猫须草的组织培养及添加物研究

摘要：采用组织培养技术使用四种培养基和两种添加物对猫须草进行组培試验。MS培养基+6-BA 1.0mg/L+香蕉、MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭、N6培养基+6-BA 1.0mg/L+香蕉、N6培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭。试验表明：使用上述四种培养基对猫须草进行组织培养，都能够形成愈伤组织，并最终形成组培苗，但是MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培养基表现最好，使用MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培养基是试验的四种培养基中最适合猫须草组培的培养基质，在以后的组培苗繁育试验中可以根据该培养基进行激素方面的细微调节来达到最优目的。在培养基中加入香蕉和活性炭成分，目的是对比在猫须草培养基中加入这两种添加物后各个时期的表现。结果表明，加入活性炭的培养基要优于加香蕉的培养基。

关键词：猫须草;组织培养;添加物;试验

基金项目：猫须草在永州市的抗寒品种选育及高产关键技术研究 （永科发〔2017〕41号）

中图分类号：S567.23                               文献标识码：  A              DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2019.20.033

1 材料与方法

1.1 试验仪器与材料

猫须草幼嫩茎尖切2～3cm小段、新洁尔灭、棉球、超净工作台、镊子、酒精灯、MS培养基+6-BA 1.0mg/L+香蕉培养基、MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培养基、N6培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培养基、N6培养基+6-BA 1.0mg/L+香蕉培养基、解剖刀、无菌培养室。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体的选取及清洗 取猫须草茎尖5cm左右，放置玻璃瓶用清水冲洗10min，然后，用新洁尔灭洗涤，用清水冲洗20min。洗净后迅速放入接种室，用75%酒精或者0.1%氯化汞清洗10s，就可以进行接种。

1.2.2 培养基的配制  培养基同时采用四种培养基：MS培养基+6-BA 1.0mg/L+香蕉、MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭、N6培养基+6-BA 1.0mg/L+香蕉、N6培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭。在MS和N6培养基的基础上每升培养基中加入1.0mg6-BA、少量的香蕉和活性炭。以上培养基中每升都加入蔗糖20g/L、琼脂7.5g/L，配制完成后用0.1mol/LNaOH将pH值调至5.6～5.8。

香蕉泥的配制：将1kg香蕉切成片，加少量水煮沸约40min将香蕉煮烂，最后将固体物质通过纱网过滤，剩下的汁才能加入培养基中。不同培养基香蕉含量不同，在这里试验中使用200g/L。

活性炭培养基，在每升培养基中加入500mg活性炭。

1.2.3 接种及组培期间观察 在超净工作台接种时，切除灭菌后氧化的黑色部位，留下茎尖和较嫩的腋芽约1cm左右，每瓶放置4～6个芽点。四种培养基，每种接20瓶。接种完，放入培养室中温度控制在21℃～23.5℃，光照度为2000Lx，光照时间为12h，进行分化处理，并进行观察。最快的MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培养基7d切口处开始膨大，有愈伤组织逐渐产生。10d后产生愈伤组织，12d开始萌动，发出新芽，形成丛芽。24d就可以进行转接，进行壮苗处理。这时由于开始产生出叶片，培养室中温度应控制在23±1℃，光照度2200Lx，光照时间10h。将丛芽从增殖培养基取出，分切成3个新芽的小块，分别接种至壮苗培养基中，每瓶12丛。转接后7～10d后，丛芽会长成1～2cm的瓶苗。15～20d长至3cm时，可以对瓶苗进行继代培养和生根培养。在这里试验选择采用生长较强壮的MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭瓶苗进行继代培养，其余瓶苗进行生根培养，进行生根培养基转接。转接6d后开始发现有白色突起，10d后看见有明显的白色粗根形成。

2 结果与分析

由表1可知：在猫须草组织培养试验中，从分化到生根期。这四种培养基不管是分化、增殖、壮苗、生根，表现最好的是MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培养基。由于试验后期需要，最后将MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培养基培养的组培苗转入继代培养。确定MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培养基是试验的四种培养基中最适合猫须草组培的培养基质，在以后的组培苗繁育试验中可以根据该培养基进行激素方面的细微调节来达到最优目的。

表1 猫须草组织培养对比试验

后期在继代培养中，MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培养基所培养的猫须草组培苗比较强壮，感染、褐化、白化率都较低，非常适合做猫须草的培养基质。

由表2可知：在不同添加剂对猫须草组织培养的影响试验中，试验选择香蕉和活性炭做猫须草培养基的培养基添加剂。这两种添加剂在组织培养生产中会经常使用。在试验过程中，猫须草是草本植物，本身就容易产生愈伤组织和分化。不需要特别的激素和营养来促进它的愈伤组织和分化。在对比试验中，用活性炭做添加剂比香蕉要好的多。

表2  不同添加剂对猫须草组织培养的影响

3 结论

由表五可知，使用上述四种培养基对猫须草进行组织培养，都能够形成愈伤组织并最终形成组培苗，但是MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培养基表现最好，使用MS培养基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培养基是试验的四种培养基中最适合猫须草组培的培养基质，在以后的组培苗繁育试验中可以根据该培养基进行激素方面的细微调节来达到最优目的。

在培养基中加入香蕉和活性炭成分，目的是对比一下在猫须草培养基中加入这两种物质在各个时期的表现。结果表明，加入活性炭的培养基要优于加香蕉的培养基。

参考文献

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作者简介：李纲，硕士，讲师，研究方向：栽培技术。