发光免疫法联合无创产前DNA检测在唐氏综合征筛查中的应用价值

罗裕旋 曾科明 潘婷 卢静钿

[摘要]目的 探討化学发光法、无创产前DNA检测法在唐氏综合征（DS）筛查中的临床应用价值。方法 选取2017年1～ 12月来我院接受产前检查的120例孕妇，给予传统血清检查，比较传统血清检查、发光免疫法联合无创产前DNA检测在DS筛查中的诊断准确率。结果 120例中，颈项透明层（NT）异常（≥3 mm）孕妇102例，66例胎儿NT范围为3.0～4.0 mm，24例为>4.0～5.0 mm，10例为>5.0～6.0 mm，2例为>6.0 mm。全年4例终止妊娠。27例产前诊断，1～12月分别为1、1、6、1、3、6、3、0、1、3、0、2例，27例同时有其他器官异常，其中多发畸形12例，单脐动脉8例，腹裂3例，器官积液2例，心脏畸形2例。120例中，20例做羊水穿刺，1例21-三体综合征、1例18-三体综合征终止妊娠。免疫法联合无创产前DNA检测的准确率为100.00%，显著高于传统血清检查的33.33%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 化学发光法联合无创产前DNA检测法在DS筛查可提高检出率，降低假阳性率，利用无创产前DNA检测能减少因侵入性产前诊断而导致的流产风险，通过化学发光法检测血清甲胎蛋白（AFP）可发现开放性神经管缺陷。NT增厚提示胎儿畸形、流产、死胎的风险增加。

[关健词]孕妇;化学发光法;无创产前DNA检测;产前诊断

[中图分类号] R714.256          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2019）6（c）-0152-04

[Abstract] Objective To investigate the clinical application value of chemiluminescence method and non-invasive prenatal DNA detection method in Down′s screening. Methods A total of 120 pregnant women who came to our hospital for antenatal check-up during the period from January to December 2017 were given traditional serum tests. The diagnosis was compared with traditional serum test， luminescent immunoassay combined with non-invasive prenatal DNA test in Down′s screening. Accuracy. Results Of the 120 cases， 102 cases of pregnant women with NT abnormalities in the neck （≥3 mm）， 66 cases of fetal NT ranged from 3.0 to 4.0 mm， 24 cases of >4.0 to 5.0 mm， 10 cases of >5.0 to 6.0 mm， and 2 cases were >6.0 mm. 4 cases were terminated in the whole year. 27 cases of prenatal diagnosis， 1， 1， 6， 1， 3， 6， 3， 0， 1， 3， 0， 2 cases， 27 cases from January to December. There were other organ abnormalities， including 12 cases of multiple malformations， 8 cases of single umbilical artery， 3 cases of abdominal fissure， 2 cases of organ effusion， and 2 cases of cardiac malformation. Of the 120 cases， 20 were amniocentesis， 1 was 21-trisomy， and 1 was 18-trisomy terminate pregnancy. The accuracy of immunization combined with non-invasive prenatal DNA testing was 100.00%， which was significantly higher than that of traditional serum test （33.33%）， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion Chemiluminescence combined with non-invasive prenatal DNA testing can improve the detection rate and reduce the false positive rate in Down′s screening. The use of non-invasive prenatal DNA testing can reduce the risk of miscarriage associated with abortion caused by invasive prenatal diagnosis. Open neural tube defects can be detected by chemiluminescence by detecting serum alpha-fetoprotein （AFP）. NT thickening suggests an increased risk of fetal malformation， miscarriage， and stillbirth.

[Key words] Pregnant women; Chemiluminescence; Non-invasive prenatal DNA testing; Prenatal diagnosis

唐氏综合征即21-三体综合征（trisomy 21 syndrome）又称先天愚型或Down综合征（DS），是最早被确定的染色体病[1]。一旦患儿出生给家庭和社会带来沉重的负担，为了降低患儿的出生率，唯一方法是进行产前筛查和产前诊断[2-3]。DS不仅对患儿自身的生长发育带来严重影响，同时也给患儿家庭带来沉重的负担。随着DS产前筛查工作不断普及，越来越多的高危孕妇被筛查确诊，大大提升了优生率。以往临床上多采用有创方式检查，如羊膜穿刺、绒毛取样术等，但有创检查给胎儿及孕妇带来一定的风险，临床并不提倡。随着DNA技术的发展，基因检测技术逐渐普及，在不同领域中均有涉及。化学发光法联合无创产前DNA检测法在DS患者中的检查效果非常理想，本研究就化学发光法联合无创产前DNA检测法与传统DS筛查方式的检查效果进行比较，现报道如下。

