硫酸头孢喹肟佐剂在禽流感免疫效果试验

熊波 谢先林 高青松 陈凤兰 吕庆华 陈金芝

（1，湖北省荆门市动物疫病预防控制中心 448000；2，湖北省荆门市畜牧兽医发展中心 448000）

禽流感是禽流行性感冒的简称，分为高致性、低致病性和非致病性3 大类，其中高致病性禽流感是由H5和H7亚毒株（以H5N1、H5N6和H7N9为代表）引起的。高致病性禽流感因其在禽类中传播快、危害大、病死率高，被世界动物卫生组织列为A 类动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。家禽高致病性禽流感采用疫苗接种是最好的预防办法，疫苗主要分为弱毒活疫苗、灭活油乳剂疫苗、基因工程疫苗3 类。从实际效果、安全性能和经济实用性等方面综合考虑，主要以灭活油乳剂疫苗为主，然而此类疫苗的免疫注射家禽应激反应大，特别是对蛋鸡的产蛋率影响比较大。本课题探索在实践中改变传统的疫苗免疫注射方法，在疫苗中添加硫酸头孢喹肟佐剂，减少注射应激反应，提升疫苗免疫效果展开试验和研究。

1 试验情况

长期以来，禽流感主要以H5N1免疫为主，随着H7N9禽流感防控形势日益严峻，禽流感疫苗在2017 年由原来的H5亚型三价灭活疫苗（Re-6-7-8 株）变为H5+H7的双联苗。本课题于2018 年4 月至12 月，开展了疫苗中添加硫酸头孢喹肟佐剂在禽流感免疫效果的研究。

1.1 试验蛋鸡场情况

蛋鸡场位于沙洋县拾桥镇东风村8 组，远离人群密集区，自然防疫条件好，地理位置优越。该场为荆门市神羽禽业有限公司合作社的一个代养场，该养殖场为新场，没有发生过重大动物疫病，饲养能力为11000 只蛋鸡，符合实验室所需样品数量要求。

附表 抗体检测结果

1.2 试验疫苗和兽药

禽流感二价灭活疫苗（H5+H7），吉林冠界生物技术有限公司生产，生产批号：201802012；硫酸头孢喹肟注射液由四川恒通动物制药有限公司生产，规格10ml：0.25g；包装：10ml×2 瓶；生产批号：20171203。

1.3 试验方法

1.3.1 试验动物

本试验选择生产周期长的蛋鸡作为研究对象，首次选择1200 只16 日龄的蛋鸡进行免疫试验，用同批次的1200 只蛋鸡作为对照组。75 日龄进行第二次免疫试验，在开产前105 日龄进行第三次免疫试验。

1.3.2 免疫方法

将10ml 0.25g 规格的硫酸头孢喹肟注射液作为佐剂，按10ml 添加到每瓶500 头份H5+H7禽流感疫苗中，充分混匀后对试验的1200 只蛋鸡进行免疫注射，注射部位为颈部皮下，每只注射0.3ml。对比组的蛋鸡也同样进行免疫注射，但疫苗中不添加硫酸头孢喹肟佐剂。第二次、第三次免疫试验方法同第一次免疫试验，只是注射剂量都变为0.5ml。（疫苗操作说明规定2 周龄每只注射0.3ml，5 周龄以上鸡每只0.5ml。）

免疫后，观察试验动物有无副反应，采食量变化、发病和死淘、对产蛋的影响等情况，做好相关记录。

2 高致病性禽流感（H5+H7）灭活苗疫苗抗体检测情况

2.1 采血

一次性采血器前腔静脉采血，每份不少于2ml。采血后，将采血器活塞外拉预留血清析出空间，并塞上护针帽，去除推杆，在采血器上标明样品编号。在实验室中，静置2h 后离心机3500G 离心6min，分离血清。

采血试验蛋鸡数量和对照组蛋鸡数量各定为160 只。分别于37 日龄（一免后21d）、96 日龄（二免后21d）、126 日龄（三免后21d），各采血1 次，分离血清做禽流感免疫抗体检测试验。

2.2 抗体检测方法

按照国标 《高致病性禽流感诊断技术》 （GB/T18936-2003）中血凝和血凝抑制试验（HA-HI）进行，具体操作步骤参照试剂盒说明书。

2.3 抗体检测结果

见附表。

3 免疫抗体效果分析

本试验均在免疫注射后21d 进行抗体监测。第一次免疫试验组抗体合格率为0.78，对照组抗体合格率为0.73；第二次免疫试验组抗体合格率为0.96，对照组抗体合格率为0.95；第三次免疫试验组抗体合格率为0.98，对照组抗体合格率为0.96，3 次免疫试验中试验组和对照组抗体平均合格率差异不显著（＞0.05）。

4 试验期间副反应发病死亡情况

本试验第一次试验组1200 只蛋鸡免疫后没有应激死亡，对照组无死亡；第二次试验组1200 只蛋鸡免疫后没有应激死亡，对照组死亡4 只；第三次试验组1200 只蛋鸡免疫后应激死亡2 只，对照组死亡8 只。3 次试验中试验组共死亡2 只，对照组死亡12 只。通过对比观察，3 次免疫注射后，试验组和对照组均出现采食量下降，但试验组3d 恢复到平时采食量，而对照组7d 恢复正常采食。添加抗生素的试验组达到90%的产蛋高峰比对照组提前了15d。

5 结论

（1）提高蛋鸡机体抗应激能力。通过试验对比，疫苗中添加抗生素的蛋鸡机体抗应激能力增强，死亡率下降0.83%，采食量恢复较快，产蛋高峰期提前，蛋鸡生产性能得到提升。

（2）通过试验结果显示，添加抗生素对抗体水平无显著影响。但通过第二、三次强化免疫后，家禽能产生更高和持续时间更久的免疫保护效果。

（3）禽流感疫苗由强毒禽流感病毒制成的灭活油乳剂疫苗，硫酸头孢喹肟注射液也为油乳剂，只对细菌有消灭作用，对病毒性病原不产生影响；硫酸头孢喹肟注射液为中性酸碱度，对疫苗的pH 不产生影响，所以两者结合使用不存在排异性。3 次试验中抗体水平试验组和对照组没有明显区别，通过试验得到验证。

高致病性禽流感疫苗免疫在国内已推广应用多年，但疫苗免疫副反应和免疫效果还需要进一步探索和解决，这也是湖北省乃至全国禽类养殖业的重点研究方向。一般情况，疫苗在生产和使用过程中容易产生杂菌，在对鸡群进行免疫注射后，如果有杂菌随疫苗进入，增加鸡群产生副反应和患病的风险，将硫酸头孢喹肟一起免疫注射可将进入家禽注射部位伤口和部分体内的细菌消灭，减少机体应激反应。本项目利用试验制定出科学合理的免疫程序，探索出减少机体应激反应、继发感染和提高蛋鸡生产性能的有效方法，本项目的实施将会显著提升蛋鸡养殖场经济效益，示范推广前景广阔。