一例贩运仔猪疾病的诊断防治

郭青春 谭勇

（1，湖南省怀化职业技术学院 418000；2，湖南省株洲市茶陵县畜牧兽医水产局 412400）

近年来我们国家产业结构不断调整，很多人选择返乡创业，养殖业成为首选。随着养殖队伍及规模的扩大，基于各类牲畜频繁贩运，动物疾病也不再由单一病原所致，往往多以病原多重感染或混合感染为主要流行形式，发病快、防控难度大，再加上新进的创业者缺乏专业技术，给养殖业造成巨大的经济损失[1]。株洲市茶陵县某私人养猪场新购一批猪仔出现死亡，前来求助，后经诊断为巴氏杆菌病与猪瘟并发，经紧急防治将损失降到最低[1]。现结合笔者临床实践谈谈对该病诊治。

1 发病情况

湖南省某私人猪场老板于2018 年3 月底从外来猪贩手中购得15kg 左右的猪仔70 头。新猪购入第二天就发现有几头猪仔发病，食欲减退或不食，场主认为是应激引起的感冒发烧，给猪仔注射了青霉素等药物进行简单治疗，不见好转，同时这种疾病传染很快，没几天整栏仔猪发病，仔猪进栏第3 天后开始出现死亡，见组图1。笔者应邀对仔猪进行临床与病理剖检诊断，然后取病料进行实验室检测，诊断为巴氏杆菌病并发猪瘟，后采取综合防治措施，收到一定疗效。

2 临床症状

仔猪病初体温升高至40.1～41.4℃，精神委顿，拱背，仔猪扎堆，畏寒，食欲减少或废绝，然后出现拉稀，粪便呈灰色；病猪的鼻端流脓性鼻涕，呼吸明显，部分仔猪耳朵耳尖发绀，眼神暗淡无光，眼结膜呈苍白色；病猪死前出现神经症状，四肢呈划水样，大部分仔猪死后头部角弓反张，身体发红，发病快，死亡率很高。

3 病理变化

病死仔猪剖检可见鼻腔、气管分泌黏液；鼻喉、气管和支气管黏膜充血；肺脏灰白，有出血斑；心脏有出血斑；肝脏上可见散在分布的黄色斑块、肝脏边缘肿大、表面有出点血；肠系膜充血、出血；肠外膜充血，肠内充气，肠黏膜可见卡它性溃疡，参见图1。

4 实验室诊断

4.1 细菌检查

4.1.1 病料采集

无菌采集病死仔猪肺脏、肝脏、脾脏、淋巴结及小肠内容物，置于冰箱4℃待检。

4.1.2 涂片染色镜检

取无菌采集的病死仔猪组织涂片进行美兰染色，显微镜镜检，镜检结果为革兰氏阴性菌，菌体里两极浓染、中间着色浅的短杆菌。

4.1.3 细菌分离培养

无菌操作将病死仔猪的肺组织、淋巴结和肠黏膜上的病料接种于麦康凯琼脂培养基和血液琼脂培养基（自行配制），在37℃恒温箱中培养24h 后在麦康凯琼脂培养基上，基本上没有看到成型的菌落生长；在血液琼脂培养基上出现微隆圆形、表面湿润、边缘整齐的浅灰白色菌落，该菌落不溶于血。

组图1 病死仔猪与病理剖检图

结合仔猪发病时临床症状、实验室细菌学诊断，初步断定病原微生物为巴氏杆菌。

4.2 病毒检测

4.2.1 生化试剂

从康百得生物科技有限公司直接订购猪瘟病毒RT-PCR 检测试剂盒。依据试剂盒说明将盒内塑料袋试剂（阳性对照、RT-PCR 反应液A 和B）-20℃冻存，裂解液2～8℃冷藏，其他室温保存。

4.2.2 操作方法

（1）样品制备

将采集好的病变淋巴结等组织称取0.1g 于研磨器中磨碎，再加1ml 生理盐水继续磨至无块状物；然后将样品转至1.5ml灭菌离心管中，8000rpm 离心2min，取100μl 上清液于1.5ml灭菌离心管中。

