HPLC 法同时测定胃舒宁颗粒中的芍药苷、甘草酸和延胡索乙素的含量

邱连建，何泰东，周才杰

(1. 深圳市龙岗区中医院，广东 518033； 2. 深圳市中医院，广东 518033)

胃舒宁颗粒由甘草、白芍、延胡索、白术、党参与海螵蛸6味中药组成，具有补气健脾，制酸止痛的功效，收载于《中国药典》一部[1]，临床上用于脾胃气虚、肝胃不和所致的胃脘疼痛、喜温喜按、泛吐酸水；胃及十二指肠溃疡见上述症候者。临床实验表明，胃舒宁颗粒有较好的抗胃溃疡和制酸、镇痛作用[2，3]。目前基于文献[4-10]分析，其质量标准主要是测定芍药苷、甘草酸和延胡索乙素，但是都是单独测定，多指标含量测定能更加客观评价中成药的质量[11-13]。因此，本试验建立了同时测定胃舒宁颗粒中芍药苷、甘草酸和延胡索乙素含量的高效液相色谱法，有助于提高其质量标准，保证临床用药的有效性。

1 仪器与试药

1.1仪器 沃特世2695高效液相色谱仪(PDA 检测器、Empower工作站，美国沃特世公司)；赛多利斯BD303 型电子分析天平(德国赛多利斯公司)；天津康杰X2100超声仪。

1.2试药 芍药苷对照品(批号110736-201842，标示含量为97.4%)、甘草酸铵对照品(批号110731-201720，标示含量为93.0%)、延胡索乙素对照品(批号110726-201819，标示含量为99.8%)，均购自中国食品药品检定研究院。水为超纯水，甲醇与乙腈均为色谱纯(科密欧公司)。胃舒宁颗粒[葵花药业集团(冀州)有限公司，批号为180808、181011、190105]。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Ultimate-C18柱(150 mm×4.6 mm，3.5 μm)；流动相A相为甲醇-乙腈(1∶9)，B相为0.1% 磷酸水溶液，梯度洗脱：0～15 min，10%→20% A；15～30 min，20%→45% A；30～40 min，10% A；流量: 0.9 ml/min，分段变波长测定：0～15.0 min为230 nm，15.0～21.0 min为280 nm，21.0～40.0 min为250 nm；柱温:35 ℃；进样量: 20 μl。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备 分别精密称定芍药苷、甘草酸和延胡索乙素适量，分别置50 ml量瓶中，加流动相超声溶解，稀释至刻度，得约含芍药苷340 μg/ml、甘草酸 530 μg/ml、延胡索乙素3.0 μg/ml的对照品贮备液1，备用。再精密称定芍药苷、甘草酸和延胡索乙素适量，分别置50 ml量瓶中，加流动相超声溶解，稀释至刻度，得含芍药苷800 μg/ml、甘草酸 1 200 μg/ml、延胡索乙素10 μg/ml的对照品贮备液2，备用。再精密吸取对照品贮备液2适量置量瓶中，流动相稀释至刻度，得含芍药苷40 μg/ml、甘草酸 60 μg/ml、延胡索乙素0.5 μg/ml的混合对照品溶液，备用。

2.2.2供试品溶液的制备 取胃舒宁颗粒( 批号为180808) 适量研细，取约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相25 ml，称定重量，浸泡1 h，超声处理0.5 h，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.3阴性样品溶液的制备 按照胃舒宁颗粒的处方工艺分别制备缺芍药、缺甘草、缺延胡索的阴性样品，并照“2.2.2”项下方法制成阴性样品溶液。

2.3专属性试验 分别取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，照“2.1”项下色谱条件测定。结果芍药苷、甘草酸和延胡索乙素的分离度均符合要求，单个色谱峰的理论塔板数均不低于 3 000；空白无干扰。色谱图见图 1。

2.4线性关系试验 精密吸取按“2.2.1”项下方法制备的对照品贮备液2的不同体积，以流动相定容，摇匀，即得系列质量浓度的线性试验溶液。以浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，各成分在各自线性范围内均呈良好的线性关系。结果见表1。

2.5精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 20 μl，按照“2.1”项下色谱条件进样，连续进样 6 次，测得芍药苷、甘草酸和延胡索乙素峰面积的 RSD 值分别为 0.6%、0.5% 和 0.9%(n=6)，表明精密度良好。

2.6稳定性试验 取同一供试品(批号180808)按“2.2.2”项下方法制备成供试品溶液，于0、1、2、4、6、8、10和12 h，按照“2.1”项下色谱条件进样，测定芍药苷、甘草酸和延胡索乙素的峰面积。测得峰面积RSD值分别为 1.4%、1.5% 和 1.8%，表明在室温条件下，供试品溶液在12 h 内稳定性良好。

2.7重复性试验 取同一供试品(批号180808)，按“2.2.2”项下方法平行制备 6 份供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件，测得芍药苷、甘草酸和延胡索乙素的平均含量分别为3.352、5.273 和 0.029 mg/g，RSD 值分别为 1.4%、1.1% 和1.8%，表明该方法的重复性良好。

1.芍药苷 2.甘草酸 3.延胡索乙素

表1 线性方程

2.8加样回收试验 取已知含量的供试品(批号180808) 9份，每3份1组，每份1 g，精密称定，分别加入对照品贮备液1(低浓度组8 ml、中浓度组10 ml、高浓度组12 ml)，再加入流动相，再按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率，结果芍药苷、甘草酸和延胡索乙素的平均回收率分别为99.89%、100.09%和99.63%，RSD分别为1.5%、0.74% 和2.75%。结果见表2-4。

2.9样品测定 取供试品3批，每批3份，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，外标法测定样品中各成分含有量，结果见表5。

表2 芍药苷加样回收率试验结果(n=9)

表3 甘草酸加样回收率试验结果(n=9)

表4 延胡索乙素加样回收率试验结果(n=9)

表5 样品中各成分的含量

3 讨论

3.1色谱条件选择 首先对于色谱填料进行了筛选，考查了常用的色谱填料苯基柱、C8柱、C18柱，优选C18柱，进而对于不同品牌的C18柱进行筛选，优选Ultimate-C18柱，同时考查该型号不同规格的色谱柱，选择了150 mm×4.6 mm，5 μm。其次对流动相进行了筛选，考查了磷酸体系与甲酸体系，优选磷酸体系。

3.2样品制备方法的选择 考查了不同的提取溶剂，从甲醇、乙醇、流动相中，优选流动相；考查了不同的浸泡时间和超声时间，包括0.5、1和1.5 h，浸泡时间优选1 h，超声时间优选0.5 h，提取效率最高。

本试验建立了 HPLC 法测定胃舒宁颗粒中芍药苷、甘草酸和延胡索乙素的含量，该方法快速、高效、准确，可用于胃舒宁颗粒的质量控制。