茶多酚肝脏的保护作用研究

李元慈

摘 要：目的：探究茶多酚对于肝脏的保护作用，为其在医疗领域的应用提供科学数据。方法：将小鼠设置空白对照、模型对照和处理组，处理组灌胃不同剂量的茶多酚2周后，利用四氯化碳对小鼠建立急性肝损伤模型，采集小鼠的血液和肝脏组织，用试剂盒测定小鼠血液中AST和ALT活性以及肝脏中MDA含量和GSH、SOD活性。结果：与模型对照组相比，灌胃高剂量茶多酚能使小鼠血液中的AST活性下降18.33%（P<0.05），ALT活性下降20.51%（P<0.05），肝脏中MDA含量下降31.53%（P<0.05），GSH活性增加25.47%（P<0.05），SOD活性增加18.03%（P<0.05）。结论：茶多酚可以增强小鼠肝脏的抗氧化能力，抑制脂质过氧化反应造成的肝损伤，从而保障肝功能的正常。

关键词：茶多酚;肝损伤;保肝护肝;抗氧化

肝脏是一个较容易发生病变的器官，病毒性肝炎、酒精性脂肪肝、肝纤维化、肝硬化和肝癌等都是常见的一些肝病[1-5]。为了防止肝脏性疾病的发生，除了要改善饮食习惯、减少过多脂肪的摄入，同时加强体能锻炼之外，还要注重具有保肝护肝作用的一系列保健品的摄入，通过多方面的预防措施保证肝脏健康[6-7]。研究发现，茶叶具有抗氧化作用，可以清除体内自由基、延缓机体衰老，同时还能够抑制肿瘤的发生，对机体健康具有诸多益处[8-10]。茶叶中的生理活性成分主要是茶多酚，包括儿茶素、花色苷、黄酮类等物质[11]，这些功能成分特殊的结构形式是茶叶能够发挥重要生理活性的基础。鉴于茶多酚是一种具有强抗氧化作用的物质，若是能够抑制或是减轻肝脏中的脂质过氧化作用，就能够修复肝细胞损伤，恢复肝功能正常，从而保证机体健康[12]，本研究通过四氯化碳建立急性肝损伤模型，通过给予茶多酚，探究茶多酚是否能够起到保肝护肝的作用以及可能的机制，为预防肝病及开发相关的茶多酚保健品提供科学依据。

1 材料與方法

1.1 材料与试剂

茶多酚，湖南金农生物资源股份有限公司;50只4周龄昆明种清洁级雄鼠（体重20±2g），重庆腾鑫比尔实验动物销售有限公司（许可证号：SCXK（渝）2007-006）;基础饲料，重庆腾鑫比尔实验动物销售有限公司;ALT、AST、MDA、GSH、SOD活性测定试剂盒，南京建成生物工程研究所;其他所用试剂均为分析纯。

1.2 仪器与设备

F6/10匀浆机，上海弗鲁克流体机械制造有限公司;M680型酶标仪，美国伯乐公司;H2500R-2型冷冻离心机，湘仪离心机仪器有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 实验动物分组及喂养 对上述50只小鼠用基础饲料进行喂养，持续1周后，随机分成5组，每组10只，分别记为正常对照组，模型对照组，茶多酚低、中、高剂量组。分组完成后，接着用基础饲料持续喂养2周，同时茶多酚处理组进行预防性给药，即茶多酚低、中、高剂量组分别灌胃茶多酚剂量100、50、20mg/kg·BW，正常对照组和模型对照组分别灌胃等体积的生理盐水。末次给药结束2h后，建立小鼠急性肝损伤模型，对模型对照组和茶多酚处理组小鼠采取1次性皮下注射四氯化碳的方式进行，注射的四氯化碳剂量为0.1mL/100g。实验期间，小鼠每周称2次体重，饲养室环境条件：室温22℃左右，相对湿度保持在60%，12 h轮换照明。

1.3.2 实验样品采集 建立急性肝损伤模型后，小鼠采取禁食不禁水24h，结束后进行眼眶取血，所得血液放于含有肝素钠的离心管中，然后进行低温离心操作，4 000 r/min离心10 min，收集上层血清用于测定ALT、AST活性。取血结束后，利用脱颈法处死小鼠，解剖小鼠摘取肝脏组织，用冰冷的生理盐水清洗干净表面的血水后，用滤纸吸干表面水分，用锡箔纸包好放于-80 ℃的冰箱保存，用于测定MDA、GSH和SOD活性。

1.3.3 血清中ALT、AST活性的测定 利用酶联免疫吸附法测定血清中ALT、AST活性，按照试剂盒中附带的说明书上的方法进行测定。

1.3.4 肝脏中MDA、GSH和SOD活性的测定 称取0.5g左右的肝脏组织，加入5mL冰冷的生理盐水，用匀浆器在冰水中进行匀浆，然后4 ℃ 8 000 r/min离心15 min，吸取上层清液进行MDA、GSH和SOD活性测定。测定方法按照试剂盒中说明书上的方法进行。

