HPLC法测定半夏糖浆中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

周 军，陈 卓，张 茉，王 杰

(天津市药品检验研究院，天津 300070)

半夏糖浆由麻黄、紫菀、枇杷叶、甘草等9味中药组成，具有化痰止咳的作用，用于治疗咳嗽痰多、支气管炎。其质量标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第八册(标准号WS3-B-1527-93)。原质量标准中仅有化学鉴别、相对密度及糖浆剂常规检查项，无定量指标，无法控制药品的质量。麻黄具有发汗散寒、宣肺平喘、利水消肿的功效，用于风寒感冒、胸闷咳喘、风水浮肿，与处方中的其他中药协同发挥化痰止咳的作用。《中国药典》2015年版一部麻黄药材项下采用HPLC法测定活性成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的量[1]。为了有效控制药品的质量，本试验采用HPLC法测定半夏糖浆中的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量。

1 仪器与试药

1.1仪器 岛津LC-20AD高效液相色谱仪，配有LC-20AD泵、SIL-20AC自动进样器、SPD-M20紫外检测器、CTO-20AC柱温箱；LC-soLution色谱工作站。

1.2试药 乙腈(色谱纯，默克公司)；甲醇(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)；磷酸、磷酸二氢钾、三乙胺、盐酸均为市售分析纯；水为超纯水。盐酸麻黄碱对照品(中国食品药品检定研究院提供，批号171241-201508，供含量测定用，质量分数99.8%)、盐酸伪麻黄碱对照品(中国食品药品检定研究院提供，批号171237-201510，供含量测定用，质量分数99.8%)。 半夏糖浆(HLBZ，批号2017-1～2017-24，2018-1～2018-8；GSXY，批号2016b-1，2017b-1,2018-1b～2018b-2；HHZX，批号2018-1c～2018c-3；STCC，批号2017d-1,2018d-1；LSYY，批号2016e-1～2016e-2，2017e-1，2018e-1；HXNY，批号2017f-1，2018f-1；BSYP，批号2016g-1～2016g-2；KYHW，批号2017h-1；ZQJJ，批号2017i-1，2018i-1～2018i-2；GBXQ，批号2018j-1～2018j-2，2017j-1；GWDQ，批号2017k-1～2017k-2，2016k-1，2018k-1～2018k-2；JYSY，批号2018l-1；GZXT，2017m-1～2017m-4，2018m-1～2018m-3；HBYY，批号2017n-1～2017n-6，2018n-1～2018n-7；GZLZ，批号2017p-1～2017p-13，2018p-1～2018p-18；HDBZ，批号2017q-1～2017q-7，2018q-1；GBXQ，批号2017r-1～2017r-16，2018r-1～2018r-6；GHXT，批号2017s-1～2017s-5)均为2018年国家评价抽验样品。试验中使用的处方药材均由天津中药饮片厂提供，由天津市药品检验研究院赵晨主管药师鉴定，均符合《中国药典》2015年版一部相关标准的要求。

2 方法与结果

2.1色谱条件 OSAKA SODA CAPCELL PAK C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；以乙腈-0.1 mol/L磷酸二氢钾水溶液(含0.1%磷酸及0.1%三乙胺)(5∶95)为流动相；检测波长210 nm；柱温25 ℃；体积流量1.0 ml/min；进样量10 μl。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备 分别取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱适量，加5%氨水甲醇制成每1 ml中含有盐酸麻黄碱55 μg、盐酸伪麻黄碱50 μg的混合溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备 精密量取本品15 ml，置25 ml量瓶中，加0.1 mol/L盐酸稀释至刻度，摇匀，精密量取3 ml，加于已处理好的混合型阳离子交换小柱上(500 mg，依次用甲醇、水、0.1 mol/L盐酸各10 ml洗脱)，用甲醇5 ml洗脱，弃去洗脱液，再用5%氨水甲醇溶液洗脱至10 ml量瓶中，加5%氨水甲醇溶液至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性样品溶液的制备 按处方取除麻黄外的各味药材，按半夏糖浆处方制得阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液。

2.3系统适用性试验 取上述对照品溶液5 μl、供试品溶液和阴性样品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3 000，盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的分离度应大于1.5。见图1。