1资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1～12月我院DS筛查（包括早唐及中唐）120例孕妇作为研究对象，而且给予孕早期DS筛查。全部孕妇均为单胎，年龄平均（27.45±4.23）岁;平均孕龄（12.28±2.69）周。给予全部孕妇行颈项透明层（NT）测量，并进行DS筛查，统计妊娠结局。

1.2纳入与排除标准

纳入标准：①单胎妊娠者;②年龄<35岁者;③孕龄15～20周孕妇;④自愿参加本研究者;⑤参与者知情同意，本研究经医院医学伦理委员会审核批准。排除标准：①不符合上述纳入标准者;②人工受精及试管婴儿孕妇;③既往有不良孕产史的孕妇;④严重精神疾病患者。

1.3方法

传统血清筛查：抽取孕妇空腹静脉血3 ml，不进行抗凝处理，室温下保存，时间为30 min，3000 r/min，离心10 min，分离血清，若样本过多可将样本放置在冰箱中保存。采用二联法对血清进行检测。

发光免疫法联合无创产前DNA检测：抽取孕妇3 ml静脉血，清晨，空腹，采用化学发光方法，早期DS筛查检测血清中妊娠相关血浆蛋白A（PAPP-A）、游离人绒毛膜促性腺激素（F-HCG）和中期DS筛查检测血清中甲胎蛋白（AFP）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）、游离雌三醇（uE3）的浓度水平，且结合孕妇年龄、孕龄、体重等情况进行风险率评估。早期DS篩查采用罗氏电化学发光仪，试剂、质控品为德国罗氏公司提供;中期DS筛查采用贝克曼酶免发光仪，试剂、质控品为美国贝克曼公司提供;无创产前DNA检测采用华大无创胎儿染色体非整倍体检测技术。结合孕妇是否吸烟、是否有糖尿病、单胎、末次月经时间、孕龄、年龄、体重等情况进行风险测量，颈项透明层（NT）计算风险系数。NT测量方法：利用常规超声进行厚度测量，在长轴矢状面实施测量，测量过程中确保胎头、脊柱处于同一水平线，放大倍数调节至胎儿躯体占屏幕大小的3/4左右，测量点放置于两条高回声线的内侧缘进行测量，这两条高回声线分别代表皮肤回声及颈椎表面软组织回声，其间部分即为颈部透明带[4-5]。另外，针对高龄、不良孕产史等孕妇，在孕妇允许下行羊水穿刺检查，并且分析染色体核型。

1.4观察指标及评价标准

①检查NT。对正常胎儿，其NT厚度具有正态分布特点，其厚度与孕龄间具有紧密观察，孕龄增加，其厚度也会随之增加。换而言之，胎儿头臀长度变长，则厚度也随之变厚[7]。但厚度需要控制在一定范围，不然则为异常。本研究认为≥3 mm是异常。②DS筛查。Cutoff值若超过1∶380则，认为DS高风险;若超过1∶334则认为18三体高风险[8-9]。比较两种检查方法的诊断准确率，所有结果均由标本检测医师和患者主治医师负责调查、整理、记录。准确率（%）=（阳性-假阳性）例数/阳性例数×100%。

1.5统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件处理数据，等级资料用秩和检验;计量资料用（x±s）表示，用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1发光免疫法联合无创产前DNA检测产前诊断及妊娠结局

120例中，NT异常（≥3 mm）孕妇102例，66例胎儿NT范围为3.0～4.0 mm，24例为>4.0～5.0 mm，10例为>5.0～6.0 mm，2例为>6.0 mm。提示我院NT异常主要集中在3.0～4.0 mm。全年4例终止妊娠。102例NT异常（≥3 mm）孕妇，1例21-三体综合征、1例18-三体综合征终止妊娠，NT正常孕妇中胎儿无影响，比较差异有统计学意义（P<0.05）（表1）。

