利用红外光谱法快速测定血竭中掺假松香的含量

廖嘉宝 张 鹏 谭 沛 王丽丽

华润三九医药股份有限公司 广东 深圳 515110

血竭市价昂贵，多有掺假情况，其中松香掺假是不法商家惯用手法。目前《中国药典》2015年版中，血竭质量标准中对松香的检测方法，其判断标准为石油醚层不得显绿色，但不法商家加入染料，对实验结果造成干扰，无法正确判断真伪，所以该方法有不合理之处。运用红外光谱对血竭进行分析，红外辐射通过固体中药样品时，将在不同波长处出现它们各自特有的吸收峰（带）强度的叠加，以波长或波数为横坐标，透过率或吸光度为纵坐标绘图，得到样品的特征吸收曲线为红外吸收光谱。以光谱的宏观形貌以及吸收峰的位置、强度和形状微观指纹来定性判断或鉴别样品之用。

1 实验部分

1.1 仪器设备：Spectrum 100光谱仪（PerkinElmer,Inc.），DTGS检测器，仪器分辨率优于4cm-1,基线噪声6000：1～2000：1，波数范围 4000～400cm-1，基线倾斜0.1%T～0.5%T，透过率准确度0.1%T，透过率重复性0.1%T～0.5%T，吸光度重复性＜0.005。

1.2 样品来源：血竭粉购于北京同仁堂（亳州）饮片有限责任公司，按2015年版《中国药典》鉴定。松香购于亳州药材市场，光谱纯溴化钾（KBr）购于四川自贡化工研究设计院。饮片血竭a、b、c分别购于深圳三家连锁药店、颗粒g为某厂家批号为403481T的血竭粉配方颗粒、颗粒f为某厂家批号为1210097的血竭粉配方颗粒。

1.3 样品制备：血竭及松香粉碎后过200目（74μm）筛，备用。精密称取血竭样品粉末和松香样品粉末，制备出 含 有 0.00%，10.00%，20.00%，30.00%，40.00%，50.00%，60.00%（质量百分比）松香的血竭（血竭+松香）样品系列，备用。

取3mg的待测样品与150mg的KBr碎晶置于玛瑙研钵中，磨细，并使其混合均匀。将研细混匀的粉末倾入13mm压片模具中，使其铺布均匀，加压至0.8～1GPa，保持1min，使用压片机将其压成圆形薄片，然后放入红外光谱仪样品支架进行测试。在扫描待测样品前，先用纯KBr按前述方法压制成薄片，按照与扫描待测样品相同的参数设置方式进行测试，得到光谱背景。接下来扫描待测样品的光谱时，仪器会自动进行背景扣除，得到待测样品的真实光谱。

2 结果

2.1 血竭饮片和掺伪松香的鉴别：由血竭的红外光谱图［图1（a）］可以看出，主要的吸收峰有：3329±2cm-1、2932±2cm-1、2850±2cm-1、1710±2cm-1、1605±2cm-1、1499±2cm-1、1451±2cm-1、1355±2cm-1、1268±2cm-1、1199±2cm-1、1176±2cm-1、1112±2cm-1、821±2cm-1、761±2cm-1和699±2cm-1。松香的红外光谱图［图1（b）］可以看出，主要的吸收峰有：2930±2cm-1、2867±2 cm-1、2650±2cm-1、2533±2cm-1、1693±2cm-1、1459±2cm-1、1385±2cm-1、1275±2cm-1、1183±2cm-1、1153±2 cm-1、947±2cm-1、896±2cm-1、830±2cm-1、715±2cm-1、664±2cm-1和543±2cm-1。

2.2 含量分析：这里特指中药血竭中掺松香的分析。分析时应谨慎选取血竭中某一个特征峰的强度以及松香中的某一个特征峰的强度为依据，利用这两个特征峰的相对强度可从预先做好的工作曲线得到含量的结果。谱峰强度和两特征峰的相对强度按基线法确定峰强度，相对峰强度法计算相对强度。

2.2.1 基线法确定峰强度：从待测样品的红外吸收光谱，所选择的特征谱带（见图2）波长d的谱强度。在谱带的两端画一切线(被称为基线)ac。计算分析波长d处的总吸光度为A，扣除基线以下噪声背景得谱峰的吸光度为A1。常以A1定义为谱峰的吸收强度。

图2 基线法画法举例

2.2.2 相对峰强度法：中药样品的相对峰强度计算法是指在同一张红外光谱图上选择两个特征峰，b1和b2，如图3所示分别读取两个峰的峰强度A11,A21。按下式计算这两个峰的强度比r。rb1/b2=A11/A21或rb2/b1=A21/A11。

图3 相对峰强度法画法举例

2.3 血竭药材中掺松香含量分析：分述如下。

2.3.1 工作曲线的绘制：确定血竭的主峰为1112cm-1［见图4（a）］，而松香的主峰为1693cm-1［见图4（h）］。由图可见，随着松香含量的增多，血竭主峰的相对强度逐渐下降而松香的主峰逐渐升高。按照基线法分别测得1112cm-1和1693cm-1处谱带的峰高吸光度值A1和A2，再求出这两个谱带的相对峰强比的值y（A1112/A1693）（见表1），经最小二乘法拟合得到相对峰强比与松香百分含量x的线性方程：y=0.0076x+0.2202，R2=0.9270。在相同实验条件下测量未知试样的红外光谱，确定相应两峰的强度及计算相对峰强度比，利用该工作曲线可确定未知的血竭药材中掺松香的含量。

图4 血竭中掺不同比例松香的红外光谱图

2.3.2 样品检测：对数批血竭配方颗粒及饮片进行红外光谱扫描，根据血竭及松香的特征峰判断是否有松香掺假现象，结果见图5。由图谱结果看，b、c、f、g均检出松香特征峰，其中药店购得血竭b和c与松香图谱相似度极高，松香特征峰明显，可见b、c两批药材是以大量松香充作血竭，血竭配方颗粒f、g掺有不同比例的松香，经峰强度计算可计算掺假比例分别为＜10%和23%。a药材未检出有松香。

3 讨论

采用红外光谱对血竭进行分析，不但可以鉴别是否掺杂松香，并且能通过某些特征谱带或特征峰的相对强度来确定样品中松香酸作半定量分析。经检测的血竭药材及配方颗粒红外图谱显示，目前血竭药材资源混乱，5批药材和配方颗粒中有4批有松香掺假情况，其中b、c两批药材掺假比例颇高，但依然在连锁药店中销售，可见质控水平急需提高，否则危害消费者的健康。目前所建立检测松香较为准确的方法多为HPLC、HPLC-DAD法等方法，但这些方法从时效、环保角度看并无优势，而红外光谱分析操作快速、简便，重现性好，所用试剂环保，可对样品作半定量分析，能满足快速检测血竭中掺假松香的需求。