参苏丸中4种成分HPLC法测定

曲靖市食品药品检验检测中心，云南 曲靖 655000

参苏丸是中国药典收载的品种，由党参、紫苏叶、葛根、前胡、茯苓、半夏(制)、陈皮、枳壳(炒)、桔梗、甘草、木香等组成，具有益气解表、疏风散寒、祛痰止咳等作用，用于身体虚弱、感受风寒所致感冒，症见恶寒发热、头痛鼻塞、咳嗽痰多、胸闷呃逆、乏力气短等[1]。葛根、陈皮和枳壳为其主药，现代药理研究表明，葛根中葛根素、大豆苷元和大豆苷等异黄酮类化合物为有效成分，对心血管系统、免疫系统的疾病有较好的治疗作用，其制剂用于治疗头晕头痛、高血压病、心绞痛和突发性耳聋等疾患疗效显著,临床应用广泛[2]。陈皮中有较高含量的陈皮苷 Hesperidin (亦称橙皮苷、橘皮苷)，具有维持血管正常渗透压、降低血管脆性、缩短流血时间等作用。陈皮和枳壳来源于同芸香科不同种的不同药用部位，均含有丰富的黄酮类化合物，陈皮主要含有橙皮苷、新橙皮苷，枳壳主要含柚皮苷、新橙皮苷及少量的橙皮苷，且上述黄酮类化合物结构非常相似。为更好地控制药品质量，本研究参照文献[3-4]建立了高效液相色谱法测定其中4种成分-葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量测定方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 1260型高效液相色谱仪(包括G13-11C型四元泵、G1329B型自动进样器、G1316A型柱温箱、G1314F型紫外检测器，美国Agilent 公司)；MS205DU电子分析天平(上海梅特勒仪器有限公司)；KQ-300UDB型双频数控超声清洗器(昆明市超声仪器有限公司)。Hypersil ODS2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm，大连依利特分析仪器有限公司)。

1.2 材料 葛根素(批号：110752-201514，含量：95.5%)、柚皮苷(批号：110722-201613含量：94.3%)、橙皮苷(批号：110721-201617，含量：96.1%)、新橙皮苷(批号：111857-201703，含量：99.2%)均购于中国食品药品检定研究院。参苏丸(规格：6 g/袋，批号：20160101、20160103、2017-0503，云南XX药厂)。甲醇为色谱纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil ODS2色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇(A)-水(B)线性梯度洗脱(程序见表1)；柱温：35 ℃；流速：1 mL/min；检测波长：225 nm；进样量：5 μL。按上述色谱条件，依次取阴性样品溶液、混合对照品溶液和供试品溶液各5 μL进样，记录色谱图。葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的保留时间依次为：15.2 min、27.2 min、28.8 min、30.3 min；理论板数依次为：13181、39115、43199、49916；4个成分均分离完全，阴性样品溶液在与混合对照品溶液相应峰处未见色谱峰出现，说明参苏丸中的其他药物及辅料对测定无干扰，如图1所示。

表1 梯度洗脱程序

2.2 混合对照品溶液制备 分别精密称取四种对照品(A：16.30 mg；B：15.22 mg；C：15.20 mg；D：14.96 mg)于4个10 mL的量瓶中，加甲醇使溶解，定容至刻度，摇匀，分别精密量取上述四种对照品溶液2 mL于同一25 mL的量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。作为混合对照品储备液(A：124.53 μg/mL；B：114.82 μg/mL；C：116.86 μg/mL；D：118.72 μg/mL);再精密吸取2.5 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液制备 取样品适量，研细，精密称取约1.0 g，置于100 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率240 W，频率45 KHz)40 min，放至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液制备 取不含葛根的参苏丸处方与不含枳壳和陈皮的参苏丸处方，按参苏丸[1]制法制备不含葛根与枳壳和陈皮的阴性样品，按“2.3”项下的制备方法制备阴性样品溶液，即得。2.5 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液0.5、1、2.5、5、10 mL于10 mL的量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得。按“2.1”项下色谱条件进样测定，以进样浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归，计算回归方程，结果见表2。

2.6 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液，连续进样5次，A、B、C、D峰面积的RSD(n=5)分别为0.59%、0.51%、0.64%、0.54%。结果表明进样精密度良好。

2.7 重复性试验 取批号20160103的样品，研细，精密称取约1.0 g，共5份。按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别按“2.1”项下的方法测定，记录色谱图，结果A、B、C、D含量的RSD(n=5)分别为1.1%，0.82%，1.0%，0.79%，表明方法重复性良好。

表2 4种成分的线性回归方程

2.8 稳定性试验 按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，分别于配制后0、4、8、12、16、24 h进样测定，记录峰面积、结果A、B、C、D的峰面积的RSD依次为：0.86%、0.79%、0.92%、0.77%。结果表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.9 加样回收率试验 取准确测定含量批号为“20160103”的样品，研细，精密称取约0.5 g，共6份，分别加入对照品溶液(A:1556.6 μg/mL，B:1435.2 μg/mL，C:1460.7 μg/mL，D:1484.0 μg/mL)各1 mL，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样，计算A、B、C、D的平均回收率(n=6)和RSD，结果见表3，结果表明回收率良好。

2.10 样品含量测定 取3批次样品，各3份，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别进样，记录峰面积，以外标法计算各成分含量，结果见表4。

表3 回收率试验结果 (n=6)

表4 样品含量测定结果 (n=3)

3 讨论

3.1 流动相的选择 试验中曾采用0.1%磷酸溶液，甲醇，乙腈，水作为流动相[3-4]，但在试验过程中甲醇—水为流动相峰型好，且分离效果良好，故选择甲醇—水为流动相。

3.2 实验中样品提取 曾采用水，稀乙醇、乙醇、甲醇等溶剂，结果显示甲醇提取效果较好。同时考察了超声提取，加热回流提取方式，结果两者差异不大，但超声提取简便、快捷，故选择超声提取；试验过程中比较了超声提取(功率240 W，频率45 KHz)20、30、45、60、90 min的提取效果，结果显示超声提取(功率240 W，频率45 KHz)45、60、90 min的结果一致，故选择超声提取(功率240 W，频率45 KHz)45 min为提取时间。

参苏丸是中国药典收载的品种，葛根、陈皮和枳壳均为其主药，且葛根素、油皮苷、橙皮苷、新橙皮苷又是其主药成分。通过该方法可以有效控制参苏丸中葛根、陈皮、枳壳的质与量。在测定过程中、样品的分离度较好、阴性样品无干扰、方法简便，快捷，准确、一法可控制该处方中多味药材的质与量。