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分析Gal-3、BRAFV600E基因突变及hTERT检测在PTC诊疗中的应用价值

2019-11-18张京伟汪红英胡月玲

西南国防医药 2019年10期
关键词:突变率端粒酶包膜

余 晖,张京伟,汪红英,胡月玲,晏 茜

甲状腺癌发病因素目前尚未明确,但多与高碘饮食、放射性接触史、遗传等因素相关,甲状腺乳头状癌(PTC)为甲状腺癌最常见的类型[1]。随着蛋白组学及基因组学的发展,肿瘤标志物及基因突变对恶性肿瘤诊疗的影响受到广泛关注[2]。半乳糖凝集素3(Gal-3)参与细胞与细胞、细胞与间质之间黏附和炎症反应,并调控细胞生长、凋亡等多种生理病理过程,在甲状腺癌发生、发展中发挥一定作用[3]。端粒酶能使细胞获得无限增殖的能力,具有促进甲状腺癌等恶性肿瘤细胞增殖的作用,端粒酶反转录酶(hTERT)则为维持其活性最重要的成分[4]。鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)基因突变为近年来甲状腺肿瘤研究的重大突破,BRAF基因突变仅发生于PTC,在甲状腺其他病变中未见突变,且BRAFV600E为最常见基因突变位类型,对PTC的诊疗有重要作用[5]。基于此,本研究收集手术治疗的PTC患者手术病理标本和临床资料,以分析PTC癌组织Gal-3、hTERT阳性及BRAFV600E突变情况及对患者预后的影响。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集2014年3月~2015年10月在医院行手术治疗的86例PTC患者手术病理标本和临床资料。纳入标准:行择期甲状腺切除+颈清扫术治疗者;经病理检查确诊为PTC;临床资料齐全;术后随访时间≥3年者。排除标准:术前行放化疗等抗肿瘤治疗;合并其他恶性肿瘤者。86例中,女62例,男 24 例;年龄 32~60(46.22±9.10)岁;肿瘤最大直径≤2 cm 54例,>2 cm 32例;伴淋巴结转移18例。

1.2 检测指标 PTC癌组织及癌旁组织均经甲醛固定、石蜡包埋、切片、脱蜡、冲洗、染色、脱水后封片,使用免疫组化法测量Gal-3、hTERT表达水平;采用聚合酶链式反应(PCR)法和脱氧核糖核酸(DNA)测序法测量BRAFV600E突变情况。Gal-3一抗为鼠抗人Gal-3单克隆抗体,试剂盒由美国Zymed Laboratories公司生产;hTERT一抗为兔抗人hTERT多克隆抗体,试剂盒由美国SANTA CRUZ公司生产;BRAFV600E突变检测试剂盒由北京鑫诺美迪基因公司生产,采用DNA测序仪(美国Applied Biosystems公司,型号:D 3130)和荧光定量PCR仪(美国 Applied Biosystems公司,型号:P 9700)。

结果判断标准[6]:Gal-3、hTERT以已知阳性切片作为阳性对照,磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。在高倍镜下,随机选取5个视野,若阳性细胞平均百分比<5%为阴性,≥5%为阳性;BRAFV600E突变通过将PCR测序结果与基因库中正常DNA序列比较,判断有无突变。

1.3 研究方法 比较PTC癌组织及癌旁组织Gal-3、hTERT阳性率及BRAFV600E突变情况,分析癌组织Gal-3、hTERT阳性及BRAFV600E突变与PTC患者临床病理特征的关系,统计癌组织Gal-3、hTERT表达及BRAFV600E突变阳性者及阴性者术后3年生存情况。

1.4 统计学方法 应用SPSS 21.0统计软件分析,计数资料以例和百分率表示,采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织及癌旁组织 Gal-3、hTERT阳性及BRAFV600E突变率比较 癌组织Gal-3、hTERT阳性率及BRAFV600E突变率皆高于癌旁组织(P<0.05,表 1)。

表1 癌组织及癌旁组织Gal -3、hTERT阳性及BRAFV6OOE突变比较[n(%)]

2.2 Gal-3、hTERT阳性及BRAFV600E突变与临床病理特征的关系 癌组织Gal-3阳性率在不同临床病理特征患者间比较无显著差异(P>0.05);癌组织hTERT阳性率及BRAFV600E突变率在不同性别、年龄、肿瘤直径患者间比较无显著差异(P>0.05),但伴侵犯包膜、高肿瘤分期、伴淋巴结转移者癌组织hTERT阳性率及BRAFV600E突变率较高(P<0.05)。见表2。