2.2发光免疫法联合无创产前DNA检测产前诊断情况

27例产前诊断，1～12月分别为1、1、6、1、3、6、3、0、1、3、0、2例，27例同时有其他器官异常，其中多发畸形为12例，单脐动脉为8例，腹裂为3例，器官积液为2例，心脏畸形为2例。

2.3发光免疫法联合无创产前DNA检测DS筛查及染色体检查情况

120例中，20例做羊水穿刺，1例21-三体综合征、1例18-三体综合征终止妊娠。

2.4两种检查诊断准确率的比较

传统血清检查在Ds筛查中阳性例数、假阳性例数分别为30、20例，准确率为33.33%;发光免疫法联合无创产前DNA检测20、0例，准确率为100.00%。免疫法联合无创产前DNA检测的准确率为100.00%，显著高于传统血清检查的33.33%，差异有统计学意义（P<0.05）。

3讨论

AFP属于胎儿时期数量较多的血清蛋白，通常情况下，在妊娠中，少量AFP能进入到母体中，进而显著提高妊娠女性的AFP，并且持续到分娩后两周。该种血清蛋白在分娩后2周消失，恢复到正常人水平，约20 μg/L[10]。研究表明，妊娠高血压综合征孕妇全身发生小动脉痉挛，可造成胎儿分泌的AFP通过血压流量进入母体的量明显下降[11]。国内学者研究表明，AFP在胎儿生长受限预测中，具有较高的敏感度，然而特异度较低[12]。在精卵过程中，胎盘合体滋养细胞开始合成HCG，子痫前期患者血HCG显著升高，减少细胞外基质中胶原组织的降解，间接抑制滋养细胞对子宫蜕膜和血管壁的侵蚀，进而造成胎盘浅着床，致使出现子痫前期。据报道，早孕期较低的h-HCG与产妇风险因素等联合，能有效预测早发型子痫前期发病风险。然而国内有的学者认为，孕中期h-HCG不能预测子痫前期[13]。

以往临床上多采用孕中期血清检查的方式对DS进行筛查，该方法非常方便、费用低廉，在临床上非常受到欢迎，使用率非常高。而这种方式对孕妇的年龄、体重、孕龄条件要求较高，很容易受到上述因素的影响，仅适合妊娠15～21周的孕妇，对此阶段外的孕妇并不适合。这种方法并不适用于年龄>35岁、曾经有过染色体异常的孕妇，该检测方法的阳性预测值非常低，大大降低了疾病的诊断准确率。由于血清检查的假阳性率过高，孕妇要承受的心理压力也非常大，要寻求一种更适合的检测方法，降低DS的漏诊率和假阳性率。产前无创基因诊断是指采用不刺激孕妇子宫获取胎儿遗传物质，并对其进行遗传分析的诊断方式。产前无创基因诊断是利用母体外周血中游离胎儿DNA，并对其扩增，达到检测目的。其中母体外周血中游离胎儿DNA在妊娠4周时即可得到检测，母体外周血中游离胎儿DNA含量会随着妊娠时间的延长而增加，在妊娠7周时达到稳定水平，该方法有无创、快捷、诊断率高的特点，在临床上的使用率逐渐升高。本研究结果显示，无创产前基因检测技术在DS筛查准确率明显高于传统的筛查方式。本研究结果显示，产前无创基因筛查虽然能提高升诊断率。传统血清检查准确率为33.33%，发光免疫法联合无创产前DNA检测准确率为100.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。

