NRM411-S7化学发光分析仪检测NT-proBNP和cTnI的性能评价*

彭辉勇，汤新逸，王胜军，柳迎昭

(镇江市第一人民医院检验科，江苏镇江 212002)

当前我国心血管疾病的防控形势依然严峻，急性冠状动脉综合征(ACS)与心力衰竭(HF)等心血管疾病的发病率与致死率仍未得到有效控制,这对患者的生命和健康构成严重威胁，而早期诊断是降低病死率和改善预后的关键因素。因此，心肌损伤标志物检测的快速、准确、稳定对心血管疾病的诊疗具有重要的意义[1-2]。为了满足临床的需求，本院急诊检验科于2018年引进了NRM411-S7全自动化学发光分析仪，该分析仪使用荧光素增强免疫化学发光法检测待测样本中氨基末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度，其基本原理是包被异硫氰酸荧光素抗体的磁性微粒与待检样本及吖啶脂标记的特异性抗体孵育，形成抗原抗体夹心复合物，仪器自动进行磁性分离后，加入激发物质使复合物化学发光，通过光电倍增器测量发光强度，并根据仪器中的标准曲线转化成抗原浓度。根据美国临床实验室标准委员会指南(NCCLS)、ISO15189 CNAS-CL02：2012《医学实验室质量和能力认可准则》及《临床检验方法学评价》的要求[3-4]，本实验从精密度、正确度、携带污染率、最低检出限、线性范围、临床可报告范围及参考区间对NRM411-S7化学发光分析仪检测NT-proBNP和cTnI的分析性能进行验证和评价。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2018年8-10月镇江市第一人民医院住院和门急诊患者符合实验要求的样本，所有样本离心后均无明显溶血、脂血、黄疸等，于-20 ℃冻存用于验证实验。

1.2仪器与试剂 检测系统为NRM411-S7全自动化学发光分析仪及原装配套试剂、反应杯、清洗液、校准品及质控品等。

1.3方法

1.3.2正确度验证 参照NCCLS-EP15-A2文件[7]，采用测定定值标准品来评价正确度，选取NT-proBNP定标品浓度为331.00 pg/mL和18 647.00 pg/mL，cTnI定标品浓度为0.14 ng/mL和4.54 ng/mL。检测各个定标品，每个水平重复6次，记录实测均值并与定标品的定值比较，计算相对偏倚，相对偏倚小于允许误差范围的1/2(±15%)或厂家标识的要求(±10%)为评价合格。

1.3.5线性范围验证 参照NCCLS-EP6-A2文件[9]，根据厂家线性范围(NT-proBNP：20.00～35 000.00 pg/mL；cTnI：0.02～50.00 ng/mL)制备一份线性范围上限的H，NT-proBNP浓度为35 000.00 pg/mL，cTnI浓度为65.26 ng/mL。倍比稀释至线性范围下限左右，每个水平重复测定3次，将实测值与理论值作比较，计算公式Y=bX+a。另外选取临床血清H和L各1份，按5∶0、4∶1、3∶2、2∶3、1∶4、0∶5的比例混合，制备成6个浓度梯度的样本进行检测，将实测值与理论值作直线回归。

1.3.6临床可报告范围实验 参照NCCLS-EP6-A2文件[9]，L制备：将L样本用生理盐水进行稀释，得到接近线性范围下限的5个浓度水平样本，cTnI分别为0.00、0.02、0.04、0.06、0.08 ng/mL；NT-proBNP分别为0.00、10.00、20.00、30.00、40.00 pg/mL。重复测定10次，计算CV值，CV小于10%的浓度为可报范围下限。H制备：将H(NT-proBNP：70 000.00 pg/mL、cTnI：97.00 ng/mL)用生理盐水稀释到浓度接近于线性范围的上1/3区域内，记录稀释倍数，重复测定3次，记录原始数据，计算回收百分比(R值)。R=(实测值-理论值)/理论值×100%。R小于15%的稀释倍数为超过线性范围上限样本的最大稀释倍数。

