2017年关岭牛附红细胞体感染情况调查

(贵州省关岭布依族苗族自治县动物疫病预防控制中心，贵州 关岭 561300)

关岭牛是国家重点保护的78个地方畜禽品种之一，主要分布于贵州省安顺市和黔南布依族苗族自治州的19个县，其中关岭县为主产区并因此得名。血液原虫是牛最常见的寄生虫之一，常见的有附红细胞体(Eperythrozoon)、泰勒虫(Theileria)、巴贝斯虫(Babesia)、伊氏锥虫(Trypanosoma)等[1]。大多数血液原虫病通过吸血昆虫传播，而关岭县温润多雨的气候特点也增加了牛感染血液原虫的概率。2017年8—10月，关岭县动物疫病预防控制中心对辖区内的关岭牛进行附红细胞体感染情况流行病学调查，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1抽检血样：按7%的存栏比例采集关岭县12个乡镇规模化养牛场的关岭牛血液。

1.1.2主要试剂：2×TaqMaster Mix试剂(康为世纪生物科技有限公司)、琼脂糖(Amresco)、DL 2 000 DNA Marker(TaKaRa)、GoldView核酸染料(Solarbio)、无水乙醇(天津福晨化学试剂厂)、ddH2O、天根DP318-02血液基因组DNA提取试剂盒(北京诺博莱德科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1牛附红细胞体基因组DNA提取，引物设计：根据天根DP318-02血液基因组DNA提取试剂盒说明书进行牛附红细胞体基因组DNA提取。根据NCBI数据库中牛附红细胞体序列，登录号为AY946266的16S核糖体RNA基因部分序列设计引物，目的序列长度为833 bp。

1.2.2PCR扩增：扩增体系采用25 μL反应体系，其中2×TaqMaster Mix 13.5 μL，上、下游引物各0.5 μL，DNA模板0.5 μL，ddH2O 10 μL。扩增条件：预变性95 ℃ 5 min，变性94 ℃ 45 s，退火60 ℃ 1 min，延伸72 ℃ 50 s，35个循环，再延伸72 ℃ 10 min，4 ℃保存；同时设立未加DNA模板的等体积阴性对照。取PCR产物6 μL，小心加样于10 g/L TBE琼脂糖凝胶点样孔中，以相同体积的DL 2 000 DNA Marker作对照进行电泳，设定电泳条件为100 V，电泳时间30 min，凝胶成像系统观察结果。

1.2.3数据统计：根据PCR扩增结果，准确记录阳性样品，统计数据并计算感染率。感染率(%)=感染样品数/采集样品数×100%

2 结果

2.1 牛附红细胞体PCR扩增结果由图1可见：检测的阳性样品目的条带为833 bp。扩增产物送至生工生物工程(上海)股份有限公司测序后得到821 bp的序列片段，扩增后测得的序列经过NCBI数据库BLAST比对后显示与牛附红细胞体同源性达到99%。说明设计的引物可以准确鉴定牛附红细胞体。

2.2 感染情况统计结果由表1可见：12个乡镇中有6个乡镇的关岭牛感染了附红细胞体，其中坡贡镇养殖牛感染率最高为30%，新铺镇养殖牛感染率最低为6.67%，总体平均感染率为5.73%。

图1 牛附红细胞体PCR扩增结果M：DL 2 000 DNA Marker；1、3：检测阳性样品；2：检测阴性样品

表1 关岭县各乡镇养殖的关岭牛附红细胞体感染情况统计

3 小结

调查结果显示，牛附红细胞体已成为我县关岭牛的1种较为常见的寄生虫病，有50%的乡镇牛场存在附红细胞体感染，虽然牛群总体平均感染率不高，只有5.73%，但对我县养牛业具有潜在的威胁，各地养牛场应高度重视并做好防治工作。(1)在蜱、疥螨等外寄生虫高发的季节(7—10月)要进行灭蜱和疥螨工作，减少传播媒介[2]。(2)饲养圈舍要建设在通风良好的较高地段，保持圈舍干燥。(3)对圈舍要勤打扫，勤消毒，粪便要及时无害化处理。(4)药物治疗：目前常用并且效果较好的抗附红细胞体药物是贝尼尔(又名血虫净)[3]，可按照5 mg/kg 体重按说明书方法给药。