幼儿贫血患者的调节T细胞表达及临床预后相关性研究

滕广帅，董福强

（天津医科大学第二医院，天津 300070）

幼儿贫血是小儿时期常见的一种症状或综合征，且临床上根据外周血红蛋白或红细胞数分为轻度、中度、重度3种[1]。临床研究表明[2]：幼儿贫血诱因较多，包括：叶酸、维生素B12及铁等物质缺乏、感染、血液病等，发病早期临床表现为皮肤、黏膜苍白为主，随着贫血的加剧可表现为心跳加快、食欲减退及精神不振等，严重者可表现为营养低下、体格发育迟缓、易疲倦等，影响患儿健康。中医上将其归属于“萎黄”“血虚”“疳证”等范畴进行辨证施治。此病的产生，与脾、肾、心、肝密切相关。脾胃为后天之本，气血生化之源，又具统血之能，然小儿脾常不足，脏腑形气未充，若饮食失节，喂养不当，脏腑虚损，虫积致损等损伤脾胃，使脾胃虚弱，气血生化无源，会造成贫血。

调节性T细胞属于一类控制体内自身免疫反应性的T细胞亚群，表达水平能反映自身免疫性疾病严重程度，参与疾病发生、发展，但是在幼儿贫血中的表达及与预后的预测价值研究较少[3-4]。因此，文章以天津市儿童医院治疗的贫血患儿及健康体检者作为对象开展研究，探讨调节性T细胞在幼儿贫血中的表达及与预后的相关性，从而指导临床用药，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2016年3月—2017年3月天津市儿童医院治疗的贫血患儿80例作为研究对象，设为观察组，男 45例，女 35例，年龄（1～5）岁，平均（3．41±0．66）岁；病程（1～5）月，平均（3．23±0．53）月。根据贫血严重程度分为轻度组、中度组与重度组；根据治疗预后分为预后良好组与预后差组：患者血红蛋白提高20 g/L或者有上升趋势评估为预后良组，患者治疗后血红蛋白水平无明显变化评估为预后差组；选择同期健康体检者55例，设为对照组，男 29 例，女26例，年龄（1～6）岁，平均（3．39±0．58）岁。

1.2 纳入、排除标准 纳入标准：1）符合《诸福棠实用儿科学》[5]第6版中幼儿贫血诊断标准，均经生化指标检查确诊。2）观察组均符合铁剂、维生素及饮食强化治疗适应症，且患儿均可耐受。

排除标准：1）合并白血病、恶性肿瘤或入院资料不全者。2）近期给予其他药物干预或影响试验结果。3）既往有输血史或接受免疫抑制剂治疗史者。

1.3 方法 1）仪器与设备。荧光鼠抗人CD4+、CD4+CD125+、CD4+CD125+CD127low单克隆抗体；FAC Station流式细胞仪（美国BD公司）。2）标本采集。观察组入院后日次取空腹静脉血3 mL，对照组健康体检当天取空腹静脉血3 mL，放置在-80℃冰箱中，备用。3）检测方法。采用流式细胞仪完成各组调节性 T 细胞 CD4+、CD4+CD125+、CD4+CD125+CD127low水平。向流式管中加入待测标本100 μL，加入CD4+、CD4+CD125+、CD4+CD125+CD127low荧光标记的单克隆抗体10μL，充分混合振荡均匀后，室温下连续进行20min避光孵育，最后向每管中加入红细胞裂解液1 mL，充分振荡混合后5min避光离心，离心速度1000r/min，去除上层清液，加入磷酸缓冲盐溶液（PBS）液1mL，5 min避光离心，离心速度 1 000 r/min，向离心后的试管中加入PBS液0.5 mL。上述操作完毕后采用流式细胞仪完成调节性T细胞水平测定，并利用Cellquest软件（美国BD公司）分析阳性细胞所占百比例[6-7]。

1.4 统计分析 采用SPSS 22.0软件处理，计量资料，采用平均数±标准差（）表示，组间比较采用t检验，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组调节性T细胞水平比较 观察组调节性 T 细胞 CD4+、CD4+CD125+、CD4+CD125+CD127low百分比，均低于对照组（P<0.05），见表1。

表1 观察组与对照组调节性T细胞水平比较（）Tab.1 Comparison of regulatory T cells levels between observation group and control group（）%

表1 观察组与对照组调节性T细胞水平比较（）Tab.1 Comparison of regulatory T cells levels between observation group and control group（）%

注：与对照组比较，*P<0.05。

组别 例数 CD4+ CD4+CD125+ CD4+CD125+CD127low观察组 80 23.29±1.98* 3.25±0.67* 2.19±0.51*对照组 55 36.78±3.42 6.89±0.98 5.12±0.77

