巨细胞病毒感染与自然流产及免疫细胞因子水平的关联性分析

周荣生 柯 旭

(合肥市第三人民医院妇产科，合肥230022)

人巨细胞病毒(Human cytomegalorirus,HCMV)是目前最为常见的造成孕妇及胎儿宫内感染的病毒，HCMV感染造成的危害较大，孕妇如在孕早期发现HCMV感染，则可能通过胎盘或产道感染胚胎，导致流产、早产、死胎、畸胎、新生儿发育迟缓、新生儿先天缺陷等等[1-3]。除巨细胞病毒以外，风疹病毒、弓形体、单纯疱疹病毒也是导致孕妇发生宫内感染的主要因素，但研究表明HCMV对胎儿造成的伤害比风疹病毒更严重[4,5]。因此，临床中HCMV感染已引起广泛重视，需要对孕妇的HCMV感染情况进行及时检测。文献报道，HCMV感染后会引发机体的免疫应答，而相关的细胞因子则是免疫应答中的关键调节者，对细胞因子的检测往往可以对感染性疾病进行有效评估，其中IL-1、IL-6和IFN是感染性疾病中较为重要的免疫相关因子[6，7]。为了探究HCMV感染与自然流产及免疫反应的关联性，我们采用PCR反应对稽留流产和正常妊娠孕妇的HCMV-DNA进行检测与对比，并对比HCMV感染孕妇与非感染孕妇血清中IL-1、IL-6和IFN的表达，现报道如下。

1 资料与方法

1.1临床资料 研究对象为我院收治的稽留流产孕妇89例和同期正常妊娠孕妇63例，其中稽留流产孕妇均符合第6版《妇产科学》中自然流产的诊断标准[8]。稽留流产组孕妇年龄为17～43岁，平均年龄(27.88±14.89)岁，妊娠时间为45～106 d，平均(76.23±29.77)d；正常妊娠组孕妇年龄为17～43岁，平均年龄(27.90±15.10)岁，妊娠时间为42～107 d，平均(75.32±31.68)d。两组的年龄与妊娠时间经比较无明显差异，具有可比性。

纳入标准：①稽留流产孕妇经临床各项检查，均符合第6版《妇产科学》中自然流产的诊断标准[8]；②孕妇生殖内分泌功能正常、无家族遗传性疾病、生殖器解剖功能正常；③孕妇及家属了解并配合本研究进行，自愿签署知情同意书。

排除标准：①合并有恶性肿瘤的孕妇；②孕妇因染色体异常、解剖结构异常、内分泌异常等因素造成流产；③孕妇因妊娠期服用有害药物导致流产；④孕妇患有精神疾病无法配合研究进行。

1.2方法 收集所有孕妇的外周血4 ml，平均置于2管中。一管用于HCMV-DNA的水平检测，另一管用于检测血清中免疫相关因子IL-1、IL-6、IFN的水平。检测HCMV-DNA水平，首先于外周血中加入溶血试剂，将红细胞破坏后经过蛋白酶消化，采用DNA酚氯仿抽提法提取孕妇的外周血DNA，随后应用聚合酶链式反应检测HCMV-DNA水平，全过程均按照PCR试剂盒说明书进行操作，PCR试剂盒购自TaKaRa公司。检测血清中炎性因子水平，采用ELISA检测血清IL-1、IL-6、IFN的表达水平，操作完全按照试剂盒的说明书进行，本研究所采用IL-1、IL-6、IFN的ELISA检测试剂盒均购自美国Genzyme公司。

2 结果

2.1稽留流产孕妇与正常妊娠孕妇HCMV感染情况比较 89例稽留流产孕妇中检查出29例HCMV感染阳性，阳性率32.58%，明显高于正常妊娠的孕妇63例(9.52%)，两组间差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2感染组与非感染组孕妇血清免疫相关因子IL-1、IL-6和IFN的表达水平比较 结果如表1所示，HCMV感染组患者的血清IFN、IL-1和IL-6水平均明显高于非感染组，两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。

