新会陈皮质量控制研究

2019-10-10张怀陈明权农根林何风雷覃仁安

中国医药导报 2019年21期

张怀陈明权农根林何风雷覃仁安

[摘要] 目的建立新会陈皮质量控制方法。方法高效液相色谱法（HPLC）色谱条件为Atlantis T3-C18色谱柱（4.6 mm×250.0 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.5%醋酸水系统，以流速1.0 mL/min进行梯度洗脱。检测波长为283 nm和330 nm，测定46批次不同产地、不同采收时间、不同陈化时间新会陈皮的橙皮苷、川陈皮素、橘皮素含量。计算比值范围，并对陈化年份和3种化合物含量进行Pearson相关性分析。结果橙皮苷含量≥2.56%，川陈皮素含量≥0.27%，橘皮素含量≥0.18%，3种黄酮类化合物含量的比值范围为100∶（7.58～22.09）∶（4.89～14.55）。陈化年份和橙皮苷、川陈皮素之间没有相关性，陈化年份和橘皮素呈负相关（r = -0.345，P < 0.05）;橙皮苷、川陈皮素、橘皮素三者含量之间存在正相关性（r = 0.544、0.581、0.873，均P < 0.01）。结论这3种化合物的限量标准及比值范围能有效地控制新会陈皮的质量。

[关键词] 新会陈皮;质量控制;橙皮苷;川陈皮素;橘皮素

[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2019）07（c）-0120-05

Quality control research of Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium

ZHANG Huai CHEN Mingquan NONG Genlin HE Fenglei QIN Ren′an

Guangzhou Baiyunshan Chenliji Pharmaceutical Co.， Ltd.， Guangdong Province， Guangzhou 510288， China

[Abstract] Objective To establish the quality control method of Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium. Methods The chromatographic conditions of high performance liquid chromatography （HPLC） were Atlantis T3-C18 column （4.6 mm × 250.0 mm， 5 μm）， and mobile phase was acetonitrile-0.5% acetic acid water system， gradient elution was at a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 283 nm and 330 nm. The contents of hesperidin， nobiletin and tangeretin in 46 batches of Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium with different origins， different harvesting time and different aging time were detected. The ratio range was calculated. Pearson correlation analysis was performed on the aged years and the contents of the three compounds. Results The hesperidin content was not less than 2.56%， the nobiletin content was not less than 0.27%， and the tangeretin content was not less than 0.18%， and the ratio range of the three flavonoids was 100∶（7.58-22.09）∶（4.89-14.55）. There was no correlation between the aging of aging and hesperidin or nobiletin. The age of aging was negatively correlated with hesperidin （r = -0.345， P < 0.05）; there was a positive correlation among hesperidin， nobiletin and tangeretin （r = 0.544， 0.581， 0.873， all P < 0.01）. Conclusion The limited standards and ratio ranges of these three compounds could control the quality of Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium effectively.

[Key words] Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium; Quality control; Hesperidin; Nobiletin; Tangeretin

陈皮（Citri Reticulatae Pericarpium）为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮，具有理气健脾、燥湿化痰的功效，用于脘腹胀满、食少吐泻、咳嗽痰多等症状[1]。药材分为“陈皮”和“广陈皮”[2]，广陈皮是茶枝柑Citrus reticulata ‘Chachi的干燥成熟果皮，主要产于广东新会，以新会陈皮为道地药材。陈皮中含有黄酮[3-5]、多糖[6-8]、挥发油[9-11]等，其黄酮类成分有2个类型：一类是黄酮苷类成分，如橙皮苷、柚皮苷等;另一类是多氧甲基黄酮类，主要有川陈皮素、橘皮素、3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮等[12-15]。现代药理作用和临床研究表明，陈皮黄酮有抗氧化、抗肿瘤、抗炎等生理作用[16-19]。《中华人民共和国药典》（2015版，以下简称《中国药典》）中以橙皮苷含量不得少于3.5%作为陈皮质量控制指標。本研究及文献资料中发现，部分新会陈皮橙皮苷含量达不到《中国药典》标准，但质量优于其他产地陈皮，然而只测定橙皮苷含量无法全面反映新会陈皮的质量标准。因此，本研究选取黄酮类成分中含量较多的橙皮苷、川陈皮素、橘皮素作为指标，对46批不同产地、不同采收时间、不同陈化年份的新会陈皮药材进行测定。初步制订3种指标性成分的含量范围及比例范围，并对其陈化年份和3种化合物含量之间进行相关性分析，为新会陈皮质量控制的研究提供一定的参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200高效液相色谱议;Atlantis T3-C18色谱柱（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）;DAD检测器;Millpore simplicity-67120型超纯水器;BS110S型十万分之一电子分析天平（德国赛多利斯公司）;WXJ型粉碎机（上海凯旋中药机械制造有限公司）;KQ-100DV超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

