黄芪黄精配伍对多糖成分含量变化的影响

孙艳平，王荣，王娜娜，冶文静

（西安医学院，陕西西安 710021）

黄芪是豆科植物蒙古黄芪[Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge.var.Mongholicus (Bge.) Hsiao]或膜荚黄芪[Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.]的干燥根。研究发现[1-2]，其具有增强机体免疫功能、保肝利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。黄芪中主要活性成分为皂苷类、黄酮类和多糖类等，对缺血心肌细胞、心肌缺血-再灌注损伤及病毒感染致心肌损伤等有保护作用，能够促进合成胰岛素信号蛋白、发挥抗糖尿病的作用，对于强化心脏收缩、缓解粥样硬化、调节血压等具有显著作用[3]。

黄精包括黄精（Polygonatum sibiricum）、滇黄精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl）和多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua）3种。黄精性平、味甘，归脾、肺、肾经，具有补肾益精、滋阴润燥的功能，可用于滋补强身、肺虚燥咳及医治肾虚精亏之症；具有调节血糖、增强免疫力、抗病毒抗炎、延缓衰老、改善学习及记忆力等药理作用；对于治疗冠心病、代谢综合症、慢性支气管炎、缺血性中风等疾病具有一定疗效[4-6]。

本研究通过实验测定芪精配伍对黄芪、黄精多糖类成分含量的影响，为阐明黄芪黄精配伍药理学作用及物质基础研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料与仪器

黄精购于药材市场，批号20181106，产地陕西；黄芪购于药材市场，批号20181106，产地甘肃。实验用试剂有碳酸钠（天津市河东区红岩试剂厂,分析纯）、95%乙醇（天津市河东区红岩试剂厂，分析纯）、蒽酮（上海科丰化学试剂有限公司，分析纯），98%浓硫酸（四川西陇化工有限公司，分析纯）和D(+)-无水葡萄糖（上海源叶生物科技有限公司，分析纯）。

实验仪器设备有精密分析电子天平（AX224ZH，OHAUS美国奥豪斯），Thermo超纯水机（Micro Pure ，Thermo Scientific公司），全波长酶标仪（Multiskan Go，Thermo Scientific公司）

1.2 实验方法

1.2.1 黄精、黄芪中多糖的提取

称取适量干燥至恒重、过20目筛的黄精颗粒，用石油醚于80～90 ℃下回流脱脂后备用。按1∶15g/ml的固液比将脱脂黄精于90 ℃下用水浸提2次，提取时间为2 h，过滤所得滤液浓缩至一定体积后加入无水乙醇（使含醇量达80%左右），静置过夜，过滤后沉淀用80%乙醇多次润洗，即得黄精粗多糖[7-8]。粗多糖提取浓缩液中蛋白质用氯仿-正丁醇（4∶1）多次萃取，直至萃取液澄清，再往水相中加入95%乙醇使含醇量达80%，静置过夜后过滤，所得固体依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，烘干得精制黄精多糖[9-10]。

称取适量干燥至恒重、过20目筛的黄芪颗粒，按照以上相同操作，可得黄芪多糖。

将黄芪与黄精按1∶1的比例进行配伍，按照以上操作，即可得黄芪黄精配伍多糖。

1.2.2 标准曲线的绘制

精密称取经105 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33 mg，置于100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得无水葡萄糖对照溶液（330 mg/L）。

精密量取对照溶液0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、1.0 mL、1.2 mL，分别置50 mL具塞锥形瓶中，用移液枪各加水稀释至2.0 mL摇匀，在冰水浴中缓慢滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置于95 ℃水浴中保温10 min，取出，立即置于冰水浴中冷却10 min，取出，以0.2%蒽酮-硫酸为空白，在96孔板点样200 μL，置于酶标仪中，在582 nm波长处测定吸光度。

1.2.3 供试品的测定

称取自制的黄精、黄芪及配伍样品，溶解后取0.2 mL按“1.2.2”步骤测得吸光度并计算多糖含量。

1.2.4 方法学考察

（1）仪器精密度考察：取0.6 mL葡萄糖对照溶液连续测定6次，计算RSD值。

（2）方法稳定性考察：分别吸取黄芪、黄精、芪精配伍0.1 mL供试品，按“1.2.2”步骤操作，分别于0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h和2.5 h测定吸光度。

（3）方法重复性考察：取黄精多糖、黄芪多糖及芪精配伍多糖各5份，按“1.2.2”步骤测得吸光度并计算多糖含量。

（4）加样回收率考察：精密吸取3种已知含量的多糖供试品0.1 mL，共6份，分别配制相应含量的葡萄糖对照品并加入，按“1.2.2”步骤测得吸光度并计算多糖回收率。

2 结果与分析

2.1 葡萄糖标准曲线

如图1所示，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得到标准曲线方程：y=0.651 3x-0.001 3，R2=0.993 7。结果表明葡萄糖在33～198 mg/L之间呈现较好的线性关系[11-12]。

图1 无水葡萄糖对照品标准曲线

2.2 多糖含量的测定结果

黄精、黄芪及配伍样品的多糖含量测定结果见表1。根据结果分析可知，配伍后的多糖含量高于黄精、黄芪单个药材。

表1 各样品多糖含量测定结果

2.3 方法学考察结果

2.3.1 精密度

标准样品连续6次测定结果如表2所示，吸光度的RSD值小于3%，表明该仪器精密度良好。

表2 对照品溶液多糖测定精密度考察结果

2.3.2 稳定性

稳定性考察结果如表3所示，，吸光度的相对标准偏差RSD均小于5%，表明黄芪、黄精以及芪精配伍中的多糖在2.5 h内显色稳定。

2.3.3 重复性

重复性考察结果如表4所示， RSD分别为3.35%、1.58%、2.46%，结果表明该方法重复性良好。

2.3.4 加样回收率

精密吸取3种已知含量的多糖供试品0.1 mL，共6份，分别配制相应含量的葡萄糖标准品并加入供试品中，按“1.2.2”项操作测得吸光度，并计算多糖回收率，结果如表5～7所示。结果表明，黄芪多糖、黄精多糖和芪精配伍多糖的加样回收率RSD皆小于5%。

表3 各供试品多糖稳定性考察结果

表4 各供试品多糖测定重复性考察结果

表5 黄精多糖的加样回收率试验结果

3 结论

黄芪、黄精作为两种药食同源的中草药，其所含的多糖成分具有多种生物活性。本次试验采用《中国药典》中的多糖含量测定方法，即蒽酮-浓硫酸法分别测定黄芪、黄精及芪精配伍中的多糖含量。从含量测定方法学考察结果表明，本测定方法精密性、稳定性、重复性均良好。通过对各组分中多糖含量测定结果进行比较分析，结果表明，芪精配伍后多糖含量有变化，配伍后含量均高于单方黄芪或黄精。

表6 黄芪多糖的加样回收率试验结果

表7 芪精配伍多糖的加样回收率试验结果