蓝莓花青素的提取及抗氧化性分析

摘要：本文借助正交试验以及单因素试验获得提取蓝莓花青素的最佳条件，分别是80%甲醇，1：10的料液比，80°C的温度，30min的时间以及3.5的pH值。在浓缩提取物之后，借助聚酰胺树脂纯化从蓝莓中提取出来的花青素，能够获得较高纯度的样品。纯化完成后，测定所得花青素抗氧化性，经由试验可知，其能够有效清除DPPH自由基以及OH自由基。

关键词：蓝莓;花青素;提取;抗氧化性;甲醇

1.实验材料以及方法

1.1材料、仪器与试剂

采购适量的市售蓝莓浆果、紫外可见分光光度计、旋转蒸发仪、酶标仪、高速离心机以及花青素标品。实验所用的分析纯主要有乙醇、甲醇、香草醛以及盐酸等。此外还会应用Vc、聚酰胺吸附树脂以及DPPH自由基等。

1.2预处理聚酰胺树脂

向三角瓶中放适量聚酰胺树脂，随后加浓度为95%的乙醇（4倍体积）进行浸泡，并且过夜放置，继而将浸泡液清理掉，完成厚用浓度为95%的乙醇将其洗到洗涤液内，并将3倍体积的水添加其中，直至不会有白色的浑浊物，最终用水进行清洗，确保不再有醇的味道后进行抽滤、抽干，处理后留下以备后用。

1.3蓝莓预处理

选出一部分蓝莓，在此过程中应当将破碎以及没有成熟的蓝莓处理掉，随后把选好的样品放到冰箱里（设置-20°C的温度），等到实验需要的时候将样品取出来，取出之后对其进行捣碎，直至其呈现出匀浆的状态。

2.实验方法

2.1配置试剂

以甲醇为主要溶剂配置有1∶1显色剂体积的两类试剂：第一种试剂为1%浓度的香草醛溶液，第二种试剂为8%浓度的盐酸溶液，试剂都是在需要的时候进行现配，随后配置有0.1%浓度盐酸以及浓度不同、pH值3.5甲醇混合液。

2.2提取蓝莓花青素的主要程序

1.破碎蓝莓鲜果;2.浸提甲醇;3.过滤;4.离心处理;5.获得蓝莓花青素的提取液;6.吸附聚酰胺树脂;7.洗脱60%的乙醇;8.旋蒸处理;9.纯化蓝莓花青素;10.萃取石油醚;11.石油醚的回收处理;12.展开显色研究。

2.3配置标准溶液、制作相应曲线

以甲醇为主要溶剂对蓝莓花青素的标液进行配制，标液拥有1.2g/L的浓度。随后移取1-5ml溶液五份，分别用甲醇溶剂进行定容，最终定为10mL。完成定容之后，分别取出1mL溶液并且各自加入到显色剂（5ml）当中，将其摇匀，并进行避光处理，随即将其放入恒温水浴当中进行30min的保温处理，进而将其放置到500nm的波长当中对吸光值进行测定，最后对蓝莓花青素标液标准曲线进行绘制。

2.4蓝莓花青素的提取率受提取条件的影响

选出蓝莓5g，将其粉碎，随后将适量盐酸-甲醇混合液添加其中，并且在相应温度环境中进行搅拌和提取，对提取液进行30min离心处理，将上清液提取出来并利用聚酰胺树脂对其进行纯化处理，最终展开研究。对蓝莓花青素进行提取的时候，要在超声功率、料液比、浸提液的浓度、时间与温度等都不同的条件下进行，各做平行试验3个，对相应提取率进行考察。

2.5纯化蓝莓花青素

对花青素进行提取、抽滤，所得提取液为紫红色，随后纯化提取液，选用的洗脱剂是60%浓度的乙醇溶液，对样品进行采集。

2.6测定纯度

定容提取液至100mL，借助标准曲线对花青素浓度进行计算，随即将相应质量以及纯度计算出来。

3.分析和探讨

3.1确定最大的吸收波长

在室温环境下借助盐酸-香草醛溶液对蓝莓花青素的标准样品展开避光处理，随后于分光光度计当中展开300-700nm波长范围内的扫描，能够获得500nm的最大吸收波长，其属于蓝莓花青素特征吸收的相应波长。

3.2開展单因素试验

香草醛和花青素产生反应的最终产物，一旦受到光照便会呈现出不稳定的状态，所以在进行相应检测的时候，检测人员应该进行避光处理。

3.3确定最佳提取工艺条件

通过观察试验以及方差分析的相应结果可知，温度有最大极差，由此可见，温度对提取效果有较大影响，位列其后的分别为料液比、提取时间以及甲醇溶液的浓度。最终结合前文实验获知，最佳提取条件为1∶10料液比、80°C提取温度、30min提取时间以及80%浓度甲醇溶液，此时拥有高达4.4%的得率以及约86%的纯度。

基金项目：

2019浙江经贸职业技术学院院级科研项目“不同采收期条斑紫菜中总硒含量调查研究”（编号：19YB09）;2020省属高校基本科研业务费项目“蓝莓中花青素类检测关键技术研究与应用”（编号：20KCTD01）

作者简介：

凌云（1982.1-），女，汉族，江苏南通人，毕业于南京师范大学，硕士研究生，高级工程师，研究方向：食品质量安全与营养检测。