HPCE法测定塞北紫堇中的原阿片碱含量

李 欣,卢永昌

(1.青海民族大学药学院，青海西宁810007；2.青海省药物分析重点实验室，青海西宁810007；3.青海省青藏高原植物资源化学研究重点实验室，青海西宁810007）

塞北紫堇（Corydalis impatiens）为罂粟科紫堇属，主要分布于青海、甘肃、内蒙古等地,生山地疏林中或草坡上。在藏药中，主要用于治疗高血压、肝炎、肠胃炎及活血化瘀等[1-2]。生物碱是存在于塞北紫堇中的一大主要成分，具有抗炎、镇痛等药理活性[3-4]。通过建立高效毛细管电泳法来测定其生物碱含量的技术研究较少，现采用HPCE法测定其原阿片碱的含量，为其进一步的开发利用提供一定的依据。

1 实验材料与仪器

1.1 实验仪器

美国Agilent7100毛细管电泳系统、石英毛细管（64.5 cm×50 μm，有效长度56 cm），pHS-3C 酸度计（成都世纪方舟科技有限公司），AL204电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司上海分公司），KQ3200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），优普超纯水制造系统（四川优普超纯科技有限公司）。

1.2 实验试剂及实验药材

硼砂、盐酸（药集团化学试剂有限公司）；甲醇，乙腈；原阿片碱对照品（批号：MUST-18110711）。

药材于2018年采于青海省，由青海民族大学林鹏程教授鉴定，确定为塞北紫堇。

2 实验方法

2.1 溶液制备

供试样品溶液的制备：称取塞北紫堇粉末约0.5 g，加甲醇10 mL，超声提取。

对照品溶液：称取原阿片碱对照品0.28 mg，用甲醇溶解并定容。

所制备的溶液均用0.45 μm 微孔滤膜过滤。

2.2 电泳条件

检测波长270 nm；压力进样5 mba×5 s；分离电压17 kV；毛细管温度20 ℃；选用50 mmol/L 硼砂-15%的乙腈为缓冲溶液（pH = 8.85)，并过0.45 μm 微孔滤膜过滤。

供试品A、对照品B溶液的HPCE图谱见图1。

2.3 线性关系考察

分别移取原阿片碱对照品溶液0.3、0.8、1.3、1.8、2.3、2.8 mL，置于 10 mL 量瓶中 ,用甲醇定容至刻度，电泳测得各个对照品浓度所对应的峰面积，并以峰面积为纵坐标，以对照品浓度为横坐标做标准曲线。得回归方程为Y= 2369.1X+20.623。结果表明原阿片碱在浓度为0.006 ～0.056 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

取对照品溶液，连续进样6 次,记录原阿片碱的峰面积并计算RSD为1.25%。表明用此方法的精密度良好。

2.5 稳定性试验

取供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8 h 进样, 计算RSD为1.76%。实验结果表明该供试品溶液在8 h内是稳定的。

图1 供试品A、对照品B溶液的HPCE图谱

2.6 重复性试验

称取塞北紫堇药材6 份,用甲醇超声提取，测得原阿片碱相应峰面积并计算其RSD为1.97%。实验结果表明该试验的重复性较好。

2.7 加样回收率

称取已知原阿片碱含量的细果角茴香样品6份，分别按80%、100%、120%3个浓度加入原阿片碱对照品，制备供试品溶液，电泳测得原阿片碱的加样回收率及RSD为0.4%。

3 讨论

3.1 缓冲液的选择

通过几种缓冲液的选择：磷酸-甲醇、磷酸-乙腈、硼砂-甲醇、硼砂-乙腈，发现硼砂-乙腈的的分离效果最佳。

3.2 缓冲溶液pH的选择

确定硼砂-乙腈缓冲体系后，用不同的酸、碱调缓冲液的pH, 最后确定为用HCl 调至pH = 8.73为最佳，分离效果达到做好。

3.3 有机溶剂的选择

甲醇、乙腈能够增加毛细管的电渗流，从而改善分离效果。乙腈和甲醇的图谱进行对比，乙腈的分离效果优于甲醇。

3.4 分离电压

分离电压的大小决定出峰的快慢，当达到17 kV时出峰最为恰当。

通过多种因素的考察，包括缓冲溶液、pH、分离电压、有机溶剂等，发现在5 min内，分离电压为17 kV、以四硼酸钠-乙腈为缓冲溶液且pH 为8.85时，分离效果最为满意，原阿品碱完全分离。添加少量的乙腈可以改善分离效果，乙腈的体积不宜过高，否则会导致毛细管内残留结晶。