吡虫啉高效液相色谱的分析

2019-09-23夏天韩耀宗

浙江农业科学 2019年9期

夏天，韩耀宗

(株洲市白蚁防治管理办公室，湖南株洲 412000)

吡虫啉(imidacloprid)是一种新型吡啶杂环广谱烟碱类杀虫剂[1]，其作用机理为抑制昆虫中枢神经系统中乙酰胆碱受体，使昆虫神经系统的正常传导受到阻断，进而使昆虫麻痹死亡[2]，具有内吸、胃毒和触杀特性[3-4]。以悬浮剂为剂型的农药制剂是水基性制剂中成本低、市场发展前景好、加工工艺成熟和可加工的农药活性成分多的新剂型，具有清洁生产对环境友好、低毒性和低刺激性、以水为介质成本低和不会发生易燃易爆的特点[5]。由于吡虫啉在土壤中作用缓慢，环境安全性高的特性，以悬浮剂为剂型的吡虫啉制剂目前广泛应用于白蚁防治工程[6-11]。在对吡虫啉悬浮剂的药剂分析中，侧重于对混配制剂的分析方法的研究[12-14]。吡虫啉原药的分析方法虽已有国标[15]，但对常用于白蚁防治工程中吡虫啉悬浮剂单一制剂的分析方法报道较少。本文的分析方法具有简便、快速，精密度和准确度高的特点，为药剂的质量控制及应用研究提供参考和帮助。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260 infinityⅡ型高效液相色谱仪；VWD紫外可变波长检测器；1260 infinityⅡ型四元泵；自动进样器；KQ-250TDE超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司OpenLAB CDS Chemstation工作站)；AUY220型分析天平(日本岛津公司)。

吡虫啉标准品(质量分数99.1%，上海市农药检定所)；针头过滤器(0.45 μm孔径有机膜)；乙腈(色谱纯)；15%吡虫啉悬浮剂试样(药剂厂家提供)。

1.2 液相色谱操作条件

色谱柱为Agilent 5 HC-C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈:水为70:30(V/V)；流量为1.0 mL·min-1；柱温25 ℃；进样体积5 μL；检测波长为270 nm；保留时间约3.07 min。

上述操作参数为本单位实验室最优化的操作要素。不同实验室可根据自身仪器特点，为获得最优结果，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。

1.3 测定方法

1.3.1 吡虫啉标准溶液的制备

用分析天平称取吡虫啉标准物质0.1 g(精确至0.000 2 g)，在分析天平中静置1 min后，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解稀释并定容至刻度，用移液管移取上述溶液10 mL于100 mL容量瓶中，用流动相定容于刻度，超声波清洗器超声溶解，冷却备用。

1.3.2 吡虫啉悬浮剂试样溶液的制备

根据已制备好的吡虫啉标准物质溶液质量浓度，得出吡虫啉标准物质的质量，计算吡虫啉悬浮剂有效成分理论含量，制备与吡虫啉标准物质溶液质量浓度相近的试样溶液的质量浓度，即用电子分析天平称取15%吡虫啉悬浮剂试样0.066 7 g(精确至0.000 2 g)，在分析天平中静置1 min后，置于100 mL容量瓶中，用流动相定容于刻度，用超声波清洗器超声10 min，冷却，用针头式过滤器过滤，置于进样瓶中。

1.3.3 测定

在上述1.2的仪器操作条件下，待液相色谱仪泵的压力和基线平稳后，连续注入数针吡虫啉标准物质溶液，待连续2针吡虫啉标准物质溶液的响应值相对变化小于1.5%后，按照吡虫啉标准物质溶液、吡虫啉悬浮剂试样溶液、吡虫啉悬浮剂试样溶液、吡虫啉标准物质溶液的顺序进行测定。

1.3.4 吡虫啉质量分数计算

将测得的2针吡虫啉悬浮剂试样溶液峰面积响应值和吡虫啉悬浮剂试样溶液前后2针的标准物质溶液的峰面积响应值进行平均，计算吡虫啉悬浮剂的质量分数。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 流动相

根据本试验自身条件，选用Agilent 5 HC-C18色谱柱，并依据吡虫啉的特性，选择水和乙腈作为流动相，分别选用水和乙腈体积比为40∶60、30∶70、20∶80、10∶90等4种条件进行测试，得出水∶乙腈体积比为30∶70时分离效果较好，出峰时间短。结果表明，吡虫啉约3.07 min出峰，灵敏度高，出峰时间短，基线平稳，峰形对称、尖锐。

2.1.2 检测波长

本实验室的高效液相色谱仪配置的是VWD检测器，不具备DAD检测器所具备的光谱扫描功能，查阅相关文献[12-14]，设定检测波长为270 nm。

2.2 线性关系的测定

根据本试验标准品溶液浓度和试样溶液浓度，配制具有浓度梯度的吡虫啉标准物质溶液，使其质量浓度分别为25、50、100、200、500 mg·L-1。按照1.2节仪器条件测定，以吡虫啉的质量浓度为横坐标，吡虫啉的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线(图1)，计算得出吡虫啉线性关系为y=22.976x+127.77，R2为0.999 7。结果表明，在所需测定的吡虫啉悬浮剂试样溶液浓度范围内，呈现出符合方法要求的线性关系。

图1 吡虫啉线性关系

2.3 精密度测定

按照1.3节测定方法分别对同一样品平行测定5次，测得15%吡虫啉悬浮剂质量分数分别为14.93%，15.09%，14.89%，14.90%，14.95%，标准偏差为0.081，变异系数为0.54%。该方法具有较好的精密度，符合试验要求。

2.4 准确度的测定

通过在已知含量的15%吡虫啉悬浮剂添加具有浓度梯度的吡虫啉标准物质溶液，测定本试验方法的回收率，以验证准确度是否符合试验要求，即通过在已知含量15%吡虫啉悬浮剂分别添加50、100、200 mg·L-1吡虫啉标准物质，进行5次平行测定，测定有效成分的含量，计算得出回收率。由表1可知，此方法回收率符合准确度的要求。