苏州西部地区女性人乳头瘤病毒感染情况调查分析*

温江涛，王芙蓉，朱红楠，严茹红

(南京医科大学附属苏州科技城医院检验科，江苏苏州 215153)

宫颈癌是一种常见女性恶性肿瘤。2018年世界卫生组织国际癌症研究机构数据显示，全球宫颈癌每年新发病例约57.0万，死亡病例31.1万，其中90%病例发生在发展中国家[1]。人乳头瘤病毒(HPV)是乳头病毒科病毒，包括200多个亚型，其主要侵犯皮肤及黏膜上皮。根据致癌性的高低，HPV分为高危型、中危型和低危型[2-3]。高危型HPV感染易诱发多种恶性肿瘤，如宫颈癌、膀胱癌肉瘤、喉癌等[4]。低危型HPV感染常常引起湿疣等病变[5]。本研究主要分析江苏省苏州西部地区女性HPV感染与基因型分布情况，从而为该地区HPV感染的防治提供理论依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2 195例于2017年11月至2018年5月在本院妇科门诊自愿做HPV筛查的女性患者宫颈脱落细胞样本。所有患者均符合：(1)长期居住于苏州西部地区(>5年)；(2)至少有1年性生活史；(3)非妊娠期、无盆腔放疗和化疗史；(4)检查前48 h内无性生活史及用药史等。

1.2仪器与试剂 全自动核酸提取仪与荧光定量PCR仪分别购自中国江苏硕世生物技术有限公司和中国上海宏石有限公司；HPV病毒核酸提取及分型检测试剂盒购自中国江苏硕世生物技术有限公司。

1.3标本采集与保存 用宫颈刷置于宫颈口处沿顺时针旋转3～5圈采集宫颈口及宫颈管足够的移行区上皮细胞，并迅速将宫颈刷头部放入细胞保存液中，旋紧管盖，若不能立即检验的样品置于4 ℃冰箱保存，严格按照操作说明进行，应避免反复冻融。

1.4检测方法 样本DNA提取和加样：按照全自动核酸提取仪提取HPV-DNA。剩余DNA样品置于-20 ℃冰箱保存。将反应液和A-H引物溶液依次加入PCR八联管，再将2 μL待测样本核酸溶液、阴性和阳性对照分别加入对应的PCR八联管。PCR扩增与变性：将PCR八联管放入荧光PCR扩增仪内进行扩增检测。检测结果：根据HPV亚型探针荧光标识表进行结果判断，HPV亚型扩增曲线结果显示典型S型曲线且CT值<参考值，表明HPV亚型为阳性；HPV亚型扩增曲线结果不显示S型扩增曲线或CT值>参考值，表明HPV亚型为阴性。通过检测宫颈脱落细胞内单拷贝基因，测算样本中的细胞数量，获得HPV定量的基准，再报告同等细胞数量(10 000个细胞)内的HPV病毒拷贝数，实现同步对21种HPV基因亚型进行基因分型及标准化定量。

本检测将21种HPV亚型分为13种高危型(HPV16、52、58、18、31、33、35、39、45、51、56、59和68亚型)，5种中危型(26、53、66、73和82亚型)及3种低危型(HPV6、11和81亚型)，有≥2种HPV亚型合并感染者为多重感染，对多重感染者，各HPV亚型阳性率重复计算。

1.5统计学处理 采用SPSS16.0软件进行统计学分析，计数资料用n(%)表示，不同年龄组间检出率差异采用用χ2检验，SPSS分析不同年龄段阳性检出率差异有无统计学意义，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HPV感染状况和基因型分布 2 195名女性中有420名感染HPV，总感染率为19.13%(420/2 195)。高危型HPV感染率14.90%(327/2 195)，其中高危型单一感染率为11.07%(243/2 195)，84例发生高危型多重感染，占高危型感染的25.69%(84/327)。低危型HPV感染率仅为3.51%(77/2 195)，其中低危型合并高危型感染率为1.46%(32/2 195)。感染率最高的HPV亚型为HPV52(3.83%)，排名第2的是HPV16(2.28%)和HPV58(2.28%)，第3是HPV39(1.64%)。