（2）病毒RNA 的提取

①将处理的样品、阳性对照组和阴性对照组，分别加入450μl 裂解液，充分颠倒混匀，室温静置3min。

②加入275μl 无水乙醇，轻轻混匀。

③将混合液吸入吸附柱中，10000rpm 离心1min，弃去收集管中液体，套回收集管。

④向吸附柱中加入500μl 洗涤液A，10000rpm 离心1min，弃去收集管中液体，套回收集管。

⑤向吸附柱中加入500μl 洗涤液B，10000rpm 离心1min，弃去收集管中液体，套回收集管。

⑥空柱10000rpm 离心2min。

⑦将吸附柱移入新的无RNA 酶的1.5ml 离心管中，在膜中央加入30μl 洗脱液，室温静置2min，10000rpm 离心1min，获得总RNA。

（3）用已知猪瘟引物进行RT-PCR

①分别取14μl RT-PCR 反应液A （用前混匀）、4μl RTPCR 反应液B （用前混匀）和2μl 模板RNA，混匀。

②在PCR 仪上运行以下程序：42℃45min，94℃3min，94℃30s，55℃30s，72℃30s，35 个循环；72℃延伸10min。

（4）电泳

取5μl PCR 扩增产物点样于1%琼脂糖凝胶孔中，以5V/cm 的电压于50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液中电泳。将电泳好的琼脂糖凝胶放入30ml 的50 倍稀释TAE 液（内加10μl 染色液）中浸泡混匀，30min 后于紫外灯下观察结果。

结果显示（见图2）：1 号阳性对照出现380bp 扩增带；2号阴性对照无带出现；3 号被检样品出现380bp 扩增带，可确诊为病死仔猪带有猪瘟病毒。

5 综合防治

5.1 预防

仔猪混合感染发病强，治愈率低，很多时候来不及治疗就已经死亡，因此应以预防为主。

图2 凝胶电泳图

从外地贩运仔猪前必须了解当地猪群疫病流行情况。第一，坚持做好引种检疫，防止外疫传入；第二，尽量避免到一些高风险的省市引种；第三，作为养殖户在购入仔猪时不能一味贪图便宜。

仔猪运输途中要尽量减少应激，一是要选择好的季节与天气，避开寒冷、高温天气；二是要将运输车辆提前用复合酚类、碘制剂等消毒剂；三是运输装载车要合理装运，避免过分拥挤；四是贩运前1～2d，给猪群饲喂抗应激类等营养药，如电解多维、黄芪多糖、芪贞增免颗粒、VC等。

新购入仔猪需隔离饲养1 个月，在确认没有其他疫病的情况下方可与原有猪群同场饲养；制定合理的免疫接种计划，接种好疫苗等。

5.2 治疗

原则上早隔离、早治疗、紧急免疫接种、抗菌抗病毒、中西医结合治疗等。

对发病仔猪立即采取紧急隔离措施。对病猪粪便、分泌物等集中消毒处理，对发病后猪栏用2%烧碱喷洒消毒，过道洒上生石灰，同时全场用双链季铵盐消毒液，作到不留死角，带猪体消毒。病死猪要深埋或焚烧，作无害化处理。隔离病猪、猪舍、用具每天可用过氧乙酸、复方戊二醛溶液进行喷雾消毒。

对未发病仔猪进行紧急疫苗接种，选用ST 猪瘟活疫苗（传代细胞源），每头仔猪肌注1 头份。发病仔猪肌注20%氟苯尼考，一般发病猪发病后不食，只愿饮水，可通过饮水中添加电解多维，另有腹泻的水中还可加复合维生素B 和口服补液盐，连用3d。也可直接购买中药复方剂芪贞增免颗粒、金板蓝颗粒，添加到全体猪群的饮水中。

可用中药进行治疗，其方剂石膏40g，知母20g，连翘15g，玄参、金银花、黄芩、栀子、大黄、甘草各10g，煎水去渣，每日灌服2 次，连用3d。通过上述综合防治措施3d 后有明显效果，仔猪死亡率大大降低。

6 结语

猪瘟是猪传染病中易感的病毒病，感染猪瘟后易引起免疫抑制，导致机体免疫力下降，容易引起其他病原的混合感染。猪巴氏杆菌病又称为猪肺疫，属于常见的猪细菌性传染病，也是一种条件性致病菌，此病流行与猪的抵抗力有密切关系，不良因素的刺激易引起该病的发生和传染[2]。巴氏杆菌病一般不易查出传染源，这与动物在发病前带菌有关[3]。

近年来，仔猪价呈上升趋势，部分养殖户急于求成、贪图便宜，从猪贩子手中购买没有经过检疫的仔猪，另外调运时选择的冬春时节，天气恶劣气温骤变，加上长途运输等应激条件下仔猪抵抗力降低，最后导致致病性巴氏杆菌与猪瘟混合感染。至于后两者是猪瘟继发巴氏杆菌感染还是巴氏杆菌继发猪瘟感染的问题有待进一步研究探讨[4-5]。

近几年大量返乡创业者在选择创业项目时一定要审时度势，不可盲从。当前国家为解决“三农”问题每年都有很多强农惠农政策出台，并在各县市免费举办多类种植、养殖等培训。想要从事这类创业的年轻人可以到县级扶贫办等政府机构咨询。返乡创业者通过培训后认识相关专家和志同道合者，为今后创业积累丰富的人脉资源，成功的概率也将大大提升。