参苏丸中4种成分HPLC法测定

安艳苏 许庆 张丽琴

【摘 要】 目的：建立高效液相色谱法测定参苏丸中葛根素（A）、柚皮苷（B）、橙皮苷（C）和新橙皮苷（D）的含量测定方法。方法：采用Hypersil ODS2色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）;柱温：35℃;流动相：甲醇-水，线性梯度洗脱，流速：1mL/min;检测波长：225nm。结果：4种成分均能达到基线分离，且在相应浓度范围内线性关系良好，平均回收率均在98%以上。结论：本法准确、简便、快捷、结果稳定，可用于参苏丸中葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量测定。

【关键词】 参苏丸;高效液相色谱法;含量测定

【中图分类号】R284.1   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2019）16-0053-03

Abstract：Objective To establish an HPLC method for the determination of four components of Shensu pill：Puerarin（A），Method for the detemination of pomeloside（B）、orange peel glycoside（C）、 and new orange peel glycoside（D）. Methods Use hypersil ODS2 column （250 mm×4.6 mm，5 microns）;Column temperature 35 ℃;Flow phase： methanol-water;linear gradient elution，Flow rate：1 mL/min;detection wavelength 225 nm.Results All four componentsachieve baseline separation and linear relationship within the corresponding concentration range Goog，The average recovery is above 98%.Conclusion Thismethod accurate、simple、fast，the results were stable and could be used to determine the content of puerarin， naringin，orangetin and new orangeside in shensu pill.

Keywords：Shensu Pill;HPLC;Assaying

参苏丸是中国药典收载的品种，由党参、紫苏叶、葛根、前胡、茯苓、半夏（制）、陈皮、枳壳（炒）、桔梗、甘草、木香等组成，具有益气解表、疏风散寒、祛痰止咳等作用，用于身体虚弱、感受风寒所致感冒，症见恶寒发热、头痛鼻塞、咳嗽痰多、胸闷呃逆、乏力气短等[1]。葛根、陈皮和枳壳为其主药，现代药理研究表明，葛根中葛根素、大豆苷元和大豆苷等异黄酮类化合物为有效成分，对心血管系统、免疫系统的疾病有较好的治疗作用，其制剂用于治疗头晕头痛、高血压病、心绞痛和突发性耳聋等疾患疗效显著，临床应用广泛[2]。陈皮中有较高含量的陈皮苷 Hesperidin （亦称橙皮苷、橘皮苷），具有维持血管正常渗透压、降低血管脆性、缩短流血时间等作用。陈皮和枳壳来源于同芸香科不同种的不同药用部位，均含有丰富的黄酮类化合物，陈皮主要含有橙皮苷、新橙皮苷，枳壳主要含柚皮苷、新橙皮苷及少量的橙皮苷，且上述黄酮类化合物结构非常相似。为更好地控制药品质量，本研究参照文献[3-4]建立了高效液相色谱法测定其中4种成分-葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量测定方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 1260型高效液相色谱仪（包括G1311C型四元泵、G1329B型自动进样器、G1316A型柱温箱、G1314F型紫外检测器，美国Agilent 公司）;MS205DU电子分析天平（上海梅特勒仪器有限公司）;KQ-300UDB型双频数控超声清洗器（昆明市超声仪器有限公司）。Hypersil ODS2 C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm，大连依利特分析仪器有限公司）。

1.2 材料 葛根素（批号：110752-201514，含量：95.5%）、柚皮苷（批号：110722-201613含量：94.3%）、橙皮苷（批号：110721-201617，含量：96.1%）、新橙皮苷（批号：111857-201703，含量：99.2%）均购于中国食品药品检定研究院。参苏丸（规格：6g/袋，批号：20160101、20160103、20170503，云南XX药厂）。甲醇为色谱纯;水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色譜条件 色谱柱：Hypersil ODS2色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）;流动相：甲醇（A）-水（B）线性梯度洗脱（程序见表1）;柱温：35℃;流速：1mL/min;检测波长：225nm;进样量：5μL。按上述色谱条件，依次取阴性样品溶液、混合对照品溶液和供试品溶液各5μL进样，记录色谱图。葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的保留时间依次为：15.2min、27.2min、28.8min、30.3min;理论板数依次为：13181、39115、43199、49916;4个成分均分离完全，阴性样品溶液在与混合对照品溶液相应峰处未见色谱峰出现，说明参苏丸中的其他药物及辅料对测定无干扰，如图1所示。

