lncRNA CASC11在小细胞肺癌中的表达及意义

刘丽丽，吕立丽，谷雪

唐山市人民医院放化五科，河北 唐山 063000

小细胞肺癌是未分化癌的一种，发病率约占肺癌的15%[1]。小细胞肺癌具有极强的侵袭性，患者可于早期发生血行转移或淋巴结转移，因此多数患者确诊时就存在锁骨以上区域转移情况，即处于广泛期[2]。小细胞肺癌患者中位生存时间仅1年左右，5年生存率低于5%，严重影响人类健康[3]。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一种无完整开放阅读框且无或较少蛋白编码能力的RNA。临床研究表明，lncRNA是细胞生理、病理活动的重要参与因子，并且与肿瘤发生、发展密切相关[4]。肿瘤易感基因11（cancer susceptibility 11，CASC11）是新近发现的一种lncRNA。本研究探讨小细胞肺癌组织中lncRNA CASC11的表达及意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2016年1月至2018年1月唐山市人民医院收治的小细胞肺癌患者的病历资料。纳入标准：①均经病理组织学确诊；②术前未行放化疗等治疗；③临床随访资料保存完整。排除标准：①合并有其他恶性肿瘤；②合并有心肝肾功能不全、感染、自身免疫系统性疾病等。根据纳入、排除标准，共纳入小细胞肺癌患者90例，另选取外伤患者90例。小细胞肺癌患者中，男50例，女40例；年龄（51.46±9.22）岁；体重指数（22.03±3.15）kg/m2。外伤患者中，男55例，女35例；年龄（50.87±8.61）岁；体重指数（21.89±3.06）kg/m2。小细胞肺癌患者和外伤患者临床特征比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。取小细胞肺癌患者的小细胞肺癌组织90例及外伤患者的正常肺组织90例。

1.2 检测方法

选用Trizol法提取两种组织总RNA，并选用紫外分光光度计检测RNA纯度、浓度，并对RNA样本进行凝胶电泳。取完整度高的RNA样本，选用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time-polymerase chain reaction，qRT-PCR）法检测CASC11表达水平，RNA逆转录试剂盒购自大连宝生物工程有限公司，基因扩增梯度PCR仪购自冠森生物科技上海公司。CASC11及内参上下游引物均由上海生工生物工程有限公司提供，CASC11上游引物：5'-CGACCCCAACACCTTCTTTG-3'；下游引物：5'-CTCACCCCTAAGTYCGCTGG-3'。内参为β-actin，上游引物：5'-AGTGTGACGlDGACATCCGCAAAG-3'；下游引物：5'-ATCCACATCTGCTGGAAGGTGGAC-3'。检测操作参照仪器及试剂盒说明书进行。

1.3 治疗方法

所有小细胞肺癌患者均行三维适形放疗技术，剂量约为每次1.5 Gy，每天2次，总剂量约为45 Gy。同步进行化疗，放疗第1天开始进行依托泊苷+顺铂方案化疗：20 mg/m2顺铂+100 mg依托泊苷静脉滴注，d 1～5，28天为一个疗程，持续2个疗程。

1.4 资料收集

对小细胞肺癌患者进行电话随访6～48个月，记录患者一般资料、临床症状及影像学检查结果。同时记录患者预后情况，计算患者无进展生存时间和总生存时间。无失访病例，截至随访日期，生存41例，死亡49例。

1.5 统计学处理

采用SPSS 19.0软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验，生存曲线采用Kaplan-Meier法绘制，生存情况比较采用Log-rank检验，多因素分析采用Cox比例风险回归模型分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小细胞肺癌组织和正常肺组织中lncRNA CASC11表达的比较

小细胞肺癌组织中lncRNA CASC11表达量为（1.04±0.12），明显低于正常肺组织的（8.41±1.21），差异有统计学意义（t=57.501，P＜0.01）。

2.2 小细胞肺癌组织中lncRNA CASC11的表达与 临床特征的关系

根据本研究中lncRNA CASC11的平均表达水平，将lncRNACASC11＜1.04定义为低表达，lncRNA CASC11≥1.04定义为高表达。广泛期、有淋巴结转移、有远处转移的小细胞肺癌患者的小细胞肺癌组织中lncRNA CASC11低表达率分别明显高于局限期、无淋巴结转移和无远处转移患者（P＜0.01）。（表1）

表1 不同临床特征小细胞肺癌患者的小细胞肺癌组织中lncRNA CASC11表达情况的比较（n=90）

2.3 小细胞肺癌中lncRNA CASC11的表达与预后的关系

lncRNA CASC11低表达患者中位无进展生存时间和总生存时间分别为11个月和18个月，分别短于lncRNA CASC11高表达患者的16个月和26个月，差异均有统计学意义（χ2=14.806、31.630，P＜0.05）。（图1、图2）

