猪O型口蹄疫疫苗免疫程序优化

李志斌

摘要：为进行猪0型口蹄疫免疫程序优化，按母猪和肉猪进行分组试验，抽血检验其血液中0型口蹄疫抗体的S/N值，计算抗体的阳性率。对目前常用的免疫程序进行优化，结果：母猪1次免疫后的抗体保护时间为3.5～3.7个月，即每3.5～3.7个月进行1次普免;肉猪在37H龄前母源抗体能提供足够的免疫保护，首免后，免疫保护时间能维持到80日龄。即肉猪的首免为37日龄，二免为80日龄。根据生产情况需要，125日龄时进行三免。

关键词：口蹄疫疫苗;阳性率;口蹄疫抗体;免疫程序的优化

中图分类号：S858.28

文献标识码：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.09.002

0 引言

口蹄疫病毒为RNA病毒科中口蹄疫病毒属。病毒直径为20～25nm，呈圆形，无囊膜。内部为单股线状正义RNA，决定病毒的感染性和遗传性;外部为蛋白质，决定其抗原性、免疫性和血清学反应能力，并保护中央核糖核酸不受外界核糖核酸酶等因素的不利影响[1]。口蹄疫病毒具有多行性、易变异的特点。根据血清学特性，目前可认为有7个血清型，即A、0、C、SAT1（南非1型）、SAT2（南非2型）、SAT3（南非3型）及Asial型（亚洲I型）。我国主要流行0型和I型口蹄疫，偶有A型[2]。2012年，我国流行的泛亚变异毒与世界各地流行的0型口蹄疫被证明存在很大变异，该文预测在未来数年将可能形成大面积流行[3]。

目前，广泛使用的猪0型口蹄疫疫苗有灭活疫苗、基因工程疫苗、合成肽疫苗。研究表明，合成肽疫苗具有较好免疫原性，免疫副反应较小[4]。传统灭活疫苗是采用细胞培养病毒，加灭活剂和油佐剂混合乳化而成，在免疫中不良反应较大[5]。猪场母猪每年免疫3次，即每4个月免疫1次口蹄疫疫苗。肉猪分别在30、60、90日龄各免疫1次口蹄疫疫苗。

我国进行口蹄疫抗体监测的主要方法是正向间接血凝试验、液相阻断ELISA以及胶体金法，目前均有相应的商品化试剂盒供临床应用。

口蹄疫具有高度接触传染性，对畜牧业有巨大的负面影响，因此对口蹄疫的免疫预防要重点把握。目前病毒流行形势越来越严峻，生产上的需求越来越大，对口蹄疫免疫程序的优化就有更高要求，因此设计以下试验。

1 材料与方法

1.1试验动物与分组

试验分两条线选择猪。试验选择既定日龄的健康猪群（体质健壮、体重大小均匀，按程序常规免疫，饲养条件相同）。

（1）母猪：分成5组进行试验。选择1次普免前、1次普免后、2次普免前、2次普免后的健康猪群各30～40只。

（2）肉猪：分成7组进行试验。选择3s日龄未免疫、首免1周后、首免2周后、首免4周后、首免6周后、二免2周后、二免4周后的健康猪群各30～40只。

1.2试验疫苗与检验试剂

猪口蹄疫0型滅火疫苗（OZK/93+OR/80株），金宇保灵生物制品有限公司生产，规格：100mL/瓶，批号H110942J;检验试剂是韩国金诺VDPro FMDV-O型抗体检测试剂盒。

1.3试验材料采样与编号

1.3.1采样

①母猪：采取第1次普免前、第1次普免后、第2次普免前、第2次普免后的母猪血液3～5mL，各20份，共80份样品血清。②肉猪：采取35、42、49、63、78、93、116日龄的血液3～5mL，各20份，共140份血清样品。采得的血液样本放置于4℃保温箱中，0.5h后有血清析出，取另一试剂瓶保存血清，同样置于4℃保温箱。

1.3.2编号

按照试验要求做好标记和编号，如35日龄小猪首免前为1～20。

1.4试验检测流程

①使用前将试剂盒所有组件恢复到室温，取出抗原包被板;②标记样品、阳性对照和阴性对照（对照各做2孔），每孔加入样品稀释液80uL，然后加入样品血清，阴阳对照各20uL;③温事孵育60min;④洗板;每孔加入洗涤液300uL，洗涤3次，最后用吸水纸拍十;⑤每孔加入100uL酶标抗体，温室孵育60min;⑥重复步骤四，洗涤3次;⑦每孔加入TMB底物反应液100uL，温室暗处放置15min;⑧读数：每孔加入50uL终止液，在酶标仪450nm波长处读数。

