榄香烯注射液配伍不同溶媒的稳定性变化探讨

宁 萍 饶晓黎 胡 玉

安徽省滁州市第一人民医院心胸外科 239000

榄香烯是从中药姜科植物温郁金(温莪术)的根茎中提取具有抗癌作用的活性有效成分，其制剂榄香烯注射液广泛用于临床，对多种癌症具有明显的抗肿瘤作用[1-4]。目前，榄香烯的基础药理研究已经较多，但临床使用过程中溶媒配伍禁忌方面无相关文献报道。临床上广泛使用的榄香烯制剂主要有口服乳剂及注射液乳剂，其中注射液说明书用法为静脉注射和胸腔灌注，但临床实际主要为静脉滴注用药，由于说明书未明确标注溶媒及溶媒量，因此在临床使用过程中可能对医护人员及处方医嘱审核人员造成一定困扰。本研究通过榄香烯注射液与临床常见4种溶媒配伍，后观察配伍溶液颜色与外观、pH值、不溶性微粒，以及使用HPLC测定β-榄香烯活性成分变化情况，为临床合理用药提供参考，同时也为药师审方提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 仪器 Agilent 1260型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，包括DAD紫外检测器和自动进样器；PHS-25 酸碱度测定计(上海盛磁仪器有限公司)；FA-2004电子天平(常州天之平仪器设备有限公司)；TDZ5-WS低速多管自动平衡离心机、TG16-W高速离心机(长沙维尔康湘鹰离心机有限公司)； SK40-120小型超声波清洗机(张家港市神科超声电子有限公司)。

1.2 试剂 β-榄香烯对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100268-201402，纯度99.4%)；榄香烯注射液(大连华立金港药业有限公司，规格20ml:0.1g，含β、γ、δ-榄香烯，批号：1707201)；5%葡萄糖注射液(安徽双鹤药业有限责任公司，规格：250ml:12.5g，批号：180526 3B)、10%葡萄糖注射液(安徽双鹤药业有限责任公司，规格：250ml:25g，批号：171212 9Q)、0.9%氯化钠注射液(安徽双鹤药业有限责任公司，规格：250ml:2.25g，批号：180502 12K)、5%葡萄糖氯化钠注射液(安徽双鹤药业有限责任公司，规格：250ml:12.5g:2.25g，批号：180730 4C)；甲醇(南京化学试剂股份有限公司)色谱纯、乙腈(天津科密欧试剂有限公司)色谱纯；超纯水(院检验科提供)；其余试剂为分析纯。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件。色谱柱：symmetry C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈∶水=88∶12；检测波长：210nm；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；进样量：10μl；色谱工作站：Agilent ChemStation。

1.3.2 试剂配制。精密称取β-榄香烯对照品108.71mg，移至10ml容量瓶并使用甲醇定容，摇匀，制作成10.81mg/ml的对照品溶液。取榄香烯注射液样品2ml置于10ml容量瓶中加甲醇适量并超声处理，最后定容至刻度，摇匀并过滤，即得1mg/ml的供试品溶液。根据临床常用榄香烯注射液用药浓度，取榄香烯注射液2支共40ml分别加入5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖氯化钠注射液各250ml，配置成榄香烯注射液0.80mg/ml的4种配伍溶液。

1.4 观察指标 榄香烯注射液分别与5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖氯化钠注射液配伍，室温下放置6h，分别在0h、2h、4h、6h观察溶液颜色与外观、pH值，以及使用HPLC测定β-榄香烯活性成分变化情况。

2 结果

2.1 配伍后颜色外观变化 将1.3.2项中配置的4种榄香烯注射液溶液室温条件放置6h，并分别观察0、2、4、6h时4种溶液的外观及颜色，用比色管观察颜色变化，结果表明6h内榄香烯注射液4种配伍溶液外观呈乳白色且无明显变化，无沉淀及气泡生成。

2.2 配伍后pH值变化 将1.3.2项中配置的4种榄香烯注射液溶液使用PHS-25 pH测定计检测pH值，测定结果见表1，结果表明4种榄香烯注射液溶液6h内pH值变化无明显差异。

