当归拈痛汤对高尿酸血症性肾病小鼠肾脏保护作用的研究*

李宇轩，李 笑，于学成，宋 林，张啸林，杨 昊，邵雨萌

山东中医药大学(济南250355)

高尿酸血症性肾病是由肾脏排泄尿酸过少或长期嘌呤代谢紊乱导致血尿酸升高，尿酸在血中过饱和而沉积于肾脏组织导致的肾损害。近年来由于人民饮食习惯的改变，高尿酸血症性肾病患者数量持续上升[1]。当前治疗高尿酸血症性肾病使用比较广泛的治疗药物包括抑制尿酸生成和促尿酸排泄药物两大类：选用药物如苯溴马隆、秋水仙碱等，但以上药物对肝肾功能的损伤不容忽视，停药后易反复[2]。高尿酸血症性肾病根据中医理论，其发病机制为患者先天禀赋不足或饮食不节致脾胃失和、恣欲损及肾元，先天之本俱伤而致肾失温化、脾失健运，进而津液运化失常、痰饮内停，湿热下注。痰湿阻滞气机，湿热浊邪，病涉血分[3]。当归拈痛汤载于《医学启源》，为金元时期所创千古名方，全方清热除湿不忘和血，苦寒渗利不伤脾胃，因此药证相对。已有相关研究证实当归拈痛汤对痛风性关节炎具有一定的治疗效果[4]。痛风性关节炎与高尿酸血症性肾病虽同为高尿酸血症并发症，但当归拈痛汤对高尿酸血症性肾病作用机理的研究仍较少。本实验将当归拈痛汤应用于高尿酸血症性肾病模型小鼠，旨在探讨其中医证候特点与作用机制，为增加本病临床治疗效果提供一定依据。

材料和方法

1 实验动物 雄性KM小鼠72只，体重(28±2)g，由山东鲁抗医药股份有限公司提供。许可证号：SCXK(鲁)20130001。

2 药物与试剂 当归拈痛汤：按照组方比例(羌活、茵陈蒿、当归各15 g，防风、知母、苍术、猪苓、泽泻各 9 g，白术、黄芩、升麻各3 g，葛根、苦参、党参各6 g，土茯苓40 g，甘草10 g)，提前浸泡，加水煎煮3次后混匀，旋蒸浓缩至0.25 g/ml的药液待用。乙胺丁醇，腺嘌呤，苯溴马隆。尿酸检测试剂盒(批号20180612)、尿素氮检测试剂盒(批号20180531)、肌酐检测试剂盒(批号20180608)、一氧化氮检测试剂盒(批号20180530)均为南京建成生物工程研究所生产。eNOS检测试剂盒(批号201805)，ET-1检测试剂盒(批号201805)，购自北京方程嘉鸿科技有限公司。

3 主要仪器 SC-3612型低速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司出品)，酶标仪(美国Thermo公司，型号Mulitiskan FC)，紫外分光光度计(上海元析仪器有限公司，型号UV-5200)。

4 模型制备 参照文献[5]，利用乙胺丁醇与腺嘌呤相结合的造模法制备高尿酸血症性肾病小鼠模型，将乙胺丁醇与腺嘌呤分别以100 mg/kg、250 mg/kg剂量，采用灌胃法给药，每天上午固定时间给造模药1次，每只小鼠按照体重给药，持续21 d后造成高尿酸血症性肾病动物模型。

5 实验方法 小鼠适应性饲养后，将其随机分为空白组、模型组、苯溴马隆组(20 mg/kg)、当归拈痛汤高、中、低剂量组。灌胃造模时间在上午的固定时间，持续 21 d。实验1～7 d固定时间给模型组、苯溴马隆组、当归拈痛汤各剂量组进行灌胃造模。自第8天起，下午固定时间进行当归拈痛汤高、中、低剂量组给药，分别给予38、19、9.5g/(kg·d) 当归拈痛汤药液，苯溴马隆组给予20 mg/(kg·d)，连续给药14 d.

6 观察指标 实验第22天，小鼠眼球取血，制备血清检测血尿酸、血尿素氮、血清肌酐、血清一氧化氮含量，eNOS水平，ET-1水平。

7 统计学方法 将检测结果通过 SPSS 22.0统计学软件分析，结果用均数±标准差表示，组内、组间参数方差齐性检验，单因素ANOVA分析，P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 一般情况 小鼠初分组情况相同，实验进行至3周后各实验组模型小鼠毛色暗淡，皮毛散乱，精神状况差。模型组BUA，CR，BUN水平显著上升(P<0.01)，造模成功。

2 模型小鼠尿酸代谢情况 BUA的水平 分析检测结果后，结果如表1所示，与模型组相比，当归拈痛汤与苯溴马隆均可显著降低小鼠血清尿酸含量，具有统计学差异(P<0.05)。

表1 各组小鼠BUA水平及XOD活性

注：与空白组比较，*P<0.05；与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，△P<0.05；与模型组比较，△△P<0.01