对照品橙皮苷（中国食品药品检定研究院，纯度96.1%，110721-201617）;对照品川陈皮素（成都莱宝科技有限公司，纯度98%，AF7122105）;橘皮素（成都莱宝科技有限公司，纯度98%，AF8012603）;各批次陈皮由广州白云山陈李济药厂有限公司农根林药师鉴定为茶枝柑的干燥成熟果皮;乙腈色谱纯（Fisher公司）;甲醇和冰乙酸分析纯（广州化学试剂厂）;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。46批新会陈皮样品信息见表1。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Atlantis T3-C18（4.6 mm×250.0 mm，5 μm），流速1.0 mL/min;柱温30℃;进样量10 μL;检测波长283 nm（0～30 min），330 nm（30～60 min）;梯度洗脱条件见表2。混合对照品（A）和供试品（B）溶液高效液相色谱法（HPLC）色谱图见图1。

2.2 供试品溶液的制备

取陈皮样品粉末0.50 g（过80目筛），精密称定。置100 mL锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量。超声提取30 min，放冷至室温，补足失重。静置后取上清液过0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 对照品溶液的制备

分别精密称取橙皮苷、川陈皮素、橘皮素适量对照品，加甲醇溶解。配成每1 mL含橙皮苷0.1537 mg、川陈皮素0.0520 mg、橘皮素0.0364 mg的混合对照品溶液，4℃保存备用。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取上述混合对照品溶液1、2、5、10、15、20 μL，按“2.1”项色谱条件进样分析，以各成分峰面积Y为纵坐标、进样量X（μg）为横坐标，绘制标准曲线并计算回归方程。分别得到橙皮苷（283 nm）[Y = 28.995X + 0.08（r = 0.9998）]、川陈皮素（330 nm）[Y = 34.5X + 0.1467（r = 0.9999）]、橘皮素（330 nm）[Y = 44.258X + 0.09（r = 0.9999）]。线性范围分别为0.1537～3.0740 μg、0.0520～1.0400 μg和0.0364～0.7280 μg。

2.5 精密度试验

精密吸取同1份混合对照品混合溶液10 μL，按“2.1”项色谱条件连续进样6次，测得峰面积积分值，计算相对标准偏差（RSD）。橙皮苷为1.20%，川陈皮素为0.94%，橘皮素為0.85%，表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取同1份供试品溶液10 μL，分别在0、3、6、12、24、48 h按“2.1”项色谱条件进行测定，记录峰面积积分值，计算RSD值。橙皮苷为1.52%，川陈皮素为1.09%，橘皮素为1.43%，表明供试品溶液在48 h内稳定。

2.7 重复性试验

精密称取同1供试样品6份，按“2.2”项方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进行分析，测得峰面积积分值。分别代入“2.4”项回归方程，计算含量和RSD值。结果橙皮苷、川产皮素、橘皮素的RSD值分别为1.72%、1.65%、1.34%，表明方法重复性良好。

2.8 加样回收试验

取同1批已知3种化合物含量的广陈皮样品9份，每份约0.25 g，精密称定，分成三组。分别按已知质量分数的50%、100%、150%，3个水平加入混合对照品，按供“2.2”项试品溶液制备方法制备，按“2.1”项色谱条件进行分析。测定橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的含量，计算回收率和RSD值。见表3。

2.9 样品测定

取不同产地、不同采收时间、不同贮藏年份新会陈皮样品，按“2.2”项方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进行分析，测得峰面积积分值。代入“2.4”项回归方程，分别计算3种化合物的含量，并计算三者比例。见表4。

2.10 相关性分析

利用SPSS 19.0对46批次新会陈皮样品的陈化年份和橙皮苷、川陈皮素、橘皮素3种化合物含量之间进行Pearson相关性分析。结果见表5。陈化年份和橙皮苷、川陈皮素没有相关性，陈化年份和橘皮素呈负相关（P < 0.05）;橙皮苷、川陈皮素、橘皮素三者含量之间存在正相关性（均P < 0.01）。

3 讨论

根据表4中数据可以得出新会陈皮橙皮苷≥2.56%，川陈皮素≥0.27%，橘皮素≥0.18%，3种化合物含量的比例在100：（7.58～22.09）：（4.89～14.55）。参考钟永翠等[20]根据不同品种陈皮中3种黄酮类成分的含量比值，可以鉴别广陈皮道地性。结合本实验表5中，3种化合物之间具有显著的正相关性，该比例范围具有初步鉴定新会陈皮的作用。但是该范围是否能适用所有新会陈皮，还需要更多的新会陈皮和其他产地陈皮的研究数据进一步验证。

关于陈化年份与橙皮苷、川陈皮素、橘皮素3种化合物含量之间的相关性弱的问题，通过本实验并结合文献分析[21-23]，发现陈皮中这3种黄酮类化合物性质较稳定，陈化年份和陈化方式等因素对其含量的影响不大;不同批次样品的含量差异主要是由采收期不同产生的，3种化合物的含量变化均与成熟度呈一定规律：越成熟，含量越低。即青皮的含量最高，微红皮次之，大红皮含量最低。

本实验比较了甲醇-水系统和乙腈-水系统等系统。经过多次实验，最后采用乙腈-0.5%乙酸水溶液，梯度洗脱，各化合物都能取得良好的分离度，无拖尾。吸收波长在30 min处由283 nm变为330 nm，各化合物都在最大吸收波长处采集峰面积，计算含量，减少误差。

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