九华黄精九蒸九晒炮制过程中总多糖的含量变化研究

胡叶青，胡云飞，吴其国*

（1.安庆医药高等专科学校药学系，安徽安庆246052；2.合肥市食品药品检验中心，安徽合肥230000）

黄精为百合科植物滇黄精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.）、黄精 （Polygonatum sibiricum Red.）或多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua）的干燥根茎。安徽九华山地区的黄精品种为多花黄精，该植物在九华山地区生长范围广泛，在云南、贵州、浙江、山东也有分布，常见于阴湿山坡和沟谷处，但药材质量都不如九华山地区，为突出其地方特色，取名为九华黄精[1]。安徽的九华黄精品种更是获批国家地理标志保护产品[2]。

从古至今黄精的炮制方法有很多，对黄精的炮制历史沿革总结，传统的炮制方法以九蒸九晒法为主，九华黄精作为一个地方特色品种，当地很多企业结合九华山旅游资源通过古法九蒸九晒炮制九华黄精，将其加工成具有地方特色的药食两用品种，在市场上比较受欢迎，基于此，对其质量标准研究已显得比较重要。

多糖是黄精的主要功能性物质[3]，现代研究表明黄精多糖具有多种药理作用。主要包括以下几个方面的内容。

（1）有研究表明黄精多糖可提高免疫功能，傅圣斌等[4]通过实验研究表明黄精多糖可以提高免疫抑制模型小鼠的免疫力，肖小妹等[5]研究表明黄精多糖可呈剂量依耐性的提高肾病综合征患儿红细胞免疫功能。

（2）在神经系统方面，黄精多糖可以呈浓度依耐性抑制多巴胺神经元凋亡、促进多巴胺神经元再生作用[6]，黄芳等[7]通过大鼠迷宫实验证明黄精多糖可提高大鼠的记忆和学习能力，陈辰等[8]研究表明黄精多糖可通过提高抑郁小鼠脑内单胺类神经递质的含量来改善抑郁症模型小鼠的行为学。

（3）黄精多糖具有心肌细胞保护作用，雷升萍等[6]研究表明黄精多糖对H/R诱导的H9c2心肌细胞具有保护作用，其作用可能与抑制心肌细胞凋亡有关。

（4）黄精多糖对肝肾有保护作用，韩春杨等[10]研究表明黄精多糖对CCl4诱导的大鼠肝损伤有良好的保护保护，李超彦等[11]研究表明黄精多糖能改善顺铂（DDP）所致大鼠肾功能损害。

（5）黄精多糖还具有降血糖、抗肿瘤以及抗菌等作用，王艺等[12]研究表明黄精多糖能改善STZ诱导的糖尿病大鼠胰岛素抵抗和症状，段华等[13]研究表明黄精多糖通过激活Caspase系统诱导肝癌H22移植瘤细胞凋亡，李志涛等[14]提取的黄精多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和藤黄球菌均具有明显的抑制作用。

本研究通过测定九华黄精九蒸九晒炮制过程中总多糖的含量变化，为九蒸九晒法炮制九华黄精的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

T90+型紫外可见分光光度计（英国PG INSTRUMENTS公司），XP26型分析天平（德国Mettler toledo公司，精度0.001 mg），HH-4型数显恒温水浴锅（山东鄄城创新仪器有限公司）。

1.2 试药

葡萄糖对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110833-201707，纯度：99.9%），蒽酮（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号20170222），硫酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司），水为超纯水（屈臣氏公司）。

九华黄精栽培品购自池州市大王洞中药材种植专业合作社，九华黄精野生品购于池州市九华府金莲智慧农业有限公司。

2 方法与结果

2.1 九蒸九晒九华黄精的制备

取野生和栽培九华黄精生药材，除去杂质，洗净，每100 kg黄精，用黄酒20 kg。

（1）第1次蒸制、晒干。将黄酒总量的20%，与净选好的生品九华黄精搅拌均匀，并闷润至黄酒被药材吸尽，再蒸制8 h，取出，放在太阳下晒至药材外皮微干》

4%氟嘧啶草醚+2.5%五氟磺草胺可分散油悬浮剂100毫升/亩用药后20d对水稻田稗草和野慈姑株防效分别为100%。可以看出4%氟嘧啶草醚+2.5%五氟磺草胺可分散油悬浮剂100毫升/亩对稗草防好，对野慈姑的防效很好。

