云南地区T-SPOT.TB检测技术斑点计数与涂阳肺结核病人排菌量的相关性研究

李才信 王霖 刘子龙 李晓琴 孟文卿

[摘要] 目的 探讨云南地区T-SPOT.TB检测技术斑点计数与涂阳肺结核病人排菌量的相关性。方法 方便选取云南地区300例T-SPOT.TB检测技术斑点计数与涂阳肺结核病人，进行排菌量的相关性分析，探讨血清T-spot检测技术在肺结核诊断中的特异性和敏感性。结果 活动性肺结核组观察到T细胞斑点为67.0（32.8，133.5），相比老年肺结核组5.0（1.0，18.5）。 结核组中位T细胞斑点为85.0（37.0，140.0），相比肺外结核组40.4（8.0，106.0））（P=0.001）要高。试者工作特性曲线（ROC曲线）分析显示，在活动性结核组中T-SPOT.TB的ROC曲线下面积（0.887）大于抗原A（0.874）和抗原B（0.868），以T细胞斑点数25.5为最佳边界值，活动性结核分枝杆菌感染与潜伏性结核分枝杆菌感染（简称潜伏性结核感染）的鉴别，敏感性和特异性分别为79.9%和79.4%。 结论 ①T细胞斑点数可反映体内的结核分枝杆菌负荷;②T-SPOT.TB在肺结核的诊断中具有较高的灵敏度和特异度。

[关键词] 云南地区;T-SPOT.TB检测技术;斑点计数;肺结核病人;排菌量;相关性

[中图分类号] R521          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2019）06（c）-0186-03

[Abstract] Objective To investigate the correlation between the spot count of T-SPOT.TB detection technology in Yunnan and the bacterial count of smear-positive pulmonary tuberculosis patients. Methods To convenient select the correlation between the T-SPOT.TB detection technique and the bacterial count of smear-positive pulmonary tuberculosis in 300 cases in Yunnan， and to explore the specificity and sensitivity of serum T-spot detection technology in the diagnosis of tuberculosis. Results T cell spots were observed in the active tuberculosis group at 67.0 （32.8， 133.5）， which was much higher than in the elderly tuberculosis group 5.0（1.0，18.5）（P=0.000）. The median T cell spot in the tuberculosis group was 85.0 （37.0， 140.0）， which was higher than the extrapulmonary tuberculosis group 40.4 （8.0， 106.0） （P=0.001）. The tester's operating characteristic curve （ROC curve） analysis showed that the area under the ROC curve of T-SPOT.TB in the active tuberculosis group （0.887） was larger than that of antigen A （0.874） and antigen B （0.868）， and the number of T cells was 25.5. For the optimal boundary value， the identification， sensitivity and specificity of active M. tuberculosis infection and latent M. tuberculosis infection （abbreviated as latent tuberculosis infection） were 79.9% and 79.4%， respectively. Conclusion 1.The number of T cell spots can reflect the Mycobacterium tuberculosis load in vivo; 2.T-SPOT.TB has higher sensitivity and specificity in the diagnosis of tuberculosis.

[Key words] Yunnan region; T-SPOT.TB detection technology; Spot count; Tuberculosis patients; Bacterial count; Correlation

結核病是由结核分枝杆菌（MycobacteriumTuberculosis， MTB）感染的一种病，流行范围广、危害程度高、造成死亡人数最多的一类慢性传染病。全世界每年约有900万新增结核病病人，死亡人数约150万。中国是全球结核病发病率最高的国家之一，排名世界第二。2010年，第五次全国结核病流行病学抽样调查，活动性肺结核499万例，涂片阳性肺结核72万例，细菌性肺结核129万例。因此，结核病的早期诊断和治疗是非常关键的。结核病诊断方法涂片显微镜具有较低的阳性率，分离培养法具有培养时间长的缺点，这2种方法是目前最准确、可靠的结核病诊断方法，其是通过从病人的分泌物、血液、体液和活检组织中检测或分离结核分枝杆菌来完成的。结核分枝杆菌感染的免疫检测结核菌素试验假阳性和假阴性高，结核抗体试验特异性和敏感性不高。

结核分枝杆菌能侵入人体的各组织和器官，同时对致病菌造成免疫损伤。免疫类型主要是T细胞介导的细胞免疫。人感染结核杆菌时，巨噬细胞的抗原呈递功能致T淋巴细胞敏化，产生INF-γ等淋巴因子，杀死结核杆菌。再感染时，记忆T淋巴被激活，分泌INF-γ，并细胞免疫。基于此发展起来的T细胞INF-γ释放试验是目前临床上检测结核病的血清学优选方法：通过检测免疫斑点的数量，可快速判断结核分枝杆菌的感染。T-spot.TB在辅助诊断结核感染中其诊断敏感性和特异性可高达96.60%和84.70%。该法有助于预防性抗结核治疗，斑点越多则发生活动性结核的可能性越大。报道如下。

1  对象与方法

1.1  研究对象

方便选取该院收治的300例疑似肺结核成人病人进行T-SPOT.TB结核病检查。根据诊断结果，将病人分为活动性肺结核组、老年性肺结核组和非肺结核组。

1.2  纳入和排除标准

入选标准：①18岁以上;②肺结核中毒症状：咳嗽、咯血、发热、盗汗等;③具有典型影像学表现：如空洞、树芽征象、结核结节、结核斑、胸膜等;④曾接触结核病人，治疗后好转。

