基于安全用药考察局方至宝丸中可溶性砷盐的含量

王 芍，许苗苗，王舒懿，谢志民

0 引言

中药急救有三宝，“乒乒乓乓紫雪丹、不声不响至宝丹、稀里糊涂牛黄丸”口口诵传，其中的至宝丹就是局方至宝丸，对于昏迷伴发热，不声不响即神智不清的温病感染性和传染性疾病的患者，具有良好的效果。局方至宝丸由水牛角、人工牛黄、玳瑁、琥珀、麝香、安息香、朱砂、雄黄、冰片组成[1]，其中雄黄作为局方至宝丸的佐药，主要成分是As2S2，中国药典规定雄黄中的As2S2含量不得低于90.0%[2]，其不溶于水，在人的胃肠道中难以吸收，几乎没有毒性[3-4]。但药材中常含有水溶性的砷盐或As2O3，均为剧毒成分，故服用含雄黄的制剂，有毒副作用及导致砷中毒的报道[5-8]。目前雄黄的炮制，多采用机械化(球磨机)干法研磨，这种加工过程中所产生的热，不仅不能除去可溶性砷盐，还可能使As2S2因受热氧化成As2O3，或因锌、碳存在的情况下，还原成单质砷，增加了雄黄粉的毒性，是导致雄黄中毒的主要原因[9]。药典对雄黄和雄黄粉末中As2O3进行了限度规定，雄黄传统的和药典规定的炮制方法是水飞法，目的是为了减少雄黄粉末中水溶性砷盐或As2O3，以降低毒性。为了控制成药毒性，本实验研究雄黄中可溶性砷含量测定方法，作为局方至宝丸中雄黄的质量控制手段之一，为临床安全用药提供理论支持。

1 仪器和试药

1.1 仪器 原子吸收分光光度仪(Thermo iCE3000 SERIES)，超纯水机(Millipore Milli-Q)。

1.2 试药 硝酸(65%)为色谱纯级(Merck & Co Inc)，水为超纯水；盐酸、氢氧化钠、硼氢化钠、抗坏血酸、碘化钾等均为分析纯。砷元素标准溶液(GBW08611-15105，含量：1 000 μg/ml)，中国计量科学研究院。局方至宝丸(厂家：北京同仁堂制药厂，批号：3010201、3010203、3010204)。

2 方法与结果

2.1 仪器条件 采用氢化物发生-原子吸收法测定局方至宝丸中水溶性砷盐的含量，具体原子吸收仪器工作条件见表1。

2.2 对照品溶液的制备 精密量取1 ml砷单元素标准液(1 000 μg/ml)，置100 ml量瓶中，加2%盐酸稀释至刻度制成对照品储备液(100 ng/ml)。精密吸取储备液0、1、2、3、5、10 ml，分别置25 ml量瓶(聚乙烯)中，加2%盐酸稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(浓度分别为0、4、8、12、20、40 ng/ml)。

表1 原子吸收仪器条件

2.3 标准曲线的制备 精密吸取上述各浓度的对照品溶液各10 ml，分别置25 ml量瓶(聚乙烯)中，分别加1 ml 25%碘化钾溶液(临用前配制)，混匀，再加1 ml 10%抗坏血酸溶液(临用前配制)，混匀，用盐酸溶液(20→100)稀释至刻度，混匀，密塞，加热3 min(80 ℃水浴)，取出，放冷，作为砷对照品测定溶液0号(0 ng/ml)、1号(1.6 ng/ml)、2号(3.2 ng/ml)、3号(4.8 ng/ml)、4号(8 ng/ml)、5号(16 ng/ml)。取适量吸入氢化物发生器，以1%盐酸溶液为载液，含1%硼氰化钠和临用前配制的0.3%氢氧化钠溶液作为还原剂，惰性气体氩气为载气，测定193.7 nm波长处的吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，进行线性回归方程计算，得标准曲线Y=0.007 53X+0.009 3(r=0.995 5)。结果表明,砷元素对照品在0～16 ng/ml浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.4 仪器精密度考察 取上述对照品溶液1、3、5号，按照上述方法重复测定6次，计算变异系数。结果低、中、高3个浓度的测量RSD分别为6.67%、2.88%、2.55%，显示仪器精密度良好。

2.5 供试品溶液制备方法的考察 精密称取局方至宝丸(批号：3010201)与等量硅藻土混合粉末0.1 g共9份和硅藻土粉末50 mg 9份(作为每份样品的空白)，置具塞锥形瓶中，分别精密加入2%盐酸50 ml，按正交表L9(33)要求，以砷的测得量为指标，选取超声时间、加入的碘化钾量和抗坏血酸量为考察因素(表2)。