NT是预测胎儿异常及心脏畸形的有效指标，能在孕早期检查胎儿异常情况。据报道，NT越厚，胎儿染色体异常率越大。各个年龄段的孕妇均可能生育DS患儿，对以高龄妊娠和DS高风险为指征的孕妇，有必要开展产前诊断[14-15]。120例中，NT异常（≥3 mm）孕妇102例，66例胎儿NT范围为3.0～4.0 mm，24例为>4.0～5.0 mm，10例为>5.0～6.0 mm，2例>6.0 mm。这提示本研究NT异常主要集中在3.0 ～4.0 mm。全年4例终止妊娠。102例NT异常（≥3 mm）孕妇，1例21-三体综合征、1例18-三体综合征终止妊娠，NT正常孕妇中胎儿无影响，差异有统计学意义（P<0.05）。这提示NT 作为一个良好的无创性产前筛查手段，给胎儿染色体病的早期诊断提供了可能。27例产前诊断，1～12月分别为1、1、6、1、3、6、3、0、1、3、0、2例，27例同时有其他器官异常，其中多发畸形为12例，单脐动脉为8例，腹裂为3例，器官积液为2例，心脏畸形为2例。120例中，20例做羊水穿刺，1例21-三体综合征、1例18-三体综合征终止妊娠。提示，NT孕早期DS筛查是产前检查的重要内容，对于预测胎儿异常及妊娠结局有重要意义。DS筛查以及对DS筛查高风险孕妇实施产前诊断有非常重要的作用，能让人口素质显著提高，实现优生优育[6]。现阶段，DS筛查在孕妇中的认知程度不高，而且多数孕妇愿意接受无创检查，且超声能筛查大部分先天缺陷，DS也往往合并先天畸形，能通过超声检查。

综上所述，发光免疫法联合无创产前DNA检测是产前检查的重要内容，对预测胎儿异常及妊娠结局有重要意义。为降低出生缺陷率，提高人口素质，强化NT、孕早期DS筛查，强化质量控制，若围生儿疑似DS，则可给予外周血染色体诊断。

[参考文献]

[1]邱丽影，林立鹏，资捷，等.无创产前基因检测技术在唐氏征筛查中的应用[J].中国优生与遗传杂志，2015，6（3）：96-97.

[2]涂新枝，段纯，李玉哲，等.无创胎儿DNA检测在2949例传统唐氏筛查临界风险孕妇中的应用[J].天津医药，2017， 45（2）：180-183.

[3]Wald N J，Densem JW，George L，et al.Prenatal screening for Down′s syndrome using inhibin-a as a serum marker[J].Prenat Diagn，2015，16（2）：143-153.

[4]赵楠，付雪梅，王丹，等.吉林省孕妇产前多技术联合筛查效果分析[J].中国妇幼保健，2017，32（4）：782-785.

[5]杨灿锋，吴晓.孕妇血浆中胎儿游离DNA测序在无创性产前检测中的应用[J].实用妇产科杂志，2015，31（11）：866-869.

[6]梅瑾，王小华，王昊，等.无创产前基因检测在胎儿染色体非整倍体筛查中的应用[J].中国预防医学杂志，2014，15（3）：238.

[7]Lam YH，Tang MH.Second-trimester maternal serum inhibin-a screening for fetal Down syndrome in Asian women[J].Prenat Diagn，1999，15，19（5）：463-467.

[8]杨小风，王雅莉，徐括琴，等.胎儿游离DNA高通量基因测序技术在产前診断中的临床价值[J].中国妇幼保健，2015， 30（4）：577-580.

[9]葛建民，孙波，赵卫华，等.无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体的临床应用研究[J].中国妇幼保健，2014，29（12）：1889-1892.

[10]袁红，任景慧，朱琳，等.21-三体综合征产前染色体检查指征分析[J].中国妇幼保健，2016，31（3）：539-541.

[11]赖允丽，陈筠，易升，等.无创产前检测的临床应用及随访研究[J].重庆医学，2016，45（11）：1491-1495.

[12]Hackshaw AK，Wald NJ.Repeat testing in antenatal screening for Down syndrome using dimeric inhibin-a in combination with other maternal serum markers[J].Prenat Diagn，2001，21（1）：58-61.

[13]袁慧珍，刘艳秋，龙耀，等.孕中期唐氏产前筛查及诊断的临床价值分析[J].广东医学，2017，38（S2）：35-37.

[14]高楠.高龄孕妇妊娠中期唐氏筛查在产前诊断的价值研究[J].陕西医学杂志，2016，45（8）：968-970.

[15]魏海云，苏玲君，朱梓年.东莞地区唐氏综合征筛查临床分析[J].中国优生与遗传杂志，2016，8（6）：36.

（收稿日期：2018-12-10  本文编辑：崔建中）