喷雾干燥法制备杨梅黄酮微囊

黄 斌，陈 婷，金 岸

(1.湖南医药学院，湖南 怀化 418000；2.贵州健康职业学院，贵州 铜仁 554300)

杨梅(Myrica rubra Sieb. et Zucc)是亚热带果树,为杨梅科(Myricaceae)、杨梅属(Myrica)的常绿乔木[1]，主产于浙江、湖南、云南等地，《本草纲目》记载其具有"生津，止渴，调五脏，涤肠胃，除烦馈恶气"之功效[2]。杨梅中主要含有黄酮类化合物，研究表明,它们能抗炎、清除自由基以及降低心脑血管疾病的发病率[3]，另外还具有抗凝、降血压、抗氧化、抗肿瘤[4]等作用。但杨梅中部分黄酮类成分性质不太稳定，遇空气容易氧化变色，服用时会产生苦味和异味[5]，将其制成微囊后可有效解决这些问题。本研究以靖州杨梅为研究对象，选用高分子化合物羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(hydroxypropyl methyl cellulose phthalate，HPMCP)为囊材，杨梅黄酮为囊芯物，通过喷雾干燥法制备出微囊，从而提高药物的稳定性，为杨梅黄酮类药物新剂型开发以及当地杨梅产业结构升级有着重要意义。

1 仪器与试药

1.1 仪器

SD-BASIC喷雾干燥仪：Lab-plant UK Ltd；LC-350A 超声波中药处理机：上海科导超声仪器有限公司；UV-2800紫外可见分光光度计：上海尤尼柯有限公司；S-3400N 扫描电子显微镜：日本日立公司；H-1650高速台式离心机：长沙湘仪离心机仪器有限公公司；RE-D2AA旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；AUW120D 电子分析天平：日本岛津公司。

1.2 试剂

芦丁标准品(批号201508)购自中国食品药品检定研究院；羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(国药集团化学试剂有限公司)；十二烷基硫酸钠为化学纯(天津市光复精细化工研究所)；乙醇分析纯；蒸馏水。

2 实验方法与结果

2.1 正交设计确定制备工艺

喷雾干燥法制备杨梅黄酮微囊的过程中，存在多种因素影响。通过预试验及文献查阅[6-9]，选择了进风温度(A)、进料速度(B)、囊芯囊材质量比(C)作为考察因素，以包封率作为评价指标进行 L9(34)正交试验。正交试验因素与水平见表 1。

表1 正交试验因素水平Tab.1 Factors and levels

2.2 微囊的制备

称取一定量的囊材HPMCP溶于80%的乙醇水溶液中(配置成3%溶度)，加入杨梅黄酮提取液混匀，按囊芯和囊材总量的4%加入十二烷基硫酸钠，混和均匀，进行喷雾干燥，冷却，制得微囊。

2.3 标准曲线的绘制

图1 标准曲线Fig.1 The standard curve

精密量取芦丁对照溶液2，4，6，8，10mL于25mL的容量瓶中，加入 5%NaNO2溶液1mL，摇匀；6min后加入10%Al(NO)3溶液1mL，摇匀；6min后再加入4%NaOH溶液5mL，摇匀静置10min后精密加入70%乙醇至刻度线，于 510nm处测定吸光度。以样品浓度x为横坐标，吸光度y为纵坐标绘制标准曲线，得线性回归方程为：Y=24.31X+0.109，R2=0.9993。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度试验

精密量取芦丁对照品溶液于25mL容量瓶中，按“2.3”项下方法进行处理，测定其吸光度，重复进样6次，结果RSD=1.72%。

2.4.2 重复性试验

精密称取6份同一份供试品，按“2.3”项下方法进行处理，测定其吸光度，结果RSD=1.35%。

2.4.3 稳定性试验

精密量取同一供试品溶液，分别于0、2、6、12、24、36、48、72h时按“2.3”项下方法进行处理，测定其吸光度，结果RSD=2.14%，表明样品在72h内稳定。

2.5 微囊包封率的测定

2.5.1 微囊表面杨梅黄酮含量的测定

精确称取杨梅黄酮微囊1.00g 溶于适量的水中，定容至100mL后以 3000r/min 的速度离心10min，然后吸取上清液 1mL置于25mL容量瓶中，按“2.3”项下方法进行处理，测定其吸光度再由标准曲线计算出浓度，从而得到微囊表面的杨梅黄酮的含量。

2.5.2 干粉中总杨梅黄酮含量的测定

精确称取杨梅黄酮微囊1.00g，用30mL的无水乙醇充分溶解囊壁，再加蒸馏水定容至100mL 容量瓶中，超声处理 30min 后吸取溶液1mL置于至 25mL 容量瓶中，按“2.3”项下方法进行处理，测定其吸光度再由标准曲线计算出浓度，从而得到干粉中总杨梅黄酮的含量。

2.5.3 计算包封率

包封率/%= (1-微囊表面杨梅黄酮含量/干粉中总杨梅黄酮含量)/100，具体实验结果见表2。

表2 正交试验结果Tab.2 Results of orthogonal design

方差分析结果表明，各因素影响微囊包封率的顺序是B>A>C，即进样速度>进风口温度>囊芯囊材质量比，得到最佳工艺条件为A2B3C3，即进风口温度140℃，进样速度7mL/min，囊芯囊材质量比2∶1。

表3 方差分析Tab.3 Results of variance analysis

2.6 验证试验

选定正交试验结果最优工艺参数进行3批样品的喷雾干燥验证试验。结果见表4。

表4 验证实验结果Tab.4 Results of verification test

由验证试验结果可知，用最佳工艺生产出的三批样品包封率较高，RSD符合要求，表明该工艺可行性好，重现性高。

2.7 杨梅黄酮微囊的表面显微形态

用扫描电子显微在放大20倍的条件下观察到杨梅黄酮微囊的表面结构，微囊分布均匀，成囊性较好。结果见图2。

图2 杨梅黄酮微囊电镜图(20×)Fig.2 Myricetin microcapsules figures of SEM(20 ×)

3 讨论

在喷雾干燥法制备杨梅黄酮微囊的工艺考察中，发现出风温度由进风温度和进料速度所决定，因此，未对出风温度进行考察。

在文献[10-11]及预实验的基础上确定了羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯囊材的最佳浓度为3%，而且选用 HPMCP 作为囊材对内部囊芯物的保护效果也比较理想。制备工艺中加入乳化剂十二烷基硫酸钠，能降低界面的表面张力，使囊材更轻松的包裹囊芯物，同时也能有效地减少微囊黏壁及静电吸附作用[12]。

本实验采用喷雾干燥法制备杨梅黄酮微囊，通过正交试验优选工艺，以微囊包封率为指标，并进行了验证试验，证实了工艺的可行性和稳定性，为日后杨梅黄酮类药物新剂型的开发以及当地杨梅产业结构升级有着深远的意义。