2.3血清免疫相关因子IL-1、IL-6和IFN的表达水平与HCMV感染的Logistic回归分析 根据表2可知，分别针对两组孕妇的血清免疫相关因子IL-1、IL-6和IFN的表达水平与HCMV感染的Logistic回归分析，结果显示血清IFN、IL-1、IL-6的最大似然估计值和OR值均>0，则说明血清IFN、IL-1、IL-6水平与HCMV感染存在正相关，孕妇血清中的IFN、IL-1、IL-6表达水平越高，孕妇发生HCMV感染的概率越高。

2.4流产蜕膜绒毛组织镜检病理图示例 HCMV感染表达阳性的流产蜕膜绒毛组织镜检病理图示例如下：其中图1A组织取自蜕膜组织，可见组织中腺体呈高度分泌反应，部分腺体呈A-S样改变；图1B组织取自蜕膜组织，可见间质有中性粒细胞浸润；图2A组织取自绒毛组织，如图所示绒毛组织体积小，间质轻度水肿，周围滋养层细胞结节样增生；图2B组织取自绒毛组织，间质轻度水肿，周围滋养层细胞萎缩。图2C取自普通流产绒毛组织，镜下绒毛间质无出血及炎细胞浸润。

ItemInfectedgroup(n=35)Non-infectedgroup(n=117)tPIFN-α(ng/L)1.17±0.230.84±0.179.243 10.000 0IL-1(ng/L)35.42±15.246.78±2.7619.225 40.000 0IL-6(ng/L)156.38±33.9233.52±7.8836.288 30.000 0

表2 血清免疫相关因子IL-1、IL-6和IFN的表达水平与HCMV感染的Logistic回归分析

Tab.2 Logistic regression analysis of serum immune related factors IL-1,IL-6 and IFN expression levels and HCMV infection

ItembSE(b)Wald χ2ORPIFN1.9210.917.3622.2610.003 4IL-11.9580.897.1972.1320.001 9IL-62.0030.907.2262.1760.002 3

图1 蜕膜组织镜检病理图示Fig.1 Mortar tissue microscopy pathologyNote: A.Specimen is taken from the decidual tissue.The gland is highly secreted and some glands are A-S-like (HE staining,×10);B.Specimen is taken from decidual tissue interstitial neutrophil infiltration (HE staining,×40).

图2 绒毛组织镜检病理图示Fig.2 Villus tissue pathologyNote: A.Specimen is taken from villus tissue. Small volume of fluff tissue, interstitial mild edema, nodular cell hypertrophy (HE staining,×100);B.Specimen is taken from villus tissue. Mild interstitial edema, atrophy of surrounding trophoblast cells (HE staining,×200);C.Specimen is taken from normal villus tissue.No bleeding and inflammatory cell infiltration in the villus interstitial (HE staining,×20).

3 讨论

巨细胞病毒广泛存在于自然界中，种属特异性严格，其中能导致人类发病的巨细胞病毒称为人巨细胞病毒[1]。HCMV是一种B疱疹病毒，它的体积较大，长度约为240 kb，分子量约为150 kD[9]。研究报道HCMV是造成宫内胎儿感染的主要病原体，孕妇在妊娠的各时期感染HCMV均可以造成流产、早产、畸胎、死胎等不良的妊娠结局[10]。我国孕妇感染HCMV的阳性率近年来呈逐年增高的趋势，由于HCMV的感染往往为潜伏感染，大多孕妇感染后无临床症状，成为长时间携带病毒体[11]。因此，对孕妇的HCMV感染进行早期诊断具有重要的临床意义。目前，对HCMV感染进行诊断主要有以下几个方面，包括外周血、体液、分泌物等标本中进行病毒的分离培养，以及外周血HCMV-DNA的PCR检测，其中外周血HCMV-DNA的阳性表达被认为是早期诊断巨细胞病毒感染的有效指标[12]。