2.2 混合对照品溶液制备 分别精密称取四种对照品（A：16.30mg;B：15.22mg;C：15.20mg;D：14.96mg）于4个10mL的量瓶中，加甲醇使溶解，定容至刻度，摇匀，分别精密量取上述四种对照品溶液2mL于同一25mL的量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。作为混合对照品储备液（A：124.53μg/mL;B：114.82μg/mL;C：116.86μg/mL;D：118.72μg/mL）;再精密吸取2.5mL于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液制备 取样品适量，研细，精密称取约1.0g，置于100mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理（功率240W，频率45KHz）40min，放至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液制备 取不含葛根的参苏丸处方与不含枳壳和陈皮的参苏丸处方，按参苏丸[1]制法制备不含葛根与枳壳和陈皮的阴性样品，按“2.3”项下的制备方法制备阴性样品溶液，即得。2.5 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液0.5、1、2.5、5、10mL于10mL的量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得。按“2.1”项下色谱条件进样测定，以进样浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归，计算回归方程，结果见表2。2.6 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液，连续进样5次，A、B、C、D峰面积的RSD（n=5）分别为0.59%、0.51%、0.64%、0.54%。结果表明进样精密度良好。

2.7 重复性试验 取批号20160103的样品，研细，精密称取约1.0g，共5份。按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别按“2.1”项下的方法测定，记录色谱图，结果A、B、C、D含量的RSD（n=5）分别为1.1%，0.82%，1.0%，0.79%，表明方法重复性良好。

2.8  稳定性试验 按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，分别于配制后0、4、8、12、16、24h进样测定，记录峰面积、结果A、B、C、D的峰面积的RSD依次为：0.86%、0.79%、0.92%、0.77%。结果表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.9  加样回收率试验 取准确测定含量批号为“20160103”的样品，研细，精密称取约0.5g，共6份，分别加入对照品溶液（A：1556.6μg/mL，B：1435.2μg/mL，C：1460.7μg/mL，D：1484.0μg/mL）各1mL，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样，计算A、B、C、D的平均回收率（n=6）和RSD，结果见表3，结果表明回收率良好。

2.10 样品含量测定 取3批次样品，各3份，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别进样，记录峰面积，以外标法计算各成分含量，结果见表4。

3 讨论

3.1 流动相的选择 试验中曾采用0.1%磷酸溶液，甲醇，乙腈，水作为流动相[3-4]，但在试验过程中甲醇—水为流动相峰型好，且分离效果良好，故选择甲醇—水为流动相。

3.2 实验中样品提取 曾采用水，稀乙醇、乙醇、甲醇等溶剂，结果显示甲醇提取效果较好。同时考察了超声提取，加热回流提取方式，结果两者差异不大，但超声提取简便、快捷，故选择超声提取;试验过程中比较了超声提取（功率240W，频率45KHz）20、30、45、60、90min的提取效果，结果显示超声提取（功率240W，频率45KHz）45、60、90min的结果一致，故选择超声提取（功率240W，频率45KHz）45min为提取时间。

参苏丸是中国药典收载的品种，葛根、陈皮和枳壳均为其主药，且葛根素、油皮苷、橙皮苷、新橙皮苷又是其主药成分。通过该方法可以有效控制参苏丸中葛根、陈皮、枳壳的质与量。在测定过程中、样品的分离度较好、阴性样品无干扰、方法简便，快捷，准确、一法可控制该处方中多味药材的质与量。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2]王晓青，傅静.葛根的药理作用研究进展[J].北京中医药大学学报，1994（3）：39-41.

[3]张顺平，张顺吉.消化胶囊中7个成分的测定[J].中国医药工业杂质，2017，10（48）：1489-1492.

[4]杨佳静，薛佳，周华芳，等.HPLC法同時测定胃苏颗粒中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量[J].中国药房，2014（4）：372-374.

（收稿日期：2019-06-13 编辑：程鹏飞）