2.2 观察组不同严重程度下调节性T细胞水平比较 观察组贫血患儿中重度组CD4+、CD4+CD125+、CD4+CD125+CD127low百分比低于轻度组、中度组（P<0.05）； 中 度组 CD4+、CD4+CD125+、CD4+CD125+CD127low百分比，低于轻度组（P<0.05），见表 2。

表2 观察组不同严重程度下调节性T细胞水平比较（）Tab.2 Comparison of regulatory T cells levels under different severity in the observation group（）%

表2 观察组不同严重程度下调节性T细胞水平比较（）Tab.2 Comparison of regulatory T cells levels under different severity in the observation group（）%

注：与轻度组比较，*P<0.05；与中度组比较，#P<0.05。

组别 例数 CD4+ CD4+CD125+ CD4+CD125+CD127low轻度组 35 32.49±3.29 6.11±0.91 4.87±0.72中度组 20 26.73±2.15* 4.69±0.69* 3.59±0.51*重度组 25 19.81±2.51*# 2.98±0.60*# 1.78±0.32*#

2.3 观察组不同预后下调节性T细胞水平比较观察组贫血患儿中预后良好组CD4+、CD4+CD125+、CD4+CD125+CD127low百分比高于预后差组（P<0.05），见表3。

表3 观察组不同预后下调节性T细胞水平比较（）Tab.3 Comparison of regulatory T cells levels under different prognosis in the observation group（）%

表3 观察组不同预后下调节性T细胞水平比较（）Tab.3 Comparison of regulatory T cells levels under different prognosis in the observation group（）%

注：与预后差组比较，*P<0.05。

组别 例数 CD4+ CD4+CD125+CD4+CD125+CD127low预后差组 6 18.41±2.11 2.25±0.61 1.67±0.15预后良好组 74 34.35±2.69* 6.68±0.93* 5.03±0.38*

3 讨论

贫血好发于小儿人群，且多数患儿由于营养不良引起，影响患儿健康、成长[8-9]。临床研究表明[10-11]：细胞免疫在幼儿贫血中发挥了重要的作用，并认识到Treg细胞持续表达在机体免疫抑制反应、免疫耐受状态中的作用，其功能能实现细胞之间的直接接触，对于局部免疫反应具有抑制作用。本研究中，观察组调节性 T细胞 CD4+、CD4+CD125+、CD4+CD125+CD127low百分比，均低于对照组（P<0.05）；观察组贫血患儿中重度组 CD4+、CD4+CD125+、CD4+CD125+CD127low百分比低于轻度组、中度组（P<0.05），说明幼儿贫血中调节性T细胞呈低表达，其表达水平能反映幼儿缺血严重程度。临床研究表明[12]：幼儿贫血中存在调节性T细胞水平异常，且患儿多呈低表达。从本研究结果看出：在幼儿贫血中调节性T细胞比例呈下降趋势，可能是由于持续的缺血造成细胞免疫抑制功能缺陷，使机体免疫平衡被打破，加剧疾病的发生、发展。

幼儿贫血危害性相对较大，为了降低幼儿贫血发生率，应采取有效的措施进行干预：1）积极加强地区保健工作与宣传教育工作，不断加强家庭与儿童机构的营养指导；对于容易发生贫血患儿尽早采取有效的措施预防；对幼儿及时添加辅食，早期给予铁剂，对于易感患儿给予铁剂预防；加强患儿铁预防，根据铁元素计算幼儿所需量[13-14]。2）相关部门加大寄生虫等疾病的防疫工作，预防患儿重复感染；对于已经确诊的患儿积极给予饮食强化治疗、干预，配合维生素干预，促进患儿恢复。3）现今中医对营养性缺铁性贫血的治疗的效果比较明显，而且有效解决了西医治疗单纯给予铁剂的改善症状缓慢、胃肠道不良反应大、疗程长的缺点，只要辩证准确，结合小儿生理病理特点，注意脏腑之间的协调作用，组方配药，也收到可观的效果[15]。本研究中，观察组贫血患儿中预后良好组CD4+、CD4+CD125+、CD4+CD125+CD127low百分比高于预后差组（P<0.05），说明调节性T细胞水平能反映患儿治疗预后。因此，幼儿贫血治疗过程中可加强调节性T细胞水平测定，善于根据测定结果调整相关治疗方案，中西结合，使得患儿治疗更具科学性。

综上所述，调节性T细胞在幼儿贫血中呈低表达，且与患儿临床预后呈负相关性，加强调节性T细胞测定能评估预后，指导临床治疗。