2次实时荧光RT-PCR口蹄疫病毒核酸检测结果均为阴性。详细检查结果见表1。

表1 检测结果

3 讨 论

(1)正向间接血凝试验具有操作简单，检测速度快，试剂价格低等特点，用来检测0型口蹄疫免疫抗体时和液相阻断ELISA试验结果相差不大。按照口蹄疫正向间接血凝试验试剂盒操作说明，被检血清最高稀释至1∶29。根据多年来的检测经验，口蹄疫灭活苗首次免疫牛后3周用正向间接血凝试验检测抗体，合格血清抗体滴度一般集中在(1∶25)～(1∶27)之间，个别可达1∶29，抗体合格率一般在65%～75%之间。二次加强免疫后，抗体效价和免疫合格率显著上升。本次试验中的牛为6～8月的犊牛，均为首次免疫。为进一步掌握免疫抗体滴度，特意将血清稀释至1∶212,结果抗体滴度大于1∶29有8份，占28.6%，抗体滴度达1∶212有2份。从抗体检测结果分析，部分被检样品抗体滴度超高，应该不是疫苗后产生的免疫抗体，可能是口蹄疫病毒隐形感染所致。

(2)口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测结果是判断动物是否有口蹄疫病毒感染的可靠方法[1]。本次试验中，被检的28份样品中有27份样品呈阳性，且省、市动物疫病预防控制中心检测结果一致。从检测结果判断，27头阳性牛曾隐性感染过口蹄疫病毒。

(3)采集O-P液进行口蹄疫病原学检测是口蹄疫检测技术规范中规定的方法。徐春志等[2]报道，26份口蹄疫病毒非结构蛋白抗体阳性的奶牛中,9份奶牛O-P液样本显示口蹄疫病毒核酸阳性,经血清型鉴别均为O型口蹄疫病毒。本次试验中分2次对3ABC抗体检测结果阳性的牛采集O-P液进行实时荧光RT-PCR检测，2次结果均为阴性。从理论上来说，被检测牛3ABC非结构蛋白抗体检测结果阳性则表明感染过口蹄疫病毒，按照口蹄疫病毒特性，病毒在反刍动物咽喉部可存活很长时间。本次检测中2次检测结果均为阴性，是口蹄疫病毒已经消失还是其他原因，有待进一步研究。