2.4标准曲线的制备 取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加5%氨水甲醇溶液制成0.4678、1.169 5、2.339 0、7.017 0、11.695 0和46.780 0 μg/ml的对照品溶液，分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，按以上色谱条件分别测定峰面积。以对照品进样的质量为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程:Y=1743.2X-862.62(r=0.999 9)。结果表明，盐酸麻黄碱进样量在4.67 8～467.8 ng与峰面积线性关系良好。取盐酸伪麻黄碱对照品适量，加5%氨水甲醇溶液制成0.444 1、1.110 0、2.220 0、6.662 0、11.100 0和44.410 0 μg/ml的对照品溶液，分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，按以上色谱条件分别测定峰面积。以对照品进样的质量为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程：Y=1 773.2X-1 112.8(r=0.999 9)。结果表明，盐酸伪麻黄碱进样量在4.441～444.1 ng与峰面积线性关系良好。

1.盐酸麻黄碱 2.盐酸伪麻黄碱

2.5精密度试验 取半夏糖浆(HLBZ，2017-24)样品，精密量取15 ml，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，连续进样6次，计算得样品中盐酸麻黄碱峰面积的RSD值为0.85%，盐酸伪麻黄碱峰面积的RSD值为0.75%。

2.6重复性试验 取半夏糖浆(HLBZ，2017-24)样品，精密量取15 ml，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定，计算得样品中盐酸麻黄碱质量分数为30.77 μg/ml，RSD为0.46%；盐酸伪麻黄碱质量分数为32.48 μg/ml，RSD为2.53%。

2.7稳定性试验 精密量取同一批半夏糖浆(HLBZ，2017-24)15 ml，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、18和24 h进样测定。结果样品中盐酸麻黄碱峰面积的RSD为0.75%，盐酸伪麻黄碱峰面积的RSD为2.54%。

2.8回收率试验 取半夏糖浆(HLBZ，2017-24)样品，精密量取7.5 ml，共6份，置25 ml量瓶中，分别精密加入含有盐酸麻黄碱0.023 05 mg/ml与盐酸伪麻黄碱0.025 705 mg/ml混合对照品的0.1 mol/L盐酸溶液10 ml，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率。结果盐酸麻黄碱的平均回收率为95.82%(RSD为0.84%)、盐酸伪麻黄碱的平均回收率98.77%(RSD为1.62%)。见表1和表2。

表1 盐酸麻黄碱回收率试验结果(n=6)

表2 盐酸伪麻黄碱回收率试验结果(n=6)

2.9样品测定 对本次抽验18家生产企业共151批半夏糖浆样品依法测定，结果见表3。

表3 半夏糖浆样品含量测定结果 mg/ml

续表3

续表3

续表3

注：HXNY的2批样品测定结果非常低，已超出标准曲线范围。怀疑使用提取过的麻黄投料

3 讨论

3.1提取方法的选择 试验中尝试采用样品稀释后直接进样测定，结果在盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱色谱峰出峰位置有较多的杂质峰，无法分开；采用蒸馏法[2]，结果样品蒸馏时间长；采用萃取法[3，4]，将样品加氨水碱化后，用乙醚提取，结果样品溶液非常易乳化并且萃取时间长；采用固相萃取柱富集净化的方法简单、快速、准确[5]。分别比较不同品牌的固相萃取柱，进行耐用性试验，结果显示含量测定结果基本一致。

3.2流动相的选择 分别采用乙腈-0.1%磷酸(5∶95)、甲醇-0.1%磷酸(10∶90)、乙腈-0.1 mol/L磷酸二氢钾水溶液(含0.1%磷酸及0.1%三乙胺)(5∶95)为流动相分别进行试验，结果以采用乙腈-0.1 moL/L磷酸二氢钾水溶液(含0.1%磷酸及0.1%三乙胺)(5∶95)为流动相样品中的盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱分离较好。

3.3样品测定情况 计算抽验样品中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱测定总量的平均值为0.046 06 mg/ml，部分样品测定结果较低，不同企业间样品含量差异较大，其中最低的HXNY共2批次样品测定结果低于线性范围，怀疑该企业使用提取过的麻黄投料。此外，部分企业不同批次间样品差异较大，无法保证半夏糖浆药品的质量。因此，建立样品中麻黄的含量测定方法具有重要的意义。