表1 榄香烯注射液4种溶液配伍不同时间pH变化

2.3 方法学考察

2.3.1 线性回归方程。精密量取β-榄香烯对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.5ml、2.0ml置于10ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，分别制成溶度分别为0.22mg/ml、0.43mg/ml、0.86mg/ml、1.62mg/ml、2.16mg/ml的对照品溶液，根据1.3.1项色谱条件测定峰面积，制备标准曲线。以β-榄香烯峰面积Y作为横坐标，β-榄香烯的浓度C作为纵坐标，计算β-榄香烯线性回归方程和相关系数r，绘制β-榄香烯标准曲线得为Y=5.766 420 12×106C-7.512 54×104(r=0.996 8),结果表明β-榄香烯在浓度为0.22～2.16mg/ml范围内线性关系良好。

2.3.2 专属性实验。取对照品溶液1ml置于10ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，再分别取上述溶液和供试品溶液各10μl,按照1.3.1项色谱条件检测，结果显示β-榄香烯对照品和榄香烯注射液供试品主峰处未见其他峰干扰，专属性良好，结果见图1。

2.3.3 精密度实验。根据2.3.1线性回归方程中β-榄香烯对照品溶液配置方法，配置得0.86mg/ml的β-榄香烯对照品溶液，按照1.3.1项色谱条件进行检测，重复进样5次，测定峰面积，RSD为0.92%(n=5)，结果表明本法精密度良好。

2.4 配伍后活性成分含量变化 根据1.3.1项色谱条件测定2.1项中不同时间点的4种输液含量，记录峰面积并根据β-榄香烯标准曲线方程计算4种溶液中β-榄香烯的含量。以0h作为β-榄香烯100%含量比较其余时间点的含量变化情况，结果表明6h内4种榄香烯注射液配伍溶液相对含量变化无明显差异，具体结果见表2。

A

B

A：对照品溶液，B：供试品溶液，1： β-榄香烯主峰

表2 榄香烯注射液4种溶液配伍不同时间含量变化(%)

3 讨论

临床用药溶媒的选择首先应参考药品说明书，大连华立金港药业有限公司生产的榄香烯注射液说明书中用法用量为静注及胸腹腔灌注，均未明确标注溶媒及体积，查阅相关书籍提示榄香烯注射液可溶于20%脂肪乳注射液150ml及0.9%氯化钠注射液300～400ml中静脉滴注[5]，中国药典临床用药须知中标明榄香烯注射液除可使用以上2种溶媒外，还可溶于5%葡萄糖注射液300～400ml中进行静脉滴注[6-7]。临床使用榄香烯注射液过程中因直接静脉注射患者反映药液刺激性及静脉炎等不适，对直接静脉用药抵触较大。经统计我院2017年399例患者使用榄香烯注射液溶媒为0.9%氯化钠注射液占85%以上，溶媒量在100～250ml比例占90%以上，胸腹腔灌注使用方式比例较低约占2%。研究发现榄香烯单药或合并化疗药胸腔灌注治疗胸腔积液具有较好效果[8-9]，我院榄香烯胸腔灌注给药全部给药方式中比例较低，且在使用中应注意不良反应风险，应做好应对准备[10]。榄香烯乳注射剂治疗癌性胸水时应避免用利多卡因代替普鲁卡因注入胸腔内[11]。随着榄香烯注射液药物的广泛使用，其不良反应的报道逐渐增多[12-14]，主要涉及的不良反应累及器官包括皮肤附件、呼吸系统、循环系统、消化系统、神经系统及全身性损害，其中新的不良反应也开始报道[15]。我院2017年1月—2018年11月期间报道的榄香烯不良反应仅有7例，无严重不良反应发生，不良反应发生率为1.10%，且主要为静脉刺激、静脉炎等，其可能是由于榄香烯注射液直接静脉输注导致。本研究结果榄香烯注射液与4种常见溶液配伍后6h内颜色外观、pH值和含量无明显变化，结果可作为临床用药参考。临床发现榄香烯注射液配伍溶媒后使用,患者耐受性好、接受度高，临床使用不良反应减少。

目前，中药注射剂配伍稳定性研究报道较多[16-18]，但β-榄香烯注射液配伍研究较少。β-榄香烯药理作用明确且相关研究较多，但γ、δ-榄香烯未见相关研究报道，本研究中榄香烯注射液制剂中含有β、γ、δ-榄香烯等三种异构体，其中由于目前市售仅能提供β-榄香烯标准品，在溶媒配伍后含量测定考察中未能详细测定三者含量，因此研究还存在一定不足，还需进一步研究验证。