多花黄精从生粉到九蒸九晒过程中多糖的变化

陈瑞瑞 祖艳红 石丁夫 杜李继 王凯 刘玉军 赵辉

摘要[目的]选取浙江丽水和安徽青阳2个产地的多花黄精3年生以上块茎，研究其在九蒸九晒过程中多糖的变化。[方法]参考药典中黄精多糖硫酸-蒽铜测定法。[结果]生黄精中多糖的含量最高，到三蒸三晒剧烈下降，此后到九蒸九晒中间数次反弹，但总体呈缓慢下降趋势。两组多糖均值相关性显示，不同品种的九蒸九晒过程中多糖变化反应一致性良好。对试验数据采取可重复双因素方差分析显示，10个处理间多糖含量差异达到极显著水平，2个品种间也达到了极显著水平。品种和处理的交互作用对多糖的影响也达到极显著水平。[结论]该试验结果为炮制中药或临床上对黄精多糖含量提出要求时提供参考，并为研究不同产地或不同黄精品种间多糖含量差异提供试验启发。

关键词多花黄精;生粉;九蒸九晒;多糖变化

中图分类号R 282文献标识码A

文章编号0517-6611（2019）18-0181-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.18.049

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Changes of Polysaccharides in the Process of Polygonatum cyrtonema from Raw Flour to Nine Steaming and Nine Drying

CHEN Rui-rui1，2，ZU Yan-hong1，2，SHI Ding-fu1，2 et al（1.Anhui Academy of Science and Technology，Hefei，Anhui 230031;2.Anhui Engineering Research Center for Plant Active Component Extraction and Separation，Hefei，Anhui 230088）

Abstract[Objective]The research aimed to select the tuber of more than 3 years old of Polygonatum cyrtonema from two producing areas in Lishui of Zhejiang Province and Qingyang of Anhui Prorince，and study the changes of polysaccharides during the process of nine steaming and nine drying.[Method]This article refers to the pharmacopoeia determination of Polygonatum sulphate sulfate-yttrium copper.[Result]The content of polysaccharide was the highest in raw powder.After that，the content decreased sharply to three steaming and three drying，and then rebounded several times till nine steaming and nine drying.The relative coefficients between the two groups of the mean polysaccharides showed that the polysaccharides of different varieties during processing were consistent and good.Repeatable two-factor analysis of variance was performed on the test data and showed that the difference in polysaccharide content between the 10 treatments reached the extremely significant level，and the two varieties also reached the extremely significant level.And also the reciprocal action.[Conclusion]The results of this experiment can provide a reference for processing Chinese traditional medicine or clinical medicine on the content of polysaccharide and for figuring out the differences on the content between different species.

Key wordsPolygonatum cyrtonema;Raw powder;Nine steaming and nine drying;Changes of polysaccharide content

黃精在自然界中野生种质资源丰富，《中国药典》2015年版一部收载的黄精有滇黄精（大黄精）、黄精（鸡头黄精）、多花黄精（姜形黄精）3种，但实际应用种尚不止此3种目[1]，其是一种传统的药食同源的中药材，具有益气补血、滋阴润肺等功效[2]。随着现代各种检测仪器和检测方法的发展，证明黄精中含有多糖类、氨基酸、微量元素、甾体皂苷、木质素等成分。其中多糖类的含量最高[3]，研究表明黄精中的粗多糖可以增强小鼠的细胞和体液的免疫力，多糖可以促进小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化等功能[4]。

中草药的炮制之法同样源远流长，是中国医药遗产的组成部分，数千年来国人用之于治病防病和身体保健，也保证了当代中医临床用药安全有效。该研究的黄精采用九蒸九晒之法炮制[5]，与生黄精相比，消除了某些刺激性和毒副作用，增加药物成分，药性大大改变，偏滋补，滋肾阴，补气血，其补益作用大增[6]。但多糖作为黄精中最主要的药用成分，其在九制过程中如何变化直接影响着临床用药的考量。笔者主要研究在九蒸九晒过程中黄精多糖的变化，以期为临床用药或保健功能中对多糖的研制提供依据。

1材料与方法

1.1材料与仪器2种多花黄精分别取自浙江丽水和安徽青阳，植株表型存在差异，取3年生以上的块茎。去除根须，清洗晒干。从生片开始，每蒸晒一次后取样，切片，打磨成粉，试验用电热恒温鼓风干燥箱进行切片的恒温干燥或者干粉储存，以及冷冻干燥机（FD-1A-50）进行低温干燥，多糖检测用UV-2550紫外分光光度仪。

1.2标准曲线的绘制取33 mg葡萄糖用100 mL容量瓶定容备用。取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL加水至2 mL，于冰水中加8 mL现配的0.2%蒽铜硫酸，沸水浴10 min，冷却，用紫外分光光度仪测定其在582 nm波长下的吸光度，建立浓度-吸光度标准曲线。

