血清AFP、GP73和AFP-L3联合检测在慢性乙型肝炎诊断中的价值

2019-11-14王利公纪瑞静

国际检验医学杂志 2019年21期

王利公，赵珊，陶慧，纪瑞静

(1.西安交通大学医学院第一附属医院检验科，陕西西安 710061；2.西安交通大学校医院检验科，陕西西安 710061；3.西安交通大学第一附属医院彬州市中医院检验科，陕西彬州 713500)

慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染所致的慢性疾病，该病具有长期性、反复性的特点[1]。WHO一项调查表明，全球感染HBV病毒高达20亿人，其中慢性HBV感染达2.3亿人，是全球范围内发病率最高的传染性疾病之一[2]。中国是HBV感染高发地区，据统计中国有超过9 000万以上慢性HBV感染者，约占人口总数7.5%～10.0%，其中慢性乙型肝炎高达2 000万人[3]。慢性乙型肝炎治疗至今未能达到彻底或功能性治愈，而病情迁延不愈是导致肝硬化和肝细胞癌的重要原因。流行病学调查统计发现，未经治疗的慢性乙型肝炎患者进展为肝硬化的概率为7%～21%，从肝硬化进展为肝细胞癌的概率达2%～4%[4]。因此，早期诊断慢性乙型肝炎感染显得尤为重要。肝脏组织病理学活检是诊断慢性乙型肝炎的金标准，但组织蛋白检测需要获取病理样本，操作具有创伤性且患者不易配合，限制了临床应用。相对而言，血清指标具有方便、客观、准确、经济等优点，在疾病筛查、病情监测等方面具有显著优势。肝功能指标检测对于肝脏疾病进展具有一定鉴别意义，甲胎蛋白(AFP)被认为是有效判断慢性乙型肝炎的病情严重程度的血清学指标。高尔基体跨膜糖蛋白73(GP73)和甲胎蛋白异质体(AFP-L3)有望成为最具潜力诊断和预后评估的新的标志物。本研究检测了血清AFP、GP73、AFP-L3水平，并进一步分析了AFP、GP73、AFP-L3联合检测对慢性乙型肝炎的诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料本研究经西安交通大学医学院第一附属医院伦理委员会批准，在2016年3月至2019年2月西安交通大学医学院第一附属医院各类肝病患者182例中选取经病理组织学或影像学证实为慢性乙型肝炎的患者100例作为慢性乙肝组。纳入标准：(1)入选患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2015版)[5]中相关诊断标准；(2)血清乙型肝炎E抗原(HBeAg)呈阳性持续时间≥6个月；(3)近1年内无抗肝纤维化、抗HBV药物治疗；(4)年龄≥18岁；(5)入选患者同意本次研究，并签署知情同意书。排除标准：(1)伴有甲型、丙型等病毒性重叠感染；(2)伴有糖尿病、甲亢等代谢类疾病；(3)严重神经系统、心血管、免疫系统等疾病；(4)合并其他恶性肿瘤。另选取同期在医院体检中心健康体检者110例作为对照组，经检测心、肝、肾、肺重要脏器功能无异常，各类肝炎病毒标志物呈阴性；排除全身或局部感染、心血管疾病、恶性肿瘤及血液系统疾病等。

1.2方法

1.2.1临床资料收集收集2组纳入研究者的临床资料，包括性别、年龄、体质量指数、吸烟、饮酒史等。

1.2.2血清学指标慢性乙肝组患者入院后禁食水12 h，采集肘静脉血5 mL，对照组入组后禁食、禁水10 h以上，采集空腹肘静脉血5 mL；采集血液标本，采用台式离心机(购自中国湘仪离心机仪器有限公司，型号L400)以3 000 r/min高速离心10 min；静析后取上层血清，标本剂量1.5 mL，分装于小型离心管中，标记组别、时间，置于-80 ℃冰箱内保存，统一检测。AFP采用化学发光微粒子免疫法，电化学发光仪和试剂盒购自中国上海罗氏诊断产品有限公司；GP73采用酶联免疫吸附试验法检测，酶标仪购自瑞士Tecon公司，型号M200，检测波长设定为450 nm，试剂盒购自中国上海茁彩生物科技有限公司；AFP-L3采用亲和吸附离心管法检测，生化仪购自美国雅培公司，型号C8000，试剂盒购自中国北京热景生物技术有限公司。分离洗脱液AFP-L3，并计算AFP-L3占AFP比例。所有操作均严格按照试剂盒说明书执行。

1.2.3阳性判定标准[6]参考值：AFP>9.6 ng/mL，GP73>106.5 ng/mL；AFP-L3>9.2%。

2 结果

2.12组间临床资料和血清指标的比较 2组间性别、年龄、体质量指数、吸烟、饮酒史等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)；慢性乙肝组血清AFP、GP73和AFP-L3水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2慢性乙型肝炎综合征危险因素分析 Logistic多因素回归分析显示，AFP、GP73和AFP-L3是慢性乙型肝炎的独立危险因素(均P<0.05)。见表2。

表1 2组间一般资料和血清指标的比较

表2 Logistic回归分析慢性乙型肝炎的危险因素

2.3血清AFP、GP73、AFP-L3联合检测对慢性乙型肝炎的诊断效能 ROC曲线分析显示，AFP诊断慢性乙型肝炎的AUC为0.863，GP73为0.832，AFP-L3为0.730，AFP、GP73、AFP-L3联合检测的AUC为0.953，明显高于AFP、GP73、AFP-L3单独检测(Z=2.843、3.145、7.099，P<0.05)。见表3、图1、2。