3 当归拈痛汤对肾功能及肾血管保护的效果

3.1 血清中CRE、BUN水平比较：如表2所示，造模后，与空白组进行比较，各组CRE、BUN水平显著上升(P<0.05)，当归拈痛汤各剂量组及苯溴马隆组均可降低血清CRE、BUN水平，起到保护肾功能的作用。

表2 各组小鼠血清中BUN、CR水平比较

注：与空白组比较，*P<0.05；与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，△P<0.05；与模型组比较，△△P<0.01；与苯 溴马隆组比较，▲P<0.05

3.2 血清中ET-1、eNOS、NO水平：制备高尿酸血症性肾病模型3周后，模型组小鼠NO、eNOS水平显著降低(P<0.01)，ET-1水平显著上升。当归拈痛汤各剂量组及苯溴马隆组相比模型组小鼠NO、eNOS水平显著上升(P<0.05)，ET-1水平显著下降(P<0.05)，见表3。

表3 各组小鼠血清中ET-1、eNOS、NO水平比较

注：与空白组比较，*P<0.05；与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，△P<0.05；与模型组比较，△△P<0.01；与苯 溴马隆组比较，▲P<0.05

讨 论

高尿酸血症性肾病作为高尿酸血症的主要并发症，临床表现为血尿酸过度升高，蛋白尿，夜尿增多，渗尿等，晚期可出现慢性肾功能不全[6-7]。近年来，随着人民饮食结构的改变，饮食中摄入嘌呤含量增多，发病率逐年上升。现代医学认为本病是由于尿酸排泄过少或体内嘌呤代谢紊乱，导致血尿酸过饱和，尿酸结晶沉积于各级肾小管和肾小球血管，形成局部病灶，如局部血管阻塞、萎缩、坏死，出现内皮细胞功能损伤，久之出现肾功能衰竭[8]。

高尿酸血症性肾病根据中医理论，其发病机制为患者先天禀赋不足或饮食不节致脾胃失和、恣欲损及肾元，先、后天之本俱伤而致肾失温化、脾失健运，进而津液运化失常、痰饮内停，湿热下注。痰湿阻滞气机，湿热浊邪，病涉血分。利用中医理论进行分析，采用当归拈痛汤药证相对。方中羌活、防风、升麻、葛根等风药以风胜湿，茵陈蒿清热利湿，当归、党参养血活血健脾益气，猪苓、泽泻清下焦湿热，黄芩、苦参、白术、苍术、知母清热燥湿，不耗阴津。综合全方，清热除湿不忘和血，苦寒渗利不伤脾胃，气血同调，寒热并用，内外兼治。这在理论上为当归拈痛汤治疗本病提供了理论依据。现代药理学研究证明本方药物有降低尿酸的作用，为治疗本病提供了药理学基础[9]。

现有研究证实，BUA含量与高尿酸血症性肾病预后呈负相关性[10]。在高尿酸血症状态下，BUA作为前炎症因子，尿酸沉积后，刺激局部引起炎症反应、氧化应激、细胞损害等，导致内皮细胞功能异常，肾脏损害[11]。本研究数据证明当归拈痛汤各剂量组可有效降低BUA含量，这为治疗本病提供了基础。同时，当归拈痛汤还可显著降低BUN、CRE含量。CRE和BUN是检测肾功能的敏感指标，本研究结果提示，当归拈痛汤在降低模型小鼠BUA含量的同时，起到保护小鼠肾脏功能的作用[12]。

已有研究人员发现，尿酸可以刺激内皮细胞，减少NO的产生，导致Ach诱导的血管舒张作用减弱，同时NO减少会增加ET-1释放[13]。ET为最强缩血管物质，可以加快内皮细胞功能损伤，引起肾小球内皮细胞和肾小管上皮细胞损伤，改变肾小球血流动力学，影响皮质肾血管收缩，形成肾小球病变损害[14]。其中源自eNOS的NO是维持肾血管低张力的必要调节剂，维持血管壁构型起到重要作用[15]。其中NO、eNOS、ET-1作为高尿酸血症性肾病内皮细胞损伤及肾功能损伤的关键因子，也是反映肾脏内皮细胞功能伤害及肾损伤进程的关键指标。本研究数据显示：当归拈痛汤各剂量组相比模型组eNOS、NO水平显著上升，ET-1水平显著下降，提示当归拈痛汤可以首先降低BUA含量，升高血中eNOS、NO水平，进而降低ET-1水平，最终来抑制肾脏内皮细胞功能损害进程，缓解肾脏功能损伤，这与BUN、CRE含量变化特点相一致，推测其为当归拈痛汤发挥肾脏保护功能的可能机制。

综上，当归拈痛汤可以通过降低BUA含量而升高血中eNOS、NO水平，进而降低ET-1水平，达到对肾脏组织内皮细胞及肾小球血管的保护，从而降低BUN、CRE含量。此为其对于高尿酸血症性肾病可能作用机制，本方其他的作用机制及相互作用有待进一步研究。