高效液相色谱法同时测定感冒清胶囊中对乙酰氨基酚和盐酸吗啉胍含量

王丽琼，吴 丽

（四川省乐山市食品药品检验检测中心，四川 乐山 614000）

感冒清胶囊属抗感冒药类中西药复方制剂，由对乙酰氨基酚、盐酸吗啉胍、马来酸氯苯那敏和其他6味药材（南板蓝根、大青叶、金盏银盘、岗梅、山芝麻和穿心莲叶）制成，主治疏风解表、清热解毒，用于风热感冒之发热、头痛、鼻塞流涕、喷嚏、咽喉肿痛、全身酸痛等症。其临床应用广泛，不良反应事件也有报道，这与其中含有的西药成分有关，故严格控制中西药复方制剂中的西药成分尤为重要［1-2］。盐酸吗啉胍在反相色谱系统中保留弱，易受溶剂峰的干扰［3-6］，在流动相中加入反相离子［7-11］，结合成离子对化合物，在C18柱保留增强，分离效能提高。本研究中建立反相离子对高效液相色谱法，同时测定感冒清胶囊中对乙酰氨基酚和盐酸吗啉胍的含量，为质量标准的提高提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司，含 DAD检测器）；XSE205型 DualRange电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；CQ-100B型超声波清洗机（上海跃进医用光学器械厂）；16K型台式离心机（珠海黑马医学仪器有限公司）；FE 28型pH计（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 试药

对乙酰氨基酚对照品（批号为100018-201610，含量为99.9%），盐酸吗啉胍对照品（批号为100483-200402），均购自中国食品药品检定研究院；感冒清胶囊（市售，通化颐生药业股份有限公司，批号分别为171214，180615；广州白云山医药集团股份有限公司白云山制药总厂，批号为1180008）；甲醇（色谱纯，河北百灵威超精细材料有限公司）；辛烷磺酸钠（离子对色谱试剂，成都市科隆化学品有限公司）；水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Waters XTerra C18柱（250 mm × 4.6 mm，5μm）；流动相：0.02mol／L磷酸二氢钾溶液（含0.005mol／L辛烷磺酸钠，用10%磷酸调pH至3.0）-甲醇（75∶25，V/V）；检测波长：215 nm；进样量：10 μL；流速：1.0 mL ／min；柱温：30 ℃。在此色谱条件下，理论板数按对乙酰氨基酚峰计为7 647，对乙酰氢基酚和盐酸吗啉胍分离度为7.58，阴性样品溶液色谱图中未检出与对照品溶液主峰保留时间一致的色谱峰，辅料及其他主药对测定无干扰（见图1）。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

取对乙酰氨基酚对照品48.38 mg和盐酸吗啉胍对照品47.74 mg，精密称定，置同一50 mL容量瓶中，用适量25%甲醇（用10%磷酸调pH至3.0，以下简称溶剂）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。精密量取对照品贮备液5 mL，置10 mL容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取样品10粒，精密称定，计算平均装量，混匀，精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚24 mg），置50 mL容量瓶中，加溶剂适量，超声助溶，用溶剂稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液滤过，即得供试品溶液。按处方比例配制不含对乙酰氨基酚和盐酸吗啉胍的阴性样品，依法制备阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：精密量取对照品贮备液1，2，4，6，8 mL，分别置10 mL容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，得系列溶液；取系列溶液和对照品贮备液共6份，按拟订色谱条件测定峰面积。以质量浓度（C，μg／mL）为横坐标、相应峰面积（A）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程A对＝15.65C+123.38，r＝0.999 9，线性范围为 96.66 ～ 966.63 μg／mL；A盐＝23.53C+187.46，r＝0.999 8（n＝6），线性范围为 95.48 ～954.80 μg／mL。

精密度试验：精密吸取上述对照品溶液，按拟订色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果的RSD分别为对乙酰氨基酚 0.61%和盐酸吗啉胍 0.78%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批（批号为171214）样品，依法平行制备6份供试品溶液，按拟订色谱条件分别进样测定。结果平均每粒含对乙酰氨基酚和盐酸吗啉胍分别为标示量的 99.4% 和 99.7% ，RSD分别为 0.98% 和1.32%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密称取已知含量的样品（批号为171214，每份约 0.25 g）6 份，分别置 6 个 50 mL 容量瓶中；精密称取对乙酰氨基酚对照品152.81 mg和盐酸吗啉胍对照品165.81 mg，置同一25 mL容量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，精密量取2 mL，分别置上述相应的50 mL容量瓶中，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n＝6）

稳定性试验：精密量取上述供试品溶液，室温下分别于 0，2，4，6，8，12，24 h 时进样，测定峰面积。结果对乙酰氨基酚和盐酸吗啉胍的RSD分别为0.60%和1.06%（n＝7），表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4 样品含量测定

取3批样品，每批平行3份，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，采用外标法以峰面积计算样品含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（%，n＝3）

3 讨论

3.1 检测波长选择

根据对乙酰氨基酚、盐酸吗啉胍和马来酸氯苯那敏在200～400 nm波长范围内的紫外光谱图，在215 nm波长处，对乙酰氨基酚有最小吸收，盐酸吗啉胍有最大吸收，测定波长宜选用曲线平缓区域（波峰和波谷）；且本色谱条件下，对乙酰氨基酚和盐酸吗啉胍在此波长处的响应值相近。最后确定215 nm为测定波长。

3.2 离子对试剂选择

盐酸吗啉胍流动相中电离成阳离子，选用磺酸类阴离子试剂。考察了戊烷磺酸钠 （0.01 mol／L）、己烷磺酸钠（0.01 mol／L）、庚烷磺酸钠（0.005，0.01 mol／L）和辛 烷 磺 酸 钠 （0.001，0.002，0.003，0.004，0.005，0.01 mol／L）对分离的影响。结果显示，0.01 mol／L 庚烷磺酸钠、0.005 mol／L 辛烷磺酸钠和 0.01 mol／L 辛烷磺酸钠均能较好地分离。考虑到离子对试剂浓度大对色谱柱的影响［12］，最后选择 0.005 mol／L 辛烷磺酸钠。

3.3 应用价值

感冒清胶囊现行标准有5个：中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂（第十九册，WS3-B-3717-98）、国家食品药品监督管理局国家药品标准（WS3-B-3717-98-2）、国家食品药品监督管理局国家药品标准修订批件2002ZFB 0245、国家食品药品监督管理局国家药品标准（WS3-B-3717-98-1）和国家食品药品监督管理局国家药品标准（WS3-B-3717-98-3）。各标准之间检验项目和检验方法各不相同，前三者含量测定项下只控制了对乙酰氨基酚的含量，后两者含量测定项下包含了对乙酰氨基酚和盐酸吗啉胍，但盐酸吗啉胍出峰时间很快（2 min左右），溶剂峰和未知杂质峰干扰大。在本试验条件下，盐酸吗啉胍保留时间延长至7min左右，与相邻对乙酰氨基酚峰分离度符合要求，不受干扰。经方法学验证，方法专属性好，精密度、重复性、准确度高，适用于感冒清胶囊的质量控制，可为其质量标准的提高提供参考。