三七蜂胶增强小鼠免疫功能的比较研究

邓智超 李佳 宋营虎

[关键词]三七;蜂胶;免疫;小鼠

蜂胶是由蜜蜂从植物幼芽、树皮与树干裂缝上采集来的树脂，并混入它的上颚腺分泌物和蜂蜡等加工而成的具有芳香气味的胶状固体物。蜂胶的组成非常复杂，已知成分达300多种，主要生物活性物质有黄酮类、萜烯类和咖啡酸类化合物等，是一种具有抗肿瘤、抗病原微生物、抗氧化、抗炎、免疫调节等生理活性的天然物质[1]。三七为血加科植物干燥的根，止血化瘀，化瘀而不伤气血[2]。三七粉具有多种功能，如免疫调节、抗衰老、改善记忆、抗疲劳等作用。三七粉可双向调节人体机能，增强机体的应激能力和提高机体的免疫能力，是疗补功能兼备的药食同源植物药[3]。

本实验研究比较二者单独使用及配伍对小鼠免疫的影响。

1 材料与方法

1.1药物 三七由亳州天宇生物科技有限公司提供，产地云南;蜂胶由江苏江大源生态生物科技有限公司提供。三七蜂胶粉有三七、蜂胶分别粉碎后，以2.5：1比例混合制成。

1.2 动物 SPF级昆明种雌性小鼠，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，体重为18.0～22.0g，实验动物生产许可证号为SCXK（沪）2013-0016。

1.3仪器 T-1000型电子天平（美国双杰）、JA2003型电子天平（上海菁海）、离心机、二氧化碳培养箱（日本Sanyo）、恒温水浴锅（巩义予华）、酶标仪（美国Molecular Devices）、显微镜（日本olympus）等。

1.4动物分组与给药方法 试验动物随机分为5组，每组50只，分别进行;小鼠巨噬细胞碳廓清试验;迟发型变态反应试验;脏体比值、抗体生成细胞数测定;ConA诱导小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞活测定。5组再随机分为三七组、蜂胶组、三七蜂胶低剂量组、三七蜂胶高剂量组及对照组。三七组小鼠灌胃三七0.2g/kg∙BW，蜂胶组小鼠灌胃蜂胶0.08g/kg∙BW，三七蜂胶低剂量组灌胃三七蜂胶粉0.14g/kg∙BW、三七蜂胶高剂量组灌胃三七蜂胶粉0.28g/kg∙BW，对照组灌胃去离子水。灌胃体积0.02ml/g BW，对照组给予等体积蒸馏水，连续灌胃30天后。

1.5实验方法：按照《保健食品检验与评价技术规范》2003版“增强免疫功能实验”进行免疫实验及相关指标检测。

1.6 统计学方法 先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett-t法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到方差齐性，则改用秩和检验，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhane’s  T2检验进行两两比较，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 对小鼠体重的影响 各个试验小组各剂量组小鼠试验初期、试验中期、试验末体重及实验期间体重增长与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响三七复合物各剂量组对小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1

2.4对小鼠抗体生成细胞数的影响三七组、蜂胶组和三七蜂胶低剂量组小鼠抗体生成细胞数，与对照组比较差異无统计学意义（表2，P>0.05）。三七蜂胶高剂量组小鼠抗体生成细胞数增加，与对照组比较差异有统计学意义（表2，P<0.05）。

3.6对小鼠NK细胞活性的影响三七组、三七蜂胶低剂量组小鼠NK细胞活性，与对照组比较差异无统计学意义（表3，P>0.05）。蜂胶组、三七蜂胶高剂量组小鼠NK细胞活性显著增大，与对照组比较差异有统计学意义（表3，P<0.05）。

机体的免疫系统是能识别并清除从外环境中入侵的病原体和内环境中由于各种因素产生的肿瘤细胞，主要包括体液免疫、细胞免疫以及非特异性免疫。其中体液免疫由抗体介导，抗体产生量体现了体液免疫功能的强弱[4]，此外抗体细胞生成数是衡量机体体液免疫功能的重要指标。DTH和抗体生成能力这 2个指标相结合，可用来准确评价一般药物的免疫药理活性[5]。细胞免疫由T细胞介导，经其自身分化为效应细胞后执行免疫功能，本试验通过ConA诱导小鼠T淋巴细胞转化试验以及利用SBC可与腹壁皮肤蛋白结合成抗原，并且刺激T细胞增殖及激活，由此验证三七蜂胶混合粉对T细胞的影响[6]。非特异性免疫又称固有免疫，是机体遇到病原体后的第一道防线，执行非特异性免疫的细胞包括具有吞噬能力的巨噬细胞、不受MHC限制的自然杀伤细胞（NK细胞） 等。其中巨噬细胞吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的重要标志之一，本试验通过小鼠碳粒廓清试验、NK细胞测判断三七蜂胶混合粉对非特异性免疫的调节作用进行评估。

蜂胶作为天然免疫刺激剂， 能强化免疫系统， 增强免疫细胞的活力。对免疫系统的中心器官胸腺， 蜂胶可促进产生大量T细胞。蜂胶能促进脾脏产生大量淋巴细胞，有丰富的B细胞，可分泌特殊性抗体;对骨髓、淋巴结等整个系统产生有益的影响[7]。三七粉可明显增强免疫功能低下小鼠的网状内皮系统吞噬功能，明显增强免疫功能低下小鼠的迟发性超敏反应，显著提高免疫功能低下小鼠血清溶血素的生成[3]。本实验结果显示，三七组小鼠单核-巨噬细胞碳廓清吞噬指数、NK细胞活性显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;蜂胶组小鼠足趾肿胀度、巨噬细胞碳廓清吞噬指数、NK细胞活性显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;三七蜂胶低剂量组小鼠巨噬细胞碳廓清吞噬指数显著增大、三七蜂胶高剂量组小鼠小鼠足趾肿胀度、抗体生成细胞数、巨噬细胞碳廓清吞噬指数、NK细胞活性均显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。实验结果与以上文献相似。说明三七、蜂胶均有一定的增强免疫作用，三七蜂胶混合粉效果更明显，且高剂量组优于低剂量组，分析原因可能是两者具有协同作用。

参考文献

1.王玉芬. 蜂胶的研究进展[J]. 河北医药， 2002，24（3）：227-228

2.赵鹏，李彬，等.三七皂甙对小鼠免疫功能影响的实验研究[J].中国热带医.2004 年8月，4（4）：522-524

3.刘成明，王丽，宁俞媛，等.三七粉对小鼠免疫调节功能的影响.亚太传统医药.2015年12月，11（23）：7-8

4.芦爱芳.浅谈免疫力[J]. 健康必读旬刊，2012（9） ： 538～538

5.王阳，赵飞.测定鱼油中EPA和DHA的前处理方法比对研究[J].中国卫生检验杂志，2016，26（ 18） ： 2624～2627

6.沈映君.中医药学高级丛书 中药药理学[M].北京：人民卫生出版社，2000： 92.

7.张其康，吴珍红，缪晓青，等. 蜂胶囊对巨噬细胞吞噬能力的影响及其急性毒理.福建农林大学学报 （自然科学版 ）， 2003， 32 （ 5）： 500- 2