图1 lncRNACASC11低表达（n=46）患者与lncRNA CASC11高表达（n=44）患者的无进展生存曲线

图2 lncRNACASC11低表达（n=46）患者与lncRNA CASC11高表达（n=44）患者的总生存曲线

2.4 小细胞肺癌患者预后的Cox比例风险分析

将分期、淋巴结转移、远处转移及lncRNA CASC11表达进行Cox比例风险回归分析，结果显示，分期、淋巴结转移、远处转移及lncRNA CASC11表达均是小细胞肺癌患者预后的影响因素（HR=1.554、1.451、2.389、1.249，P＜0.01）。（表2）

表2 小细胞肺癌患者预后的Cox比例风险分析

3 讨论

小细胞肺癌具有淋巴细胞型、中间细胞型以及混合型3种亚型，疾病危险因素与吸烟、遗传以及环境因素等有关[5-6]。患者症状与非小细胞肺癌相似，如咳血、胸痛、气喘等[7]。相较非小细胞肺癌，小细胞肺癌病灶倍增速度更快，恶性程度更高，转移时间更早，并且异常内分泌综合征发生率更高[8-9]。基于这种病理特征，小细胞肺癌治疗方案以全身性化疗、手术等为主。虽然小细胞肺癌早期对放化疗具有较高敏感性，但至今临床依然无法治愈本病[10]。因此，探究小细胞肺癌病理机制，分析本病早期诊断及预后评估方法，并寻找靶向治疗新方向成为临床研究热点。

lncRNA因基本不参与蛋白质编码，而被认为是基因转录的“噪音”[11]。但近些年的研究显示，lncRNA的核苷酸链具有特定、复杂的结构空间，可为蛋白质结合提供大量位点，同时还可借助碱基互补配对原则与DNA、RNA特异性、动态性结合，并调控多种基因表达[12-13]。lncRNA可通过多种层面参与肿瘤的发生、发展，其不但是肿瘤分子水平诊断的重要标志物，还是基因治疗以及预后评估的重要介质[14]。lncRNA CASC11是位于人染色体8q24区域上的一种lncRNA，具有诱导MYC基因位点的远程染色质环生成功能，并促进MYC启动子与增强子相互作用。有研究发现，乳腺癌患者lncRNA CASC11高表达可增强肿瘤细胞的迁移能力，并导致肿瘤细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性下降[15]。还有研究发现，结肠癌组织中lncRNA CASC11表达水平显著下降，并且其表达水平与肿瘤转移与否密切相关[16]。本研究中，小细胞肺癌组织中lncRNA CASC11表达水平明显低于正常肺组织，表明lncRNA CASC11低表达与小细胞肺癌密切相关，这与前述研究结果相似。本研究还发现，广泛期、有淋巴结转移、有远处转移小细胞肺癌组织中lncRNA CASC11低表达率明显高于局限期、无淋巴结转移和无远处转移的患者，表明lncRNA CASC11低表达还与小细胞肺癌分期、淋巴结及远处转移密切相关，提示临床或可通过检测lncRNA CASC11分析小细胞肺癌患者分期、淋巴结及远处转移情况。随后的研究发现，lncRNA CASC11低表达患者无进展生存时间和总生存时间分别为11个月和18个月，分别短于lncRNA CASC11高表达患者的16个月和26个月，表明lncRNA CASC11表达水平还与小细胞肺癌患者生存期密切相关。Cox比例风险回归分析结果显示，分期、淋巴结转移、远处转移及lncRNA CASC11表达是小细胞肺癌患者预后的影响因素。

hnRNP-K蛋白属于hnRNP家族，主要表达于真核生物体内，该蛋白具有多种生物活性，如RNA转录、DNA复制及重组以及前体mRNA剪接等[17]。大多数hnRNP家族蛋白被证实与多种肿瘤密切相关。hnRNP-K具有lncRNA CASC11结合能力，并且lncRNA CASC11可调控hnRNP-KmRNA的稳定性。有研究发现，lncRNA CASC11可通过增强hnRNP-KmRNA的稳定性增强hnRNP-K表达水平，而hnRNP-K对lncRNA CASC11的表达具有反作用[18]，该学者推测lncRNA CASC11与hnRNP-K两者间的正反馈作用可能与其复合物介导的下游基因有关，但两组结合后影响肿瘤发生、发展的机制尚不明确。

本研究对小细胞肺癌组织中lncRNA CASC11表达水平及其意义进行分析，发现lncRNA CASC11表达水平与小细胞肺癌分期、转移以及预后密切相关，lncRNA CASC11或可成为小细胞肺癌分期、转移以及预后的评估指标。此外，lncRNA CASC11可能通过hnRNP-K蛋白参与小细胞肺癌的发生、发展，这或可成为小细胞肺癌的靶向治疗新方向。

综上所述，小细胞肺癌组织中lncRNA CASC11表达明显降低，与临床特征及预后有一定关系，值得进一步研究。