1.5试验数据计算与判断

试验有效性判断及判定标准：①阴性对照OD值≥0.6;阳性对照OD值<0.3。②S/N值的计算方程式：S/N=[样品值/阴性值]。③S/N值<0.6时判为阳性;S/N值>0.6时判为阴性。

2试验结果

2.1母猪组

各阶段样品猪S/N值详细数据（随机抽取20份血清进行检测），见表1。阳性率和S/N值见图l。

2.2肉猪组

各阶段样品猪S/N值详细数据（随机抽取20份血清进行检测），见表2。阳性率和S/N值见图2。

3讨论

根据试验试剂说明书的判定标准，S/N值的数值大小与猪血清中抗体效价呈现负相关。因此，在合理范围内，S/N值越大，抗体的效价越低;反之，S/N值越小，抗体效价越高。

由于母源抗体不能一直保存在体内，因此在规模化养殖业中母猪的抗体来源通常是疫苗免疫。从图表中分析，每个免疫阶段的S/N值的差异都较大，抗体的阳性率上下波动。国家标准要求口蹄疫抗体保护率≥70%[6]。因此在阳性率降低至一定数值时，要开始进行免疫。在第1次普免前，猪群的S/N值为0.205，阳性率即保护率为73.25%，数值即将降到70%，这是上一次免疫的保护效果。随着时间增长，保护率逐渐减低。因此，要进行免疫。并非一定要70%的保护率才可以免疫，只要数值接近临界点就进行免疫，可避免养殖户承受更大风险。2018年4月11日第1次普免，根据测得的数据，第2次普免应该在7月25日左右，时间间隔为3.5个月。而通常猪场母猪的免疫次数为3次，即每4个月1次。

仔猪在出生一段时间内有母源抗体保护，因此在仔猪出生后的这段时间里不需要进行疫苗免疫。从图表中分析，猪群的抗体S/N值呈现逐渐上升趋势，阳性率则在一定的范围内上下波动。随着抗原水平下降，在35日龄时抗体阳性率下降至73.25%，此时开始准备免疫，在26～27日进行首次免疫保护。此后，通过检测数据可以分析，在首免后1周时抗体的阳性率达到100%，随时间推移，分析出在首免6周后，抗体阳性率降至74.88%，此时正进行第2次免疫保护，即在80～82日龄时进行第2次免疫保护。在第2次免疫2周后，抗体的阳性率达到100%。随时间推移，抗体阳性率下降至79.33%。按照这个抗体的衰减速度，可在110～112日龄进行第3次免疫保护。

4结论

（1）母猪组。常用的母猪口蹄疫免疫程序为每年免疫3次，即每4个月免疫1次。母猪每2次的免疫的时间间隔缩短到每3.5～3.7个月免疫1次。因此得出规模猪场的母猪免疫程序为每3.5～3.7个月免疫1次。

（2）肉猪组。猪场的免疫程序为30、60、90日龄各免疫1次，即出生后每1个月免疫1次。仔猪母源抗體的保护时间能达到37d，37日龄前后进行免疫。首免后保护时间能到达80日龄。因此规模猪场肉猪的免疫程序为37日龄进行首免，80日龄进行第2次免疫，观察生产情况是否需要第3次免疫，通常在125日龄左右进行。

参考文献

[1]陈溥言.兽医传染病学[M].北京：中国农业出版社，2006：73-75

[2]黄晓燕，郭吴，黄世品.生猪口蹄疫的抗体监测与免疫防制[J].畜牧兽医科技信息，2012（8）：69-70.

[3]高佃平.U蹄疫发展现状与防控措施[J].今日养猪业，2013（I）：28-29.

[4] 白挨泉，邵永昌，刘为民.猪O型U蹄疫合成肽疫曲与火活疫曲免疫效果比较[J].黑龙江斋牧兽医，2011（9）：131-133

[5] 杨志军，林焱，李光金，等。含T细胞表位和B细胞表位的抗O型FMDV基因T程疫曲诱导豚鼠产生免疫反应[J] 复旦学报（自然科学版），2000（5）：564-568

[6]黄卫平，程晓规模化养猪场仔猪口蹄疫免疫程序的制定[J]四川畜牧兽医，2012（10）：19-20.