1.3黄精多糖的提取方法及原理称取0.45 g干燥黄精粉，加入圆底烧瓶，加入150 mL 80%的乙醇，沸水浴冷凝回流 1 h，过滤保留固体，连同滤纸加入150 mL 纯水再次沸水浴冷凝回流1 h，收集滤液用容量瓶定容到250 mL。测定时，取 1 mL 待测液加1 mL纯水在冰水环境中加8 mL蒽铜硫酸，沸水浴10 min，冷却，测定吸光度，对照标准曲线，计算其中无水葡萄糖的含量。

原理：蒽酮-硫酸法[7-8]虽与水提醇沉法[9]过程相反，但有异曲同工之效，都是利用多糖在水和有機溶剂中溶解度不同，从而达到洗去杂质纯化多糖目的。此法是中国药典中黄精多糖的检测方法，原理是利用硫酸参与多糖的分解，被降解成单糖，单糖快速脱去水分子，产生醛类衍生物，然后与蒽酮反应得到显色化合物，比色测定。

2结果与分析

从图1可以看出，2个品种的多糖变化趋势整体一致，且2个品种都显示生粉中的多糖含量最高，之后下降，从生粉到三蒸三晒下降最剧烈，但从四蒸四晒到最后九蒸九晒中间略起落，变化缓慢，逐渐趋于稳定。2个品种相比较发现浙江丽水多花黄精多糖含量在蒸晒过程中几乎始终高于安徽青阳黄精。对2个品种的多糖均值进行相关性分析得到相关系数达到0.97，达到显著相关水平，说明不同的品种在九蒸九晒过程中多糖变化反应一致性良好，也说明样品处理和检测效果较好，误差小。

进一步对2个品种10种处理的多糖值进行可重复双因素方差分析， 结果表明，2个品种间多糖差异 F>F crit，结合P值（2.6E-13）显示，差异达到极显著水平。同时，处理之间 F>F crit，结合P值（7.82E-33）显示不同处理间多糖差异也达到了极显著水平。此外，品种和处理间的交互作用对多糖的影响也达到了极显著水平。

3结论与讨论

试验结果表明，黄精虽然经过蒸晒后口感变好，药性增加，但多糖含量明显下降，尤其从生粉到三蒸三晒之间下降剧烈。从生粉到九蒸九晒之间的多糖含量差异达到极显著水平，说明黄精的蒸晒极大地影响着黄精多糖的变化。但三蒸三晒之后趋于稳定，古法讲究九制黄精，但单从多糖的成分看，为节约工时三蒸三晒或者四蒸四晒就已经与九制无太大差别，后期改变的可能更倾向于口感或者其他药用成分。多糖作为黄精中重要的药用成分，此试验结果为中药炮制或者临床上对多糖含量提出要求时提供参考，在改变药性的同时综合考虑药物成分的变化。2个品种之间含量差异也达到了极显著水平，为后来者研究不同黄精资源中多糖含量是否存在差异提供参考。

进一步分析多糖变化从生粉到三蒸三晒多糖下降最剧烈，后直到九蒸九晒变化起伏不如之前明显。最主要的原因可能是每次蒸的过程中一部分多糖析出溶于水蒸气，形成水滴于锅中，正因为这个原因，每次蒸完，液体都呈现红糖色并有黏稠感;而每次的蒸晒都是黄精块茎，反复3次，才能把大部分多糖蒸出，这个过程可参考水提醇沉法提取黄精多糖，利用多糖溶于水不溶于有机溶剂的特性，前期就是用热水浸提，过滤，收集滤液。后期多糖起伏的原因可能有如下几种可能性：①多糖的溶解度与每次的料液比、水温和蒸煮时间有关，每次控制并不统一导致试验产生误差。②多糖含量逐渐稳定，但块茎每次经过蒸晒之后质量下降，导致检测含量增加。③多糖结构复杂，虽然有研究发现，温度过高或蒸煮时间过长会使黄精多糖发生糖苷键的水解和糖的脱水反应而生成5-羟甲基糖醛（5-HMF）[10]，但目前对多糖成分的研究仅局限于初级，对多糖高级结构的研究不明确，以至于在高温水蒸下如何变化尚不得知。因此，对多糖具体化学成分分析以及在高温下如何变化有待进一步研究，为控制多糖质量指标和临床上研制多糖药物提供依据。

此次参试的只有2个品种用来研究多糖蒸晒变化趋势，数据上略显单薄，关于蒸晒过程中多糖变化趋势和品种之间存在差异的结论需要收集其他品种进行检测统计，其他比如多花黄精之外的品种是否存在这种变化趋势以及品种间差异有待进一步研究。

参考文献

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