TASwako i30全自动免疫仪检测仪性能评价

徐建，许亮亮，喻海忠

南通市中医院，江苏 南通 226001

原发性肝癌目前是我国第四位的常见恶性肿瘤以及第三位的肿瘤致死病因，其严重威胁生命和健康。原发性肝癌主要包括肝细胞肝癌、肝内胆管细胞癌和肝细胞肝癌以及肝内胆管细胞癌混合型三种不同的病理类型。其好发于沿海地区，我市的启东市就是肝癌的高发区，而目前原发性肝癌的诊断主要是靠检测血清AFP及进行影像学检测，70%-90%原发性肝癌患者AFP含量增高，睾丸癌、卵巢肿瘤、恶性畸胎瘤等患者AFP含量也增高、同时在一些良性肝脏病变中AFP也轻、中增高，因此迫切需要一种检测灵敏度更高的方示用于筛选原发性肝癌,研究发现肝癌细胞产生的甲胎蛋白与肝细胞良性增生时产生的甲胎蛋白不同。肝癌细胞产生的甲胎蛋白与小扁豆凝集素有很强的结合力，检测这种甲胎蛋白的异质体在甲胎蛋白中的比值升高（＞10%）可用于区分是原发性肝癌还是肝良性病变，异常凝血酶原（PIVKA-II）是维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导的蛋白质，可出现于维生素K缺乏或肝细胞肝癌（HCC）患者的血清中，是诊断HCC的另一个重要指标，中国的《慢性乙肝防治指南》已将PIVKA-II列为诊断原发性肝癌的重要指标，而日本和光公司是世界上首位采用化学法检测AFP异质体和PIVKA-II的公司。而µTASwako i30全自动免疫检测仪是由Wako Pure Chemical Industries.Ltd生产的全自动免疫检测仪就是针对检测这三个项目的专用设备。该仪器使用LBA法（Liquid-phase Binding Assay），无需固相，在液相中进行抗原抗体反应后，分离并检测形成的免疫复合体联合检测，可在一台仪器上同时检测AFP AFP-L 3%及PIVKA-II联合检测的结果。为了保证仪器的性能可靠，数据精准，我院现对该仪器进行性能评价以保证临床结果的准确性。

1 材料和方法

仪器与试剂：µTASwako i30全自动免疫检测仪。甲胎蛋白及其异质体比率：原测定试剂盒生产商日本和光，批号TQ659。甲胎蛋白及其异质体比率校准液 生产商日本和光，批号0123。甲胎蛋白及其异质体比率质控品（高值）生产商日本和光，批号0125。甲胎蛋白及其异质体比率质控品（低值）生产商日本和光，批号0124。芯片盒生产商日本和光，批号TR711。样本稀释液生产商日本和光，批号TP942。清洗液生产商日本和光，批号TP941。

2 主要性能评价方法

2.1 仪器质控 室内质控主要的目的是为了提高每个标本测定结果的可靠性，而最有效的也是常用的质控方法是质控品检验法[1]。每天做标本之前拿已知浓度的高、低值质控品进行检测，对比其测定值是否在控，只有结果在控后方可进行样本的检测。

2.2 精密度 仪器的精密度验证包括批内精密度和批间精密度。批内精密度：取高、低两个浓度水平的血清标本作为待测样品，分别同时检测20次，计算其平均值，标准差，变异系数，评价批内精密度。批间精密度：用这两浓度分装-20℃保存，连续检测4天，每天重复检测5次，计算其平均值，标准差，变异系数，评价批内精密度评价、批间精密度。

2.3 线性范围 取一高值血清样本（尽可能接近厂商的检测限）按1:0、1:1、1:3、1:19、1:199、0:1的比例用配套稀释液稀释后重复检测2次，计算均值。将实测值与理论值作比较，参照CLSI的EP-6A2文件进行线性评估。

2.4 准确性 在2份已知浓度的血清样本中加入AFP-L3校准品作为待测样本，每份样本重复检测3次取均值，并与理论值进行比较计算回收率。回收率应在80%-120%区间。