与风疹病毒、单纯疱疹病毒等病毒一样，一旦发生感染，HCMV会在宿主体内建立长期的潜伏，但如在正常人体内腺体潜伏，该感染并不危害人体健康，但对免疫低下个体如胎儿、艾滋病患者等均可造成严重损害，甚至威胁生命[13]。妊娠早期孕妇体内的激素水平会发生一系列改变，导致孕妇的免疫力降低，因此会增加其对HCMV感染等不良影响的敏感性[13]。有研究称孕妇若感染HCMV，HCMV将会播散至孕妇全身各脏器，进而通过胎盘伤害到胎儿，造成稽留流产或死胎等不良结局[13]。本研究中稽留流产孕妇的HCMV感染阳性率(14.52%)明显高于正常妊娠的孕妇(5.88%)支持了上述观点。目前，对于HCMV病毒感染所导致的自然流产、死胎、畸胎等不良妊娠结局尚无有效的治疗方案，临床中大多采用抗病毒感染药物如更昔洛韦，但会对孕妇造成一定的毒副作用，传统的减毒疫苗又因存在致癌性而无法在临床广泛应用[14，15]。因此，对孕妇加强妊娠期监测和早期诊断是尤为必要的，对有无HCMV感染进行及时检测，避免孕妇盲目保胎而发生自然流产，具有重要的临床意义。

Th细胞是一类均阳性表达CD4的T细胞，即CD4+T细胞。Th细胞又分为Th1和Th2细胞，Th1细胞主要分泌IL-2细胞因子发挥细胞免疫功能，促进T细胞的增殖与分化[15]。Th2细胞主要功能为刺激B细胞增殖并产生IgG1和IgE抗体，分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10等细胞因子调节体液免疫，上述因子的表达异常与体液免疫的异常密切相关[15]。而研究发现，CMV感染主要是通过引发减低Th1细胞免疫功能，从而抑制机体免疫调节。临床检测结果显示CMV-IgM阳性患者的血清中IL-2因子水平较正常孕妇显著降低，说明患者的免疫功能受到抑制，进而导致一些具有抗CMV功能的淋巴因子减少[15]。IFN是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子，是一组具有多种功能的活性蛋白质(主要是糖蛋白)，它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。其主要是通过细胞产生的抗病毒蛋白抑制病毒复制，而并不直接杀伤病毒，除此之外 IFN还可增强NK细胞、巨噬细胞和T细胞的活力，并起到免疫调节作用，从而增强抗病毒能力，故本研究中HCMV感染组患者的血清IFN高达(1.17±0.23)ng/L，高于正常妊娠组的孕妇。

IL是多种细胞产生能作用于多种细胞的一类细胞因子，其中IL-1主要由活化的单核巨噬细胞产生，主要生物学功能是协同刺激T细胞活化，促进B细胞增殖和分泌抗体；IL-6主要由单核巨噬细胞、Th2细胞等细胞产生，能够作用于巨噬细胞、活化的B细胞及浆细胞等多种靶细胞，IL-6具有刺激B细胞增殖、增加抗体生成、刺激T细胞增殖、增强IL-1的致有丝分裂作用等生物学功能。而CMV感染主要是影响Th1细胞的免疫功能，能够抑制Th1细胞产生IL-2的产生，但是对IL-6及IL-1的产生影响甚微。故HCMV感染组患者的血清IL-1和IL-6水平均明显高于非感染组。

本研究中，针对两组孕妇的血清炎症因子IL-1和IL-6的表达水平与HCMV感染的Logistic回归分析，结果显示血清IFN、IL-1、IL-6的最大似然估计值和OR值均>0，则说明血清IFN、IL-1、IL-6水平与HCMV感染存在正相关，孕妇血清中的IFN、IL-1、IL-6表达水平越高，孕妇发生HCMV感染的概率越高，同时因为HCMV感染会增加流产概率，故本研究猜测IFN、IL-1及IL-6水平与致流产存在相关性。但是，本研究未得到IFN、IL-1及IL-6提示流产发生的危机值，这也为下一步研究提供了新方向。

综上所述，孕妇发生HCMV感染可以增加胚胎感染的风险，进而导致自然流产的发生，而IL-1、IL-6和IFN等免疫反应因子与HCMV感染的病理过程密切相关，可以作为孕妇HCMV感染的辅助血清检测指标。