LC-MS/MS测定沙卡布曲缬沙坦钠中的基因毒性杂质

2019-12-12马平平周君安

山东化工 2019年22期

马平平，周君安，孙琳

(江苏豪森药业集团有限公司，江苏连云港 222000)

沙卡布曲缬沙坦钠(Sacubitril/Valsartan)是2015年FDA批准的治疗心力衰竭药物Entresto(沙卡布曲缬沙坦钠)[12]。5-(4'-叠氮甲基-[1,1'-二苯基]-2-基)-1H-四氮唑是合成沙卡布曲缬沙坦钠合成的中间体，属于潜在的基因毒性杂质[3]。根据美国食品和药物管理局(FDA)和国际药品注册协调会议(ICH)关于基因毒性杂质的指导原则要求，本文拟建立采用LC-MS/MS测定本品合成中间体5-(4'-叠氮甲基-[1,1'-二苯基]-2-基)-1H-四氮唑的含量方法。

1 仪器与试剂

仪器：XS105电子分析天平(瑞士METTLER公司)；UltiMate 3000高效液相色谱仪(美国戴安公司)；TSQ Quantum Ultra 三重四级杆串联质谱仪，配有电喷雾离子源(美国Thermo Scientific公司)。

试剂：乙酸铵(色谱纯，上海安谱科学仪器公司)；乙腈(色谱纯，Fisher公司)；甲醇(色谱纯，Fisher公司)；超纯水(屈臣氏)；5-(4'-叠氮甲基-[1,1'-二苯基]-2-基)-1H-四氮唑(本公司自制)

2 实验方法与结果

2.1 色谱-质谱条件

色谱条件：照高效液相色谱-质谱法(中国药典2015年版四部通则0512和中国药典2015年版四部通则0431)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Agilent Poroshell120 EC-C18 50×4.6mm，2.7μm或柱效类似的色谱柱)，以0.01mol/L乙酸铵为流动相A，甲醇-乙腈(20∶80)为流动相B，流速为每分钟0.3mL，柱温25℃，梯度洗脱程序t：0-6-15-15.1-18 min，流动相比例B%：35%-50%-35%-35%，柱温为40℃，进样量为5 μL。

质谱检测器参数如下(质谱参数根据具体仪器可进行调整以满足系统适用性)：扫描模式为ESI(-)、SRM模式，离子喷雾电压为3000V，离子源温度为300℃，鞘气压力为30arb，辅助气压力为5arb，离子传输毛细管温度为300℃，设置管状透镜补偿电压分别为-56V，选择质荷比(m/z)为276.1/192.1离子对进行检测，碰撞能量为14V。

2.2 溶液配制

2.2.1 供试品溶液

取沙卡布曲缬沙坦钠适量，精密称定，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液

精密称取5-(4'-叠氮甲基-[1,1'-二苯基]-2-基)-1H-四氮唑约45mg，置100mL的量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取1mL，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀作为对照品溶液(45ng/mL)。

2.3 分析方法确证

2.3.1 质谱分析

将对照品溶液采用蠕动泵进样模式，进行全扫描(full scan)形式分析检测，选择质荷比(m/z)为276.1/192.1离子对进行检测。

2.3.2 方法的专属性

在所确定的色谱-质谱条件下，对空白溶液(甲醇)和对照品溶液(45ng/mL)进行检测，考察方法的专属性，色谱图见图1～图2。结果表明：在该色谱条件下，空白溶液不干扰杂质的检测，专属性良好。

图1 空白溶液LC-MS图

图2 对照品溶液LC-MS图

2.3.3 线性关系考察

精密称取对照品约45mg，置100mL的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10mL，置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为储备溶液(450ng/mL)，精密量取该储备液1，2，5，10，20mL置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成每1mL中各含杂质10294-0315为4.51，9.02，22.56，45.12，90.24ng的系列标准溶液；精密量取上述系列标准溶液各5μl，分别注入液相色谱-质谱仪中，记录色谱图，量取峰面积。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，杂质10294-0315线性回归方程为：A = 516.9206×C+48.1259，r=0.9997，说明杂质10294-0315在4.51ng/mL～90.24ng/mL范围内线性良好测定结果见下表1。