羧甲基交联淀粉止血颗粒中环氧氯丙烷残留量的测定*

朱小敏，朱肖杰，孟建文，李红梅，张素文，郈秀菊

(山东省药学科学院 山东省医用高分子材料重点实验室，济南 250101)

1 引 言

目前，国内外已开发的新型伤口止血材料主要包括明胶蛋白、纤维蛋白胶、可溶性止血纱布以及可吸收止血粉等[1]。随着科学与加工技术的发展，以淀粉或其衍生物为原材料制备的止血材料，因其良好的止血作用和生物安全性，被广泛研究[2-5]，并有了一些产品应用于临床[6]，如Arista止血装置[7-8]，瞬时复合微孔多聚糖止血粉[9]等。我们研究开发了一种羧甲基交联淀粉止血颗粒，制备过程中采用环氧氯丙烷作为交联剂。环氧氯丙烷又称表氯醇，常用作材料反应的交联剂，其有一定的毒性[10-11]。目前，中国药典规定环氧氯丙烷的残留量限度为0.05%[12]。本研究建立了羧甲基交联淀粉止血颗粒中环氧氯丙烷残留量的气相色谱测定方法。

2 仪器与试剂

气相色谱仪，Agilent 6890N Network GC System；顶空进样器，Agilent7697A Headspace Sampler；电子分析天平，感量0.0001 g，上海精密电子公司。

羧甲基交联淀粉止血颗粒，自制(180820,180821,180822)；二甲亚砜，色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；环氧氯丙烷，分析纯，天津市大茂化学试剂厂。

3 实验方法与结果

3.1 色谱条件

采用Agilent125-1334：DB-624(30 m×530 μm×3.0 μm)毛细管色谱柱；进样口温度200℃；检测器温度250℃；分流比3∶1；载气为N2；流速3 mL/min；程序升温：初始温度50℃，保持2 min，以50℃/min升温至180℃，保持5 min。顶空进样器条件：加热箱平衡温度为100℃，平衡20 min；定量阀温度为110℃；导热管温度为120℃。该色谱条件下，环氧氯丙烷保留时间Rt=5.17，见图1。

图1 环氧氯丙烷的谱图

3.2 标准溶液的制备

3.2.1标准储备液的制备 精确称取环氧氯丙烷标准品19.8 mg，置于25 mL容量瓶中，用二甲亚砜定容。精确量取上述溶液5.3 mL，置于100 mL容量瓶中，用二甲亚砜定容，制成42 μg/mL的标准贮备液。在4℃下储存，有效期为1个月。

3.2.2标准对照溶液的制备 精确量取标准储备液6 mL，置于50 mL容量瓶中，用二甲亚砜定容，得到5.04 μg/mL的标准对照溶液。

3.3 样品制备

取止血粉约50 mg，精密称定，置20 mL顶空瓶中，准确加入DMSO 5 mL，压盖密封后混合均匀，浸提温度为(37±1)℃，浸提时间为24 h。在规定的色谱分析条件下顶空进样。

3.4 线性与范围

分别取0.5、1、2、3、4 mL的标准储备液置于25 mL的容量瓶中，用二甲亚砜定容，获得0.84、1.68、3.36、5.04、6.72 μg/mL的标准溶液。分别精密量取5 mL置于20 mL顶空瓶中，压盖密封，在规定的色谱条件下进行分析。每个浓度的标准溶液平行测试三份，结果以环氧氯丙烷的浓度为横坐标(x)，以检测出的平均峰面积为纵坐标(y)作线性回归分析，得到线性回归曲线，见图2。线性回归方程为y=1.001x-0.0216，R2=0.9997。环氧氯丙烷的质量浓度为0.84～6.72 μg/mL的范围内时，其峰面积与浓度线性关系良好。

3.5 检测限和定量限试验

取3.4节的0.84 μg/mL的环氧氯丙烷标准溶液，用二甲亚砜进行稀释，依次稀释并测定，以信噪比3∶1作为环氧氯丙烷的检测限，以信噪比10∶1作为环氧氯丙烷的定量限。测试结果为，环氧氯丙烷的检测限浓度为0.336 μg/mL，环氧氯丙烷的定量限浓度为0.84 μg/mL。

3.6 精密度试验

取环氧氯丙烷标准对照溶液5 mL置于20 mL顶空瓶中，在规定色谱条件下，平行检测6份，以峰面积计算，数据见表1，RSD为1.22%。

表1 环氧氯丙烷测定的精密度

3.7 溶液稳定性试验

同时取6份环氧氯丙烷标准对照溶液5 mL分别置于20 mL顶空瓶中，分别于放置0、2、4、6、8、10 h后，在规定色谱条件下分析，以峰面积计算，数据见表2，RSD为1.39%，环氧氯丙烷标准对照溶液在10 h内稳定。

表2 环氧氯丙烷的溶液稳定性

3.8 回收率试验

精密称取已知含量的样品9份，其中1-3份分别加入5 mL环氧氯丙烷对照溶液，4-6份分别加入5 mL80%浓度环氧氯丙烷对照溶液，7-9份分别加入5 mL120%浓度环氧氯丙烷对照溶液，按照3.3节的方法处理后，在规定的色谱条件下进行分析，以外标法计算待测样品中环氧氯丙烷的浓度，相关数据见表3，环氧氯丙烷的平均回收率为101.7%，RSD为3.48%。

表3 环氧氯丙烷的回收率试验数据

3.9 样品的测定

取自制的羧甲基交联淀粉止血颗粒三批(20180820,20180821,20180822)，每个批次各取三份，按照3.3节的方法处理后，在规定的色谱条件下进行分析，测定样品中的环氧氯丙烷的残留量，结果均未检出，样品中的环氧氯丙烷残留量小于方法的检测限0.336 μg/mL，符合药典的要求(小于0.05%)。

4 结论

本研究建立了一种采用顶空气相色谱法测定羧甲基交联淀粉止血颗粒中环氧氯丙烷残留量的方法，精密度1.22%，最小检测限0.336 μg/mL，最小定量限0.84 μg/mL，环氧氯丙烷的质量浓度为0.84～6.72 μg/mL时，其峰面积与浓度线性关系良好。在本研究确定的色谱条件下，可以简单准确地分析羧甲基交联淀粉止血颗粒中环氧氯丙烷的残留量，该方法测量准确、精密度高。