排除标准：①无明确诊断;②没病因或组织病理学依据;③T-SPOT.TB或PPD结果不明确;④近3 d服抗结核药;①长期服用免疫抑制剂或心、脑、肺、肝肾功能障碍。

1.3  诊断和分组标准

诊断参照《中华人民共和国卫生行业结核病诊断标准》（ws288-2008）。①TB：病因或组织病理学明确诊断;改善了抗结核症状，改善了肺部CT成像。②陈旧性结核：病人有陈旧性肺结核病史，影像表现异常，无中毒症状，细菌学（痰涂片）检查阴性。③非结核病者：无密切接触结核病史;诊断为其他疾病，结核组织病理学阴性。

1.4  T-SPOT.TB结核病检测及结果

TB检测5 mL外周静脉血。结果： ①斑点计数，空白对照孔的斑点<10个，阳性对照孔的斑点>20个。实验可行。②T-SPOT.TB阳性标准：空白对照孔数为0～5 （抗原A或B孔数）-（空白对照孔数） 6以上时为阳性。空白對照孔数6～10个，（抗原A或B孔数）2以上（空白对照孔数）;结果阳性。③T-SPOT.TB阴性标准：质控阳性结果良好（20个斑点以上），但抗原A或B斑点不符合阳性。计算T细胞抗原A、B与空白对照孔差，得到最大值。

1.5  结核菌素皮肤试验（TST）

结核感染意味着人体已经感染了结核病，但体内的细菌受到人体强烈免疫力的抑制，细菌停止繁殖或处于“休眠”状态，因此感染者本身没有临床症状结核病，但这些受感染的人通过细胞介导的免疫系统产生对结核病的特异性免疫反应，这通常导致1～2个月的结核菌素（PPD）皮肤试验阳性。此时，胸部X线片在肺部未发现活动性肺结核，在细菌学检查中未发现结核病。结核病病人不会将疾病传染给他人，但一旦这些人的抵抗力（免疫力）下降，结核病仍可能发生。肺结核病人有明显结核病症状，如咳嗽和咳嗽两周以上，发热，体重减轻等，胸部X线片发现肺部活动性肺结核，痰细菌学检查发现肺结核细菌或其他病理检查已经有结核病灶，他们很可能将疾病传染给他人，特别是有抑菌（痰）的结核病病人。

1.6  统计方法

采用SPSS 10.0统计学软件对数据进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  各组病人年龄、性别分布情况的比较

在这项研究中，298（29%）活动性结核病，155名男性和143名女性，中位年龄为62.0岁。结核病330例（33%），男性180例，女性150例，中位年龄61.5岁。非结核病病人384例（38%），男性200例，女性184例，中位年龄59.0岁。方差分析和Kruskal-Wallis检验后，3组间性别和年龄差异无统计学意义（F= 0.001，P=0.971;χ2= 0.055，P=0.973），表明3组病人的性别和年龄分布不影响研究结果。

2.2  抗原A，抗原B和T-SPOT.TB的T细胞斑点数

各组的分布活动性TB组T细胞斑点的中位数为67.0（32.8，133.5），显着高于旧TB组的5.0（1.0，18.5）（P =0.000）;中位数为85.0（37.0，140.0），显着高于肺外结核组的40.4（8.0，106.0）（P=0.001）;组间重叠的T细胞斑点数。

3  讨论

肺结核病人在治疗中易由于细菌耐药性、服药自主性缺乏等因素影响，导致其转化为复治涂阳肺结核，加剧病人病情，增加治疗难度.临床中对于复治涂阳肺结核病人的治疗多采用多类药物联合治疗法，但易随着治疗时间的延长，增加细菌耐药性，影响治疗效果，且大部分病人需不断增加服药剂量以确保疗效，易引发各类毒副反应。

经研究所得：相较对照组，研究组治疗后肺部病灶及空洞治疗效果具有显著性优势（P>0.05）;且研究组病人治疗后毒副反应率明显低于对照组（P<0.05）。分析原因：卷曲霉素进入人体后可与核糖杆菌进行结合，可对结核病杆菌的形成起到有效抑制、阻断作用，控制其病情的发展;左氧氟沙星广谱抗菌药的应用可对结核杆菌的复治、转录作用起到较好的阻断作用，实现对细菌活性及数量的有效抑制，从而起到治疗的作用。两类药物的联合应用可配合常规治疗有效提升治疗效果，减少细菌数量，并通过药物使用剂量的维持或减少，降低细菌耐药性，进一步稳固疗效。综上所述，在临床中予以涂阳肺结核复治病人卷曲霉素、左氧氟沙星联合治疗，可有效促进病人肺部病变改善缓解，且安全性较高，值得在临床治疗中应用推广。该研究中T-SPOT.TB在活动性肺结核中的阴性预测值和阳性预测值分别为87.375%和68.241%，表明当T-SPOT.TB值为阴性时，对排除具有重要价值。

目前，临床上有大量肺外结核病人。由于起病隐匿，临床症状不典型，缺乏细菌学基础导致误诊，漏诊或无法确诊。结果表明，胸水T-SPOT.TB的敏感性高于外周血，胸水阳性细胞计数为外周血阳性细胞数的8到10倍。为了验证上述结论，将活动性TB组分为肺结核和肺外TB两个亚组。结果显示，肺外TB组（78.161%）小于肺TB组（91.000%），差异有统计学意义。因此，该研究证实肺结核组T-SPOT.TB阳性率高于肺外TB组。

综上所述，T细胞斑点数可反映体内的结核分枝杆菌负荷。T-SPOT.TB在肺结核的诊断中具有较高的灵敏度和特异度。

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（收稿日期：2019-03-21）