表2 GaI-3、hTERT阳性及BRAFV6OOE突变与临床病理特征的关系[n(%)]

2.3 Gal-3、hTERT表达及BRAFV600E突变阳性者与阴性者生存情况 术后3年时,83例Gal-3阳性表达者生存76例(91.57%),3例Gal-3阴性表达者全部生存,生存率为100.00%;56例hTERT阳性表达者生存51例(91.07%),30例hTERT阴性表达者生存28例(93.33%);52例BRAFV600E突变者生存46例(88.46%),BRAFV600E未突变者生存 33 例(97.06%)。各Gal-3、hTERT表达及BRAFV600E突变阳性者与阴性者组间生存率比较均无显著差异(P>0.05)。

3 讨论

Gal-3为一种β-半乳糖苷结合的动物凝集素,与β-半乳糖亲和力较好,可通过与特殊配体反应而发挥生物学效应。Gal-3在多种上皮细胞及免疫细胞中高表达,并参与信使核糖核酸(mRNA)剪切过程,具有促进细胞增殖、抑制细胞凋亡作用[7]。据文献报道,具有无限分裂增殖能力的细胞均能不断延伸其染色体端粒,这一能力由端粒酶介导,端粒酶能在端粒结合蛋白的辅助下,利用hTERT亚基的转录酶活性,催化延伸端粒,而维持长度[8]。故hTERT活化引起端粒酶激活是肿瘤发生、发展的重要环节。BRAFV600E突变与PTC起始形成及发展预后密切相关,可激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路,并通过三级激酶级联反应方式传递至细胞核中,达到促进调节细胞增殖、生长的作用[9]。由此可见,上述3种蛋白表达、基因突变情况与PTC的发生、发展均有一定联系。为此,本研究就PTC癌组织Gal-3、hTERT阳性及BRAFV600E突变情况展开分析,并探讨其对预后的评估价值,为PTC的诊疗提供新思路。

本研究结果显示,癌组织Gal-3、hTERT阳性率及BRAFV600E突变率皆比癌旁组织高,提示Gal-3、hTERT阳性及BRAFV600E突变对PTC的发生发展有重要作用。而癌组织Gal-3阳性率在不同临床病理特征患者中对比无显著差异,考虑该结果与PTC患者癌组织Gal-3阳性率较高,而本研究纳入样本量较少,使该项检验效能较低有关。但伴侵犯包膜、高肿瘤分期、伴淋巴结转移者癌组织hTERT阳性率高,究其原因可能与hTERT的活化使端粒酶激活,并促进PTC肿瘤细胞增殖,促进肿瘤发展进程,而提高肿瘤细胞侵袭能力,增加肿瘤转移及侵犯包膜风险。伴侵犯包膜、高肿瘤分期、伴淋巴结转移者癌组织BRAFV600E突变率高,分析其原因可能与BRAFV600E突变导致MAPK通路激活,使通路中各因子激活至细胞核,并结合相应受体,介导基因的表达、编码,进而参与细胞生长、发育、分化等生物学效应,达到调控肿瘤细胞增殖、侵袭性等作用有关。上述结果也提示,hTERT阳性、BRAFV600E突变可能通过调控PTC肿瘤细胞的侵犯包膜、肿瘤分期、淋巴结转移情况,影响患者预后。

此外,本研究还发现,Gal-3、hTERT表达及BRAFV600E突变阳性者术后3年生存率略低于阴性者,但差异无统计学意义。推测该结果由两个方面原因所致:一方面,本研究纳入样本量较少;另一方面,本研究随访时间较短,hTERT表达及BRAFV600E突变阳性与PTC侵犯包膜、肿瘤分期、淋巴结转移情况关系密切,可能影响患者远期预后。因此,Gal-3、hTERT表达及BRAFV600E突变阳性对PTC患者的预后影响还需进一步探讨。

综上所述,检测Gal-3、hTERT阳性及BRAFV600E突变情况对PTC诊疗皆有利,hTERT阳性及BRAFV600E突变与PTC侵犯包膜、肿瘤分期、淋巴结转移情况相关,但对仍需扩大随访时间,以进一步观察其对预后的影响。

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