1.4 数据处理

测定结果用±s表示。采用SPSS 19.0对数据进行显著性分析，P<0.05认为差异有显著性。

2 结果与分析

2.1 茶多酚对急性肝损伤模型小鼠血清中ALT和AST活性的影响

ALT和AST是衡量肝脏功能是否发生异常的两个重要指标[13-14]。通常情况下，ALT和AST主要存在于肝脏中，在血液中的含量极低[15]。但是当肝脏功能发生异常时，ALT和AST就会从肝脏中转移至血液中，导致血液中ALT、AST含量升高，活性增加[16]。从血清中ALT、AST的活性变化情况便可得知肝脏的健康状况。由表1可知，给小鼠注射四氯化碳之后，模型对照组小鼠血清中的ALT、AST活性均较正常对照组显著增加（P<0.05），说明四氯化碳对小鼠的肝脏造成了伤害，急性肝损伤模型建立成功。和模型对照组相比，灌胃茶多酚的小鼠血清中的ALT、AST活性均有所下降。就ALT活性而言，与模型组比较，高剂量组表现出显著差异（P<0.05），中、低剂量组则无差异（P>0.05）。和正常对照组相比，高剂量组仍显著高于其水平（P<0.05），可见茶多酚不能使ALT活性下降至正常水平。就AST活性而言，与模型组比较，高、中、低三个剂量组的活性均显著低于其水平（P<0.05）。和正常对照组相比，高剂量组无显著差异（P>0.05），中、低剂量组显著高于其水平（P<0.05）。可见适量的茶多酚可以修复肝损伤，保证肝功能的正常，降低血液中的ALT、AST活性。

2.2 茶多酚对急性肝损伤模型小鼠肝脏中MDA含量的影响

四氯化碳造成肝损伤的原因在于四氯化碳会促使肝脏发生脂质过氧化反应[17-18]。脂质过氧化反应会产生一系列的有害物质，MDA就是其中的一种。这些有害物质难降解，并且它们的存在会破坏细胞膜结构，降低酶活性，损伤血管内皮细胞，造成动脉粥样硬化[19-21]。减少以MDA为代表的有害物质可以有效保证肝功能正常。由表2可知，和正常对照组相比，模型对照组小鼠肝脏中的MDA含量明显增加（P<0.05），说明四氯化碳导致小鼠肝脏中的脂质过氧化反应加剧，生成的MDA有害物含量增加。但是给予小鼠茶多酚后，肝脏中MDA含量有所下降。和模型对照组相比，茶多酚高、中剂量组小鼠的MDA含量显著降低（P<0.05），低剂量组无明显变化（P>0.05）。和正常对照组相比，各剂量组小鼠肝脏中的MDA含量均显著高于其水平，可见茶多酚不能使MDA含量降至正常水平。由上述分析可知，由于茶多酚具有抗氧化作用，因此能在一定程度上抑制四氯化碳对肝脏造成的脂质过氧化反应，起到保护肝脏的作用，但是这种保护作用是有限的，不能使肝功能恢复至正常状况。

2.3 茶多酚对急性肝损伤模型小鼠肝脏中GSH和SOD活性的影响

对于脂质过氧化反应而言，机体会产生GSH和SOD等活性物质来对抗氧化损伤[22]。GSH和SOD可以有效抑制脂质过氧化，清除体内的自由基，减少氧化反应产物，使机体保持良好的氧化还原状态[23]。对于肝损伤而言，若是能够提高肝脏中GSH、SOD的活性，就能够有效地保护肝脏免受损害[24-25]。由表3可知，用四氯化碳建立的小鼠急性肝损伤模型，其肝脏中的GSH、SOD活性会被抑制。和正常对照组相比，模型组小鼠肝脏中的GSH、SOD活性显著下降（P<0.05），说明肝功能损伤会降低抗氧化物质的活性。和模型对照组相比，灌胃茶多酚的小鼠血清中的GSH、SOD活性有所增加。就GSH活性而言，與模型组比较，高、中剂量组活性显著增加（P<0.05），低剂量组无显著差异（P>0.05）。和正常对照组相比，高、中、低剂量组仍显著低于其水平（P<0.05），可见茶多酚能在一定程度上增加GSH活性，但不能恢复至正常水平。就SOD活性而言，与模型组比较，高、中剂量组的活性均显著提升（P<0.05），低剂量组无变化（P>0.05）。和正常对照组相比，高剂量组无显著差异（P>0.05），中、低剂量组显著低于其水平（P<0.05），可见一定剂量的茶多酚可以使SOD活性恢复至正常水平。由上述分析可知，适量茶多酚能够增加小鼠肝脏中抗氧化物质的活性，提高抗脂质过氧化的能力，从而修复肝损伤，保护肝脏组织。

3 结论

利用四氯化碳建立急性肝损伤模型是一种常用的手段，在该种模型中，四氯化碳引起的自由基和脂质过氧化反应是造成肝损伤的主要原因[26]。本研究在对小鼠进行预防性给予茶多酚后，便利用四氯化碳建立肝损伤模型，探讨茶多酚对于肝脏的保护作用。实验结果证实，茶多酚可以通过增加肝脏中抗氧化物质的活性，增强肝脏抵制脂质过氧化的能力，保护肝脏免受氧化作用造成的损伤，达到保肝护肝的作用。本研究只是简要探究了茶多酚在提高肝脏抗氧化能力方面的作用，关于更深层次的机理还需进一步研究。

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Abstract：ObjectiveTea polyphenols （TP）is an active substance with excellent antioxidant activity.Exploring the protective effect of TP on liver can provide data for its application in medical field.MethodThe mice were divided into blank control group，model control group and treatment group.After 2 weeks of intragastric administration of tea polyphenols in different doses，CCl4 was used to establish acute liver injury model in mice.Blood and liver tissues of mice were collected.AST and ALT activities in blood，MDA content in liver and GSH and SOD activities were measured by kit.ResultCompared with the model control group，the high dose of tea polyphenols could decrease AST activity by 18.33% （P<0.05），ALT activity by 20.51% （P<0.05），MDA content in liver by 31.53% （P<0.05），and increase GSH activity by 25.47% （P<0.05），SOD activity by 18.03% （P<0.05）.ConclusionTea polyphenols can enhance the antioxidant capacity of mice liver and inhibit the liver damage caused by lipid peroxidation，thus ensuring the normal liver function.

Keywords：tea polyphenols;liver injury;protecting liver;antioxidant

（責任编辑 李婷婷）