2.5 样本比对 使用5份血清样本有高值与低值，在本院该设备上检测的结果与其他医院检测的结果进行比对。

2.6 统计学分析 用EXCEL表对数据进行整理分析，用SPSS 17.0软件对结果进行统计分析。

3 结果

3.1 质控 每天质控良好，见表1

表1 质控

3.2 精密度 批内精密度结果见表2，批间精密度见表3。

表2 µTASWAKO i30 AFP批内精密度数据

表3 µTASWAKO i30 AFP批间精密度数据

3.3 线性关系 AFP的线性验证结果第一次显示：y=0.9956x-1.5868 R=0.997。

第二次线性：y=0.9961x+0.8903 R=1 a满足1±0.05的范围，相关系数r＞0.975的要求。

3.4 准确性 经实验数据得出，µTASWAKO i30准确性良好。见表4。

3.5 样本比对 使用5份血清样本有阳性和阴性，在设备上检测的结果与其他医院检测的结果进行比对。结果见表5。

表4 准确性

表5 样本比对

4 讨论

一种新的仪器、设备的引进必须对其进行性能验证，看是否能符合各项指标，才能使其产生精准的数据，从而为临床诊断和治疗提供有帮助的信息。该仪器主要从精密度，准确度，线性范围等进行验证。操作者必须熟悉性能评价的方法和仪器的工作原理，了解并掌握仪器的操作步骤和各项注意事项[2]。全自动电泳荧光免疫分析仪µTASWakoi30检测试剂使用LBA法（Liquid-phase Binding Assay），在液相中进行抗原抗体反应后，分离并检测形成的免疫复合体。使荧光标记的抗人AFP抗体与DNA标记的抗人AFP抗体以及检测样本中的AFP在芯片内的液相中发生免疫反应，然后根据凝胶电泳分离形成的免疫复合体，通过激光诱导荧光法对免疫复合体进行荧光检测。在芯片（17 mm＊47 mm面积大小）上完成了一系列的微流通路上完成了分注，混合，洗净，分离和检测的免疫检测的一系列操作。

AFP是原发性肝癌的一种传统的特异性血清指标物，研究表明AFP对于原发性肝癌早期阶段容易漏检。目前，AFP-L3已经是国际上公认的比单独AFP检测更优秀的肿瘤标记物，并且在2005年被美国FDA（食品和药品管理局）批准用于肝癌的临床诊断[3]。PIVKA-II是维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导的蛋白质（Protein Induced by Vitamin K Absence or Antagonist-II），又称异常凝血酶原（Desgamma-carboxy prothrombin,DCP），正常肝脏在维生素K作用下会产生凝血酶原，但在维生素K缺乏或者肝细胞癌患者中产生异常凝血酶原，其血清水平在肝细胞肝癌（HCC）患者的血清中会升高，可用于HCC的诊断。目前PIVKA-II已在日本及西方国家作为肝细胞肝癌的主要标记物[4]。PIVKA-II与AFP的产生及其在血清中的含量是相对独立的，联合检测能提高HCC的灵敏度。

我院引进的µTASwako i30主要是测定AFP、AFP-L3%和PIVKAII，这三项是原发性肝细胞癌特异性较高的肿瘤标志物检测项目。AFP、AFP-L3%和PIVKAII三者的联合检测应用于肝细胞癌（HCC）的早期诊断、疗效观察及预后评估有很高的临床应用价值。

通过验证得知，µTASwako i30全自动免疫检测仪的批内精密度的CV＜5%，批间精密度CV＜10%以下（参照试剂说明书）。这表示该仪器的精密度良好。线性关系a满足1±0.05的范围，相关系数r＞0.975的要求，准确性的回收率在80%-120%，满足要求。与其他医院样本对比，结果显示良好。以上评价结果显示µTASwako i30全自动免疫检测仪各项参数符合实验室要求，适用于临床。