T淋巴细胞斑点实验联合荧光PCR法用于肺结核诊断中的临床分析

河南省濮阳市第五人民医院（457000）刘慧君

有关数据调查显示[1]，每年全球因肺结核死亡的人数约有300万，死亡率最高的为发展中国家，肺结核已经成为世界性的公共卫生问题。T淋巴细胞斑点实验（T-SPOT）与荧光PCR法均是诊断肺结核的有效方法，但临床鲜少有联合检查在肺结核诊断中的应用价值分析，本研究对101例疑似肺结核患者进行研究，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我院2016年2月～2018年2月收治的101例疑似肺结核患者为研究对象，男性57例，女性44例；年龄19～66岁，平均年龄（42.5±4.14）岁。

1.2 方法 患者均接受T-SPOT法与荧光PCR法联合T-SPOT法检测：①荧光PCR法：采集患者痰液标本，并在其中加入2～3倍体积的4%NaOH，取0.5ml～1.5ml以15000r/min离心5min后弃上清液，于沉淀物中加入1ml无菌生理氯化钠进行标本预处理，与之混合。使用荧光PCR试剂盒，严格按照试剂盒操作说明处理。②T-SPOT：取患者4ml外周静脉血，离心管内加入4ml RPMI1640培养液充分摇匀。在另一只离心管内加入3ml淋巴细胞分离液，取8ml混匀的细胞悬液加入淋巴细胞分离液中，并以16000r/min速率离心22min，再加入RP-MI1640培养液，以600r/min速率离心7min，弃上清液。再加入11ml AIMV培养液，以350r/min的速率离心7min，弃上清液。与AIMV培养液混匀后取10ml细胞悬液与40ul锥虫蓝染色液混匀后，取10ul置于细胞计数板上，采用结核感染T淋巴感染试剂盒中的微孔板进行计数、统计处理，并记录T细胞数量。

1.3 观察指标 荧光PCR法：①阳性标准：结核杆菌DNA≥500copy/mL，②阴性标准：结核杆菌DNA<500copy/mL。SPOT法：①阳性标准：阴性对照的着色细胞斑点形成数（SFC）为0～5个，抗原A和抗原B检测孔技术≥6个；阴性对照SFC为6～10个，抗原A或抗原B≥2倍阴性孔斑点数。②阴性标准：抗原A、抗原B孔未达以上标准，但阳性对照反应较好。以临床最终诊断结果为金标准，计算T-SPOT法联合荧光PCR法的诊断准确率、特异度、敏感度。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0软件对本研究数据进行处理，计数资料以x2检验，差异有统计学意义为P＜0.05。

2 结果

以培养法为诊断为金标准，101例患者中，最终确诊肺结核95例，其他6例；T-SPOT试验检出97例，经金标准确诊86例，其他4例。T-SPOT试验联合荧光PCR法检出96例，经金标准确诊肺结核94例，检出其他5例。联合检测法的诊断准确率率、特异度、敏感度较单一T-SPOT实验法高（P>0.05），见附表。

附表 不同检测法的诊断准确率、敏感度、特异度比较（n,%）

3 讨论

肺结核因感染结核分枝杆菌所致，尽早进行病原学检查对肺结核的诊断和化疗方案的制定具有指导意义。荧光PCR法是通过采用特异性荧光探针及结核分枝菌的特异性引物，使其与PCR反应液、4种脱氧核糖核酸苷酸、耐热DNA聚合酶配合，并用体外扩增法对结核杆菌的基因进行检测，因此具有较高的特异性。该项检测是以结核杆菌基因保守区段作为检测对象，因此不会受到耐药性及细胞表型的影响，因此阳性检出率高[2]。

T-SPOT是通过结核分枝杆菌的特异性抗原，刺激外周血单个核细胞（PBMC），然后利用细胞因子干扰素检测出抗原特异性T淋巴细胞的应答反应，从而判断患者的感染情况，为诊断肺结核提供依据[3]。本研究将两种检查方法结合，具有优势互补的作用。结果提示，荧光PCR法联合T-SPOT法在诊断肺结核中的准确率为93.07%，敏感度为97.92%，特异度为83.33%，均高于单一T-SPOT法。

综上所述，荧光PCR法联合T-SPOT法在诊断肺结核的准确率、特异度、敏感度较高，可将其作为临床首选诊断方法。