1.3.7参考区间验证 参照NCCLS-C28-A2文件[10]，选取40位健康志愿者，年龄<75岁和≥75岁各20例，临床体征基本正常，心电图、实验室指标均正常，排除心脑血管及肾脏等方面疾病，进行NT-proBNP和cTnI测定，对结果进行统计分析。项目参考区间的评价：如果20例参考个体中不超过2例(或10%的结果)的观察值在验证的参考区间之外，则认为该参考区间可以接受。若2例以上超出界限，再选20例参考个体进行验证，若少于或等于2个观察值超过验证的参考区间，则可以接受。若有2个以上观察值超过验证的参考区间，应重新检查分析条件，决定实验室是否需要自行建立参考区间。

1.4统计学处理 采用Excel和GraphPad进行数据处理，SPSS17.0软件进行统计学分析。相关性分析采用Pearson线性相关，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1精密度验证实验 NRM411-S7测定的NT-proBNP和cTnI H、L批内和中间测定值及不精密度结果见表1、2，均符合厂家标识的要求，通过验证。

表1 NT-proBNP批内和中间精密度验证

2.2正确度验证实验 本次实验采用测定定标品的方法评价各个检测项目的正确度。将实测均值与厂家提供的定标品定值相比较，计算相对偏倚。结果显示，各项目各浓度水平的偏倚程度均小于厂家标识的要求，通过验证，见表3。

2.3携带污染率实验 NT-proBNP的H对L的携带污染率和L对H的携带污染率分别为1.10%和-2.40%；cTnI的H对L的携带污染率和L对H的携带污染率分别为-3.70%和-3.30%。结果均在厂家标识的±10%范围内，表明仪器运行时样本之间无交叉污染，可以连续检测样本。

表2 cTnI批内和中间精密度验证

表3 定值标准品正确度验证

表4 NT-proBNP和cTnI最低检测限实验结果

2.5线性范围验证实验 不同倍比稀释比例NT-proBNP测定结果与理论值比较的直线方程为Y=0.944 5X+107.79，r2=0.999 5，P<0.05,见图1A。提示NT-proBNP浓度在20.00～35 000.00 pg/mL范围内线性良好。不同倍比稀释比例cTnI测定结果与理论值比较的直线方程为Y=1.019X-0.04，r2=0.999 9，P<0.05,见图1B。提示cTnI浓度在0.02～65.26 ng/mL范围内线性良好。6个系列浓度的临床样本测定结果见表5，NT-proBNP线性方程Y=1.024 4X+15.899，r2=0.996 2，P<0.05；cTnI线性方程Y=1.020 3X+0.359 4，r2=0.988 3，P<0.05。

2.6临床可报告范围实验 NT-proBNP临床可报范围下限为20.00 pg/mL，此浓度下CV为7.11%(≤10%)，超过检测范围上限的临床样本最大稀释倍数为2倍，R值为7.13%(≤15%)。cTnI临床可报范围下限为0.02 ng/mL，此浓度下CV为8.26%(≤10%)，超过检测范围上限的临床样本最大稀释倍数为2倍，R值为7.17%(≤15%)，见表6、7。

表5 6个系列浓度临床样本测定结果

2.7参考区间验证实验 本实验验证厂家提供的参考区间，各项目参考区间及验证结果显示NT-proBNP中≥75岁(653.01 pg/mL)和cTnI中(0.13 ng/mL)各有1例超出参考区间，其余各项目测量结果均在参考区间范围内，符合率不低于95%，表明该参考区间适用于本实验室，故采用0～0.10 ng/mL作为cTnI的参考区间；0～110.00 pg/mL和0～589.00 pg/mL分别作为NT-proBNP中<75岁和≥75岁的参考区间。

注：A表示NRM44-S7测定血清NT-proBNP线性范围;B表示NRM44-S7测定血清cTnI的线性范围

图1NRM44-S7测定血清NT-proBNP和cTnI的线性范围

表6 临床可报范围低限验证结果

注：CV1表示本仪器NT-proBNP的CV；CV2表示本仪器cTnI的CV；CV3表示厂商设定的CV

表7 稀释度验证结果

注：R=|(还原浓度-理论值)|/理论值×100%(即回收百分比)，R1值表示NT-proBNP 的回收百分比，R2值表示cTnI的回收百分比；判断标准为R值小于方法性能标示的CV值为可接受界值

