补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血负性造血调控因子的影响

丁 奇

（中国医科大学附属第一医院检验科，辽宁 沈阳 110001）

慢性再生障碍性贫血（以下均简称慢性再障）是指骨髓未能生产足够的或新的细胞来补充血液细胞，许多研究表明肿瘤坏死因子 （TNF-α）、γ-干扰素 （IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、转化生长因子-β （TGF-β） 为造血抑制因子，可抑制造血干细胞的分化、增殖，对造血起到负性调控作用，因此免疫发病机制研究是慢性再障的关键［1］。目前，西医采用环孢素、雄激素等免疫抑制剂来治疗，但长期服用此类药物会导致肝功能损害、男性化、牙龈增生、多毛症等不良反应，从而影响患者的生活及工作质量，更甚者会继发肿瘤。慢性再障中医致病，不外三因，“内因”系情致饮食所伤，多与“肝”“脾”相关；“外因”咎于外感邪毒，多为直中；“不内外因”在慢性再障则见于“先天”“药毒”所伤。因此，中医药运用中医养肝护肝、补气益血的配方来健脾益肾，改善其不良反应，补髓生血颗粒以补肾为主，健脾为关键，肝排毒为使，炎症淤积为变量，辨证用药能有效抑制慢性再障患者骨髓TNF-α、IFN-γ mRNA表达，上调造血干细胞水平，并有利于造血功能恢复［2］。本研究针对慢性再障患者采用补肾中药补髓生血颗粒进行治疗，观察其临床疗效并探讨其发病机制。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年9月—2018年1月我院收治的慢性再障患者128例。所有患者按照随机数字表法分为2组。观察组63例，男29例，女34例；年龄8～66岁，平均35.13岁；病程5～33个月，平均（16.51±8.63） 个月。对照组65例，男32例，女33例；年龄7～62岁，平均38.20岁；病程6～32个月，平均（15.36±6.94）个月。2组基线资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究方案经我院伦理委员会讨论通过。

1.2 纳入标准 符合《血液病诊断及疗效标准》［3］及《中药新药临床研究指导原则（试行）》［4］中有关慢性再障的诊断标准；发病后经西医治疗6个月以上无效者；意识清楚，且愿意配合治疗者；患者及家属对本研究内容均知情同意等。

1.3 排除标准 对本研究药物过敏者或存在精神病患者；3个月内参加过或正在参加其他临床试验者；有严重不可控制出血或感染者；合并心、肝、肾等其他器官严重病变者等；妊娠、哺乳期妇女；资料不全，无法判定疗效者等。

1.4 治疗方法 对照组服用司坦唑醇片（广西南宁百会药业集团有限公司，国药准字H45020728，2 mg/片），每次1～2片，每日3次口服。观察组采用补髓生血颗粒（15 g/袋）治疗，主要成分：熟地黄、淫羊藿、巴戟天、鸡血藤、白花蛇舌草等；每次1袋，每日3次，饭后冲服。2组每个疗程为3个月，共治疗2个疗程。进行为期6个月的随访。

1.5 观察指标 （1）临床症状：参照《中药新药临床研究指导原则（试行）》，计分给予量化处理。临床见面色苍白、心悸气短、头晕乏力、潮热盗汗、口渴思饮、舌边尖红少津、形寒肢冷、食少便溏、舌体胖大边齿痕、苔白滑等症状。上述无症状记0分，轻度记1分，中度记2分，重度记3分，统计各症状总积分；全自动血细胞分析仪检测外周血象HB、WBC和PLT含量。（2）RTPCR方法检测慢性再障患者负性造血调控因子TNF-α与IFN-γ mRNA表达：治疗前后于髂前、后上棘上常规无菌抽取骨髓液，进行骨髓基质细胞的培养。将培养成功的骨髓基质细胞经过离心、分离、沉淀、干燥等步骤提取总RNA，并测定提取的总RNA量，通过RT-PCR测定TNF-α与IFN-γ mRNA的表达水平。

1.6 疗效评定标准 参照《血液病诊断及疗效标准》有关慢性再障的疗效判定标准。基本治愈：无出血和贫血症状，血红蛋白（HB）：女≥100 g/L，男≥120 g/L，白细胞 （WBC） ≥4×109个/L，血小板 （PLT） ≥80×109个/L，后走访6个月内无复发者。缓解：无出血和贫血症状，HB：女≥100 g/L，男≥120 g/L，WBC≥3.5×109个/L，PLT较治疗前出现一定程度增长，后走访3个月患者病情稳定或持续进步。明显进步：出血和贫血症状明显改善，无需输血，HB较治疗前1个月内常见值增长30 g/L以上，并维持3个月以上者。无效：经充分治疗后症状、血象未达到明显进步者。总有效率=（基本治愈+缓解+明显进步）例数/总例数×100%。

1.7 统计学方法 上述数据应用SPSS 20.0软件分析，计量资料与计数资料分别以（x±s）及%表示，组间比较分别采用t及 х2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组慢性再障患者临床疗效比较 观察组总有效率76.19%明显高于对照组61.54%，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表 1。

表1 2组慢性再障患者临床疗效比较 [例(%)]