（2）第2次至第8次蒸制、晒干。均是将上一步的半成品拌入黄酒总量的10%，闷润至黄酒被药材吸尽，再取出，放在太阳下晒至药材外皮微干，反复操作7次。

（3）第9次蒸制、晒干。将剩余10%黄酒拌入上述经8次蒸制、晒干的半成品中，蒸至表面黑漆色且发亮，取出，晒至表面干燥，即得九华黄精的九蒸九晒炮制品。

2.2 对照品溶液的制备

取经105°C干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀即得（每1 mL中含无水葡萄糖0.33 mg）。

2.3 测定波长的选择

精密吸取多糖溶液适量，置10 mL具塞刻度试管中，加水至2.0 mL，摇匀，在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置水浴中保温10 min，取出，立即置冰水浴中冷却10 min，取出，以未加葡萄糖溶液为空白对照，然后于450～700 nm波长范围内扫描，结果如图1所示。

由图1可知，黄精多糖与蒽酮-浓硫酸反应后在635 nm处有最大吸收峰，由此可以确定635 nm为测定波长。

图1 蒽酮-硫酸分光光度法的紫外扫描图谱

2.4 标准曲线绘制

精密量取对照品溶液 0.l、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分别置 10 mL具塞刻度试管中，各加水至2.0 mL，摇匀，在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置水浴中保温10 min，取出，立即置冰水浴中冷却10 min，取出，以相应试剂为空白。参照紫外-可见分光光度法（通则0401)，在635 nm波长处测定吸光度。

以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线如图2所示，得线性回归方程：y=0.003 1 x+0.176 7（r=0.999 0）。

由图2可知，葡萄糖浓度在16.5～198.0 μg/mL范围内线性关系良好。

图2 葡萄糖的标准曲线

2.5 供试品溶液的制备

取60℃干燥至恒重的本品细粉约0.20 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%乙醇60 mL，置水浴中加热回流1 h，趁热滤过，残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次10 mL，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水60 mL，置沸水浴中加热回流1 h，趁热滤过，残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次8 mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.6 稳定性试验

精密吸取供试品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥试管中，照2.4项标准曲线绘制的方法，自“加水至2.0 mL”起，显色后，分别于 0、0.5、1、2、4、8、12、24 h 依法测定吸光度，RSD 为 1.97%，结果表明样品溶液在24 h内稳定性良好。

2.7 精密度试验

精密吸取对照品溶液0.5 mL于10 mL具塞干燥试管中，照2.4项标准曲线绘制的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法测定吸光度，重复测定6次，RSD为0.62%，结果表明仪器精密度良好。

2.8 重复性试验

取60℃干燥至恒重的九晒九晒九华黄精粉约0.2 g，精密称定，按2.5项供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，平行制备6份供试品溶液，分别精密量取供试品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥试管中，照2.4项标准曲线绘制的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法测定吸光度。经计算6份供试品溶液的RSD为1.77%，结果表明该方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验

取6份经60℃干燥至恒重的九晒九晒九华黄精粉约0.2 g，精密称定，置100 mL圆底烧瓶中，精密加入对照品溶液适量，按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别精密量取供试品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥试管中，照2.4项标准曲线绘制的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法测定吸光度。计算平均回收率为98.23%，RSD为2.05%，表明该方法回收率良好。

2.10 样品溶液的测定

精密量取供试品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥试管中，照2.4项标准曲线绘制的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法测定吸光度，计算多糖含量，结果如表1所示。

表1 九华黄精九蒸九晒过程中总多糖含量的变化 （%）

3 总结与讨论

3.1 结论

通过对九华黄精的九蒸九晒炮制过程中总多糖的含量测定可以得出以下结论。

（1）野生和栽培九华黄精的总多糖随着蒸制次数的增加，总多糖的含量均是先增加后减少，栽培九华黄精的总多糖含量由一蒸一晒的18.68%降为九蒸九晒的10.84%，四蒸四晒时达到最高31.51%》。

（2）野生九华黄精的总多糖含量由一蒸一晒的22.18%降为九蒸九晒的12.67%，五蒸五晒时达到最高32.81%。

3.2 讨论

目前，九华黄精炮制多要反复蒸制，且以“反复蒸至滋润黑色”为经验指标[15]，九蒸九晒这种炮制方法虽然会导致多糖含量降低，但却是传统的经典炮制方法，而2015年版《中国药典》仅规定了黄精多糖作为其含量限度，这种方法的专属性不够，难以反映黄精的质量特点[16]。因此，在九华黄精炮制过程中，如何控制蒸制次数、时间等，并结合炮制过程中其它成分的变化，来制定其质量控制标准，需要进行更深入的研究。