3 讨 论

NRM411-S7全自动化学发光仪由全自动反应系统和化学发光测定系统组成。前者是通过温育和磁分离的方式将吖啶酯类发光标志物间接特异的结合到固相载体上的过程，后者是发光标志物在酸性环境突然变为碱性环境时，受到过氧化氢发出最大发射波长为430 nm的光子后被光电倍增管捕获的过程。本仪器检测的NT-proBNP可读取到pg/mL，cTnI可读取到ng/mL。与医院其他同类检测仪器相比(如贝克曼库尔特UniCelDxI 800免疫分析仪、雷度AQT90免疫分析仪及博适Triage免疫分析仪等)，NRM411-S7全自动化学发光仪具有操作简单、检测速度快、加样量小、成本低、全程无污染、抗干扰能力强等特点。该仪器检测样本量仅需100 μL，样本类型可以是血清或血浆，无需检测前准备，受溶血、脂血、黄疸干扰小，整个检测过程仅需7 min，尤其适用于急诊检验[11-14]。

虽然厂家提供仪器的性能参数，但不同实验室环境间及操作人员存在差异，实验室在仪器使用前必须进行性能评价，这对检验结果起关键作用。本文依据美国《临床实验室改进法规修正案》详细评价了NRM411-S7化学发光分析仪检测NT-proBNP和cTnI的精密度、正确度、携带污染率、最低检出限、线性范围、临床可报范围、参考区间。

精密度代表测量的可重复性，是保证正确度的先决条件。对于送检的临床样本，实验室一般情况下只检测1次，因此，要求仪器的测量结果具有良好的精密度。本次实验结果显示NRM411-S7化学发光分析仪检测的NT-proBNP和cTnI的批内和中间不精密度结果均符合生产商标识的要求，且CLIA′88允许的误差范围内，说明该仪器具有较高的精密度和可重复性。

正确度是在一定实验条件下测定结果得到的平均值与接受参考值(约定真值)的符合程度，常用偏倚表示，偏倚小说明正确度高，偏倚大说明正确度低。本次实验结果显示无论低值还是高值标准品，NT-proBNP和cTnI的测定均值与约定真值的偏倚均小于10%，表明该仪器正确度性能符合要求。

携带污染率是指不同浓度样本间连续测定的相互影响，包括高浓度样本对低浓度样本和低浓度样本对高浓度样本的污染程度[15]。本次实验结果显示NT-proBNP和cTnI测定的携带污染率均在厂家标识范围内，表明该仪器具有较好的加样系统和自洁系统，能够避免交叉污染，可以连续测量样本。

最低检出限是检测系统可检测出的最低分析物浓度，主要反应仪器敏感程度，本次结果显示NT-proBNP可检测到8.30 pg/mL，cTnI可检测到0.02 ng/mL，均小于厂家标识的最低检出限，表明该仪器检测灵敏度好。临床可报告范围实验结果显示NT-proBNP和cTnI可报告范围低限分别为20.00 pg/mL和0.02 ng/mL，高浓度样本进行稀释检测的最大稀释倍数为2倍。

线性范围是反映整个系统输出特性的指标[16]，包括两种类型范围，即分析测量范围和临床可报范围。生产商提供的NT-proBNP浓度范围为20.00～35 000.00 pg/mL，cTnI浓度范围为0.02～50.00 ng/mL。实验室在对仪器进行线性范围验证时，测量的样本浓度间距应尽可能相等，本实验选用倍比稀释样本和等间距系列浓度样本，通过对检测浓度与实际浓度的线性回归分析发现，NRM411-S7化学发光分析仪在厂家提供的浓度范围内具有良好的线性。

由于各实验室环境、仪器、试剂及地域人群等方面有所差异，实验室在仪器使用前需要对生产商提供的参考区间进行方法学验证，本次验证结果显示NT-proBNP中，75岁以下患者的符合率为100%，75岁以上的符合率为95%，cTnI的符合率为100%，表明生产商提供的参考区间适用于本实验室，故可以直接使用。此外，在使用生产商提供的参考区间还需考虑建立该参考区间所选的样本可能会受性别、年龄、种族等因素影响，必要时实验室建立自己的参考区间[16]。

4 结 论

NRM411-S7化学发光分析仪检测NT-proBNP和cTnI的方法学性能良好，精密度、准确度、携带污染率、最低检出限、线性范围及参考区间均符合临床检验要求。此外，该仪器检测速度快，所需样本量少，尤其适用于急诊检验。