2.2各年龄段HPV感染阳性率比较 2 195名研究对象分成3个年龄段：<30岁556例(占25.33%)、30～54岁1 549例(占70.57%)、>54岁90例(占4.10%)。2 195例受试患者中，>54岁组HPV高危型的感染率为23.33%，30～54岁组为15.11%，<30岁组为12.95%。各年龄组间高危型感染阳性检出率及HPV总阳性检出率差异均有统计学意义(P<0.05)，而高危型单一感染率和高危型多重感染率差异却无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 江苏省苏州西部地区妇女不同年龄段HPV感染检出情况[n(%)]

2.3HPV亚型感染的病毒载量分布 420例HPV感染患者中，将HPV多重感染者在各HPV亚型感染中分别计数，故所得总例数是540例。HPV52，HPV16、HPV58和HPV39型感染者以中、低病毒载量为主，而HPV51型感染者以低病毒载量为主。见表2。

表2 HPV亚型感染的病毒载量分布(n)

续表2 HPV亚型感染的病毒载量分布(n)

注：a表示计量单位为拷贝数/104个细胞；低危型没有列出；-表示此项无数据

3 讨 论

本研究采用多重荧光PCR技术，高通量、自动化分管及闭管检测21种HPV基因亚型，该项目是全球首个、也是目前唯一可以同步HPV分型及标准化定量的检测技术。检测HPV DNA靶标，分管区分18种高中危及3种低危型总计21种HPV基因型别，并同步报告各基因亚型的病毒拷贝数；另外，通过检测宫颈脱落细胞内独特的单拷贝基因，还可以报告样本中的采集的细胞数量，最终报告“单位数量细胞中不同HPV型别及其携带病毒载量”，从而实现同步HPV分型及标准化定量。中国医科大学附属第一医院研究数据表明硕世HPV与测序法阳性一致性为100.0%，而传统分型方法仅为59.1%[6]。

女性宮颈HPV感染与当地经济、卫生水平有关，不同地区HPV感染率差异较大。本研究结果显示，2 195名苏州西部地区妇女的HPV感染率为19.13%，其中高危型HPV感染率为14.90%，与甘肃地区一致[7]，低于重庆地区[8]和石家庄地区[9]。HPV总感染率高于北京地区15.57%[10]和天津地区15.93%[11]。不同地区HPV感染的型别也存在较大差异，本研究发现苏州西部地区妇女易感HPV型别为HPV52、HPV16、HPV58和HPV39。甘肃地区常见HPV感染基因亚型为HPV16，HPV58，HPV52，HPV18和HPV53型[7]。石家庄地区常见HPV感染基因亚型为HPV16，HPV58，HPV52，HPV6和HPV18型[9]。而天津地区HPV感染率比较高的亚型分别为HPV52，HPV16，HPV58，HPV56和HPV81型[11]。这些差异可能与风俗习惯、文化程度及生活方式等有关。

从各HPV亚型感染患者中不同级别病毒负荷量的分布来看，在HPV52，HPV16、HPV58和HPV39型感染者以中、低病毒载量为主，而HPV51型感染者以低病毒载量为主。高病毒载量与宫颈病变相关，因此苏州西部地区女性HPV感染可以定期检测和治疗来预防早期宫颈病变。

女性的年龄是影响HPV感染的重要因素之一。本研究结果显示，>54岁妇女高危型HPV的感染率为23.33%，30～54岁组为15.11%，<30岁组为12.95%。而石家庄地区与此相反，HPV感染的年龄主要集中在40岁以下，甚至25岁以下HPV感染率为最高[9]。而天津地区HPV感染的年龄主要集中在35～45岁[11]。

本研究主要围绕苏州西部地区女性感染HPV特点及其基因型分布展开，有望为研发适应于本地区的HPV多价疫苗提供了重要的理论基础。