表2 正交实验因素水平表

取适量溶液吸入氢化物发生器，以1%盐酸溶液为载液，含1%硼氰化钠和临用前配制的0.3%氢氧化钠溶液作为还原剂，惰性气体氩气为载气，测定193.7 nm波长的吸光度值，结果见表3。进行分析处理，最佳提取方法为取供试品超声处理(功率240 W，频率40 kHz)30 min，离心10 min(3 500 r/min)，精密量取上清液2 ml，置100 ml聚乙烯量瓶中，加2%盐酸至刻度，摇匀，精密量取10 ml，置25 ml聚乙烯量瓶中，加25%碘化钾溶液1 ml，摇匀，再加10%1 ml抗坏血酸溶液，摇匀，用盐酸溶液(20→100)稀释至刻度，摇匀，密塞，置80 ℃水浴中加热3 min，取出，放冷。

2.6 重复性考察 精密称取局方至宝丸(批号：3010203)与等量硅藻土混合粉末6份，每份精密称取0.1 g，按照“2.5”项下优选方法测定水溶性砷的含量，6份样品测定结果的RSD为4.4%。结果表明本方法具有良好的重复性。

2.7 供试品溶液稳定性考察 取重复性1号供试品储备溶液，按上述方法制成供试品溶液，分别于0、1、2、4、8、12 h测定吸光度，计算变异系数，RSD为4.2%。结果表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.8 加样回收试验 精密称取局方至宝丸(批号：3010203)和硅藻土研匀的粉末50 mg，分别精密加入标准砷8、16、24 μg，置具塞锥形瓶中，分别精密加入2%盐酸50 ml，按照“2.5”项下优选方法制备供试品，并测定吸收值(见表4)，加样回收率为99.25%，RSD(n=9)为1.74%。

2.9 方法的检测限、定量限考察和样品测定 按响应值标准偏差和标准曲线斜率法计算检测限LOD=3.3 δ/S=6.2 μg/g、定量限LOQ=10 δ/S=18.8 μg/g。取3批局方至宝丸(批号：3010201、3010203、3010204)样品，按“2.5”项下优化方法制备样品，按“2.1”项下方法测定其水溶性砷的含量，结果见表5。

3 讨论

3.1 通过样品测定结果发现，局方至宝丸中可溶性砷含量偏高，分析原因可能是雄黄的炮制方法不当[10-11]，故笔者从药材市场买来雄黄药材，对其进行研磨和水飞两种方式炮制，并和市售的雄黄粉末共同作为样品，按照本实验优化的提取检测条件进行可溶性砷测定，结果显示，雄黄药材研磨粉末含量为1.87%，雄黄药材水飞粉末含量为0.51%，市售雄黄粉末含量为1.51%，水飞雄黄中可溶性砷的含量约为研磨成粉雄黄的1/3，同时市场上存在不按规范炮制的雄黄粉末。结果提示，炮制方法的不规范成为安全用药的一个风险点，警示我们应对成药中的可溶性砷进行测定，进而监督雄黄的正确炮制和投料，从而保证含雄黄制剂的安全性。

表3 供试品溶液制备方法的考察结果

表4 加样回收试验结果

表5 3批样品测定结果(mg/丸，n=3)

3.2 中成药以中药材为原料，运用现代制剂工艺加工而成，由于历史和使用人文环境的因素，传统中药不太注重对于不良反应的研究，说明书大多不完善[12]。局方至宝丸现行的说明书不良反应项为尚不明确，而依本实验的结果显示，砷中毒有可能成为其不良反应中的1项，特别是在小儿用药期间，由于小儿肝肾功能发育不全，应对其尿砷、血砷含量进行监控，达到中病即止，不要超范围、超剂量用药。同时对临床出现的不良反应加以统计分析，对其说明书要及时修订，补充和完善相关内容，为临床合理使用及药品的管理提供依据。

3.3 本实验存在的不足之处：影响中药安全性评价的因素很多，如中药作用多途径、化学成分繁多，有效成分不明确，配伍多样性，作用机制和毒理机制的复杂性，这些都制约了中药走出国门，被世界所认可，但是中药经历了数千年的临床实践，有效性真实存在，故找出影响中药安全性的物质基础是当务之急。本次实验只是对局方至宝丸中有害成分-可溶性砷的总量进行了测定，由于实验条件环境的限制，没有进行体内外模拟实验，没有对服用局方至宝丸的患者进行血砷和尿砷的测定，无法反映局方至宝丸中可溶性砷盐在人体的吸收分布和代谢情况。本实验数据可以为日后局方至宝丸的临床用药评价提供数据支持，促进其安全用药。