2.2 2组慢性再障患者治疗前后外周血象及中医症状积分比较 治疗后2组外周血象WBC、HB、PLT含量均较治疗前明显升高，观察组显著高于对照组，2组中医症状积分较治疗前明显降低，观察组显著低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 2组慢性再障患者治疗前后外周血象变化及中医症状积分比较

表2 2组慢性再障患者治疗前后外周血象变化及中医症状积分比较

注：与治疗前比较，*P＜0.05；与治疗后对照组比较，△P＜0.05

组别 例数 时间观察组 63 治疗前WBC（×109/L） HB（g/L）2.08±0.26 65.09±18.53治疗后 3.98±1.01*△ 88.21±20.69*△对照组 65 治疗前 2.13±0.54 59.09±16.83治疗后 2.99±1.47* 71.44±23.84*组别 例数 时间 PLT（×109/L） 中医症状积分（分）观察组 63 治疗前 24.65±6.56 16.03±4.06治疗后 43.56±11.27* 7.34±3.07*△对照组 65 治疗前 22.31±7.44 14.74±4.12治疗后 36.36±11.46* 10.48±4.69*

2.3 2组慢性再障患者治疗前后骨髓TNF-α及IFN-γ mRNA表达水平比较 治疗后2组骨髓TNF-α及IFN-γ mRNA表达水平较治疗前均显著降低，且观察组降低幅度大于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 2组慢性再障患者治疗前后TNF-α及IFN-γmRNA表达水平比较

表3 2组慢性再障患者治疗前后TNF-α及IFN-γmRNA表达水平比较

注：与治疗前比较，*P＜0.05；与治疗后对照组比较，△P＜0.05

组别 例数 时间观察组 63 治疗前TNF-α mRNA IFN-γ mRNA 2.39±0.25 1.68±0.57治疗后 1.22±0.29*△ 0.42±0.11*△对照组 65 治疗前 2.41±0.21 1.69±0.51治疗后 1.38±0.24* 0.56±0.11*

3 讨论

体内TNF-α、IFN-γ是引起骨髓干细胞凋亡的直接因素。TNF-α是TNF系一重要的促炎症因子和免疫调节因子，其主要由单核巨噬细胞产生，正常情况下可通过和靶细胞膜结合，触发细胞内信号转导，进而诱导造血细胞凋亡衰老。慢性再障患者中的TNF-α含量明显高于正常人，因此可通过调节TNF-α表达水平来降低TNF-α含量。IFN-γ是免疫介导的负性造血调控因子，其可抑制正常骨髓细胞分化、增殖，对造血干细胞生长也具有抑制作用［5］。体外实验研究［6］证明，骨髓中的 IFN-γ 还可抑制人和鼠骨髓长期培养的原始细胞活性。

慢性再障属中医学“虚劳”“血证”的范畴，主要病因是肾虚，气血瘀积，脾胃虚化，肝脏藏毒，血气不同，临床表现为面色泛白、四肢无力等［7］。因此中医学者们采用辨证治疗或辨病治疗的方法，以“肾为本，脾为枢，肝为使，痰瘀为变”的次序进行治疗。中国医学科学院血液病研究所［8］研究称，补髓生血颗粒通过健脾益肾、扶正补气，有效增强了患者抵御外邪的能力，减少感染发生率，具有重要的临床意义。其主要由熟地黄、淫羊藿、巴戟天、鸡血藤、白花蛇舌草成分构成，熟地黄可滋阴养血，补肾填精；淫羊藿、巴戟天可补肾壮阳，强筋壮骨，生精补髓养血；鸡血藤可行血补血，舒经活络，是活血补血之品；白花蛇舌草可清热解毒，凉血利尿，按照君臣佐使全方共奏补肾养血、祛湿益脾、补气御邪的功效。现代药理研究［9-10］表明，熟地黄具有促进红系增殖的作用，并且能改善免疫功能；淫羊藿、巴戟天具有雄激素样的作用，可以促进造血细胞DNA的合成，对造血干细胞增殖分化，抑制凋亡有明显作用；鸡血藤能够明显提高红细胞，白细胞和血小板的水平，同时具有改善骨髓造血基质微环境的作用，作为活血化瘀中药，促进慢性再障脂肪化骨髓重建造血微环境，利于正常造血细胞的生长，增殖分化和成熟；白花蛇舌草使机体白细胞吞噬的能力增强。文章通过补髓生血颗粒的治疗发现观察组总有效率明显高于对照组；治疗后2组的症状积分及外周血象较治疗前明显改善，且观察组较对照组改善更为明显；骨髓负性造血调控因子TNF-α与IFN-γ mRNA表达水平均较治疗前有所下降，观察组较对照组明显降低，提示补髓生血颗粒通过下调慢性再障患者骨髓组织TNF-α及IFN-γ mRNA的表达情况来改善其外周血象及临床症状，且疗效显著。

综上，补髓生血颗粒通过下调TNF-α与IFN-γ mRNA来改善造血微环境，恢复骨髓造血功能，从而改良慢性再障患者临床症状及外周血象，提高其临床疗效。随着补髓生血颗粒对慢性再障患者影响的进一步深入研究，人们将会对细胞生命活动有更完全的认识，对慢性再障的防治将会更进一步。