图1 血清AFP、GP73、AFP-L3单独检测用于慢性乙型肝炎诊断的ROC曲线

表3 血清AFP、GP73、AFP-L3联合检测对慢性乙型肝炎的诊断效能

图2 血清AFP、GP73、AFP-L3联合检测用于慢性乙型肝炎诊断的ROC曲线

3 讨论

慢性乙型肝炎是由HBV进入机体内通过血液循环快速传播至肝细胞及其他组织，引起全身炎性反应的一种慢性疾病。中国以医源性和母婴传播为主，而婴幼儿时期的HBV感染大多导致慢性乙型肝炎并一直伴随终生[7]。乙型肝炎是我国目前慢性肝病的主要病种之一，该病发病机制十分复杂，至今尚未完全阐明。研究发现乙型肝炎病毒表面抗原可激活机体免疫应答，引发适应性和固有免疫应答，机体免疫在消除乙型肝炎病毒过程中，会导致肝脏慢性损伤并诱发机体炎性反应；进一步合成糖蛋白、胶原、蛋白多糖等细胞外基质成分，加重肝脏纤维化，造成肝硬化，使病情进一步恶化而进展为肝癌[8]。慢性乙型肝炎在发病初期临床症状不典型，病情发展较为隐匿，往往出现腹水、消化道出血时才被发现，贻误最佳治疗时机。因此，对慢性乙型肝炎的早期诊断，及时采取治疗措施，可提高患者生存质量。

AFP是在胚胎期合成的功能性蛋白，由卵黄囊和肝细胞产生，其相对分子质量为70×103，半衰期5 d，主要来源于胚胎的肝细胞。正常成年人AFP水平较低，将近70%肝癌患者AFP水平出现异常增高。当肝细胞进行有丝分裂产生新的肝细胞时，AFP水平会再次增高，因此临床上常作为原发性肝癌血清标志物，用于原发性肝癌的早期诊断，指导治疗和预后判断。研究发现，发生活动性肝炎后肝细胞会进行修复，AFP会出现不同程度升高，肝细胞再生活性明显增强，表明慢性乙型肝炎患者AFP持续升高的原因与乙肝病毒复制存在某种内在联系[9-10]。有学者亦证实大量的肝炎患者AFP呈高水平表达，这与本研究结果一致[11]。有报道称，在非肝癌性肝病如急慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化的患者血清中AFP水平增高[12]。研究表明不同病毒性肝炎患者AFP阳性表达率从急性轻度、慢性中度、慢性重度依次升高，随着炎性反应增强，AFP水平亦随之升高，表明血清AFP水平可反映炎性反应程度[13]。本研究发现，AFP诊断慢性乙肝的AUC为0.863，提示AFP不仅对肿瘤疾病诊断具有重要的临床价值，对肝脏发生炎性反应病变亦有重要的临床参考价值，早期检测AFP水平可预测患者疾病进展情况。

AFP-L3是AFP糖链结构的异质体，与肝癌细胞增生呈正相关，被广泛用作肝癌诊断的标志物之一。卓传尚等[14]研究发现慢性乙型肝炎、肝硬化患者血清AFP-L3水平显著升高，表明AFP-L3能够为早期诊断提供参考，对预防病情进展及癌变具有一定临床意义。刘彦明等[15]研究亦证实慢性乙型肝炎患者肝组织存在HBV-DNA的大量复制，随着HBV-DNA载量不断增加，AFP-L3水平明显升高，导致内质网、高尔基体等重要肝脏细胞器的损伤。本研究还发现，慢性乙型肝炎患者AFP-L3水平明显高于健康人群，提示AFP-L3可作为监测慢性乙型肝炎肝细胞损伤的指标。研究证实，随着Chid-Pugh分级增加，血清AFP-L3呈上升趋势，进一步说明AFP-L3可作为评估肝功能的重要指标[16]。本研究发现，在诊断慢性乙型肝炎中AFP-L3的AUC为0.730，提示可作为诊断慢性乙型肝炎的指标之一，但参考价值有限。

GP73为高尔基Ⅱ型跨膜蛋白，广泛存在于高尔基体中，一般在肝脏组织中少量表达或不表达。国外学者研究发现，病毒或非病毒引起的肝病患者血清GP73水平出现明显升高[17]。乐萍等[18]同样发现病毒性或自身免疫性肝炎和进行性肝硬化患者血清GP73呈高水平，推测GP73在慢性肝病疾病进展中发挥重要作用。本研究结果亦证实，慢性乙型肝炎患者血清GP73呈高水平表达，这与HBV感染程度有关，提示GP73可作为诊断慢性乙型肝炎的血清标志物之一。本研究进一步分析了三项指标联合检测的价值，结果显示AUC为0.953，灵敏度和特异度为89.0%和81.8%，明显高于AFP、GP73、AFP-L3单独检测，提示三者联合可以提高慢性乙型肝炎的诊断效能。血清AFP、GP73、AFP-L3联合检测可以反映HBV-DNA复制、肝细胞损伤等病情进展。三项指标联合检测灵敏度和特异度均大于单项指标检测，能够满足慢性乙型肝炎在HBV-DNA复制、肝细胞损伤等病情进展的早期诊断。