不同品牌火腿肠中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

陈蕊　赵克丽　雷佳丽　周利沙　周毅　林松　常向彩

摘 要：本文采用鉴别培养基、十六种葡萄球菌生化鉴定管、药物敏感性试验等方法，对七种不同品牌火腿肠中的金黄色葡萄球菌进行了分离鉴定和耐药性分析，并通过PetrifilmTM测试片法对样品中存在的金黄色葡萄球菌含量进行测定。试验结果显示，分离得到的金黄色葡萄球菌对克林霉素、呋喃唑酮、多粘霉素 B、万古菌素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、麦迪霉素、米诺环素、多西环素、四环素、新霉素等12种抗生素具有较高的敏感性，而对氯霉素、复方新诺明、红霉素等3种抗生素耐药。本研究可对金黄色葡萄球菌中毒后的临床合理用药和保障火腿肠等肉制品的食品安全提供一定的参考。

关键词：金黄色葡萄球菌;分离培养;生化鉴定;耐药性

火腿肠是人们生活中日常食品 [1]。有风险评估研究表明，火腿肠等肉制品从原料生产到消费者摄食过程中，被金黄色葡萄球菌及其肠毒素感染的概率都相对较高[2，3]，在中国，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件的报道屡有发生，仅次于副溶血性弧菌和变形杆菌，居第三位[4]。因此，火腿肠中加强金黄色葡萄球菌等病原微生物的检测就显得尤为重要。

1 材料与方法

1.1 试剂与设备

七种不同品牌种类的火腿肠购于安顺市某大型超市，均在保质期内。

7.5%的氯化钠肉汤培养基、Baird-Parker琼脂培养基、血琼脂平板培养基、十六种葡萄球菌生化鉴定管、PetrifilmTM测试片、革兰氏染液、30种成套药敏纸片、香柏油、75%的酒精，以上试剂均购于安顺开发区沃凯化玻公司。

DNA223B型电子分析天平（南京佰尼塔科技仪器有限公司，中国）、超净工作台（天津市泰斯特仪器有限公司，中国）、恒温培养箱（太仓市华美生化仪器公司，中国）、鼓风干燥箱（上海市博讯实业公司，中国）、立式压力蒸汽灭菌锅（上海市申安医疗器械厂，中国）、双三目显微镜（上海市缔伦光学仪器有限公司，中国）。

1.2 实验方法

1.2.1 增菌与分离培养

在超净台中对7个待测样品各取25 g并依次编号，37 ℃培养18～24 h，进行预增菌[5，6]。待增菌液呈浑浊生长后，分别划线接种于Baird-Parke平板和血平板上，放置在37 ℃左右恒温培养箱中培养18～48 h，观察菌落特征和是否出现β-溶血[7-9]。挑取血平板上的典型菌落于7.5%氯化钠肉汤培养基进行纯培养后，再次接种于血平板。

1.2.2 细菌鉴定与药敏试验

在无菌操作下，挑取Baird-Parke平板和血平板上的典型菌落进行涂片，革兰染色后镜检。挑取血平板上的典型菌落接种于生化鉴定管中[10-11]，恒温培养箱中37 ℃培养18～24 h。将纯培养后的菌液均匀涂布于Baird-Parke平板上，于37 ℃恒温培养箱中培养18～24 h[12-14]。

1.2.3 PetrifilmTM测试片法

将样品原液进行梯度稀释，取稀释后的样品液均匀滴加至PetrifilmTM测试片中，于37 ℃恒温培养箱中培养18～24 h[15-16]。

2 结果与分析

2.1 金黄色葡萄球菌的分离培养

接种培养23 h后，在血平板上的菌落特征一致且表现为圆形，白色凸起，有β-溶血。接种培养36 h后，在Baird-Parke平板的菌落表现为圆形，表面柔滑，挑取时呈黏稠状，颜色为灰黑色，凸起边缘围绕着乳灰色圈。兩种平板上的菌落特征与GB 4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》中所描述的金黄色葡萄球菌的菌落形态一致，可初步推测该菌为金黄色葡萄球菌。

2.2 金黄色葡萄球菌的镜检

革兰氏染色镜检结果显示，细菌排列整齐，堆积在一起，呈葡萄串状排列，与金黄色葡萄球菌在显微镜下的特点一致[17]。可初步判断七种不同品牌的火腿肠都含有金黄色葡萄球菌。镜检结果如图1所示。

2.3 金黄色葡萄球菌的生化鉴定

用接种针将金黄色葡萄球菌的疑似菌落分别接种于16种生化鉴定管中，经37 ℃恒温培养箱中培养23 h后，该菌能够分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖，并且产酸不产气、V-P试验、精氨酸双水解酶试验呈阳性。

2.4 耐药性分析

将培养皿置于37 ℃温箱中培养24 h

后，分离得到的金黄色葡萄球菌对克林霉素、呋喃唑酮、多粘霉素 B、万古菌素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、麦迪霉素、米诺环素、多西环素、四环素、新霉素等12种抗生素具有较高的敏感性，而对氯霉素、复方新诺明、红霉素等3种抗生素耐药（见表1）。

2.5 待测样品中金黄色葡萄球菌的含量

经检测，统计PetrifilmTM金黄色葡萄球菌测试结果显示，金黄色葡萄球菌最适稀释浓度为10倍，所采集的七种样本中均含有金黄色葡萄球菌，1-7号样品中菌落数量分别为620 CFU/g、560 CFU/g、1 190 CFU/g、480 CFU/g、870 CFU/g、2 850 CFU/g、3 040 CFU/g。

3 结论

本文通过鉴别培养基、革兰氏染色镜检和生化鉴定等方法对七种样品中疑似金葡菌进行了鉴定，结果显示，七种样品中的疑似菌均为金黄色葡萄球菌，耐药性试验结果显示，样品中分离得到的金黄色葡萄球菌对克林霉素、呋喃唑酮、多粘霉素 B、万古菌素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、麦迪霉素、米诺环素、多西环素、四环素、新霉素等12种抗生素具有较高的敏感性，而对氯霉素、复方新诺明、红霉素等3种抗生素耐药。因此，在临床上如遇到由金黄色葡萄球菌所引起的食源性疾病，应减少对红霉素、复方新诺明、氯霉素等3种抗生素的使用，而应该尽量使用金黄色葡萄球菌对其敏感的抗生素，如庆大霉素、苯唑西林等12种抗生素。本研究对金黄色葡萄球菌中毒后的临床合理用药和保障火腿肠等肉制品的食品安全提供一定的参考。

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