抗鸡球虫病中兽药处方筛选及其对球虫病鸡盲肠组织病理学的影响

闫志强 徐登峰 付文贵 陈春林 唐红梅 朱买勋 翟少钦

摘要：【目的】筛选出对鸡球虫病具有良好治疗效果的中兽药处方，以确保养鸡业的持续健康发展。【方法】将84羽患有球虫病且每克粪便球虫卵囊数（OPG）超过105个的病鸡随机分为7组（处方①～处方⑥及感染对照组），每组12羽，另取12羽同日龄的健康仔鸡作为空白对照组。各处方处理组均按2.4 mL/kg的剂量给药，每天1次，连用7 d，感染对照组及空白对照组不投喂任何药物。试验期间观察球虫病鸡的临床表现，测定其生长性能、存活率、血便和盲肠病变计分、卵囊值及抗球虫指数（ACI），并采集盲肠组织制作病理切片，综合评价中兽药处方对鸡球虫病的临床治疗效果。【结果】给药后，各处方处理组球虫病鸡精神状态明显好转，采食量增加，血便减少，尤其以处方①和处方③的恢复效果较好;在6个抗球虫中兽药处方中以处方③的平均日增重最高、料重比最低，除处方③外，其他处方处理组均有病鸡死亡;处方③的ACI为170.41，依据药物效果判定标准可知，处方③对球虫病鸡的治疗效果良好;病鸡盲肠组织病理切片观察结果显示，处方①和处方③的盲肠组织结构正常，上皮细胞排列有序，未见有明显的组织病理损伤，与空白对照组相比无明显差异。【结论】处方③（青蒿∶常山∶仙鹤草∶地榆=5∶2∶2∶1）对鸡球虫病的治疗效果良好，其ACI为170.41，且能有效改善球虫病鸡受损的盲肠组织，加快其肠道功能恢复。

关键词： 鸡球虫病;中兽药处方;血便;盲肠病变;抗球虫指数（ACI）;组织病理学

中圖分类号： S858.31                        文献标志码： A 文章编号：2095-1191（2019）10-2322-07

Screening of traditional Chinese medicine prescription against chicken coccidiosis and its pathological effects on cecal

tissue of sick chicken

YAN Zhi-qiang， XU Deng-feng， FU Wen-gui， CHEN Chun-lin， TANG Hong-mei，

ZHU Mai-xun， ZHAI Shao-qin*

（Chongqing Academy of Animal Sciences， Chongqing  402460， China）

Abstract：【Objective】To ensure the sustainable and healthy development of the chicken industry， this test screened out traditional Chinese medicine compounds with good therapeutic effects on chicken coccidiosis. 【Method】Eighty-four chickens with coccidiosis and more than 105 oocysts per gram of feces were randomly divided into seven groups（prescription ① to ⑥ and infected control group），with 12 chickens in each group. Another 12 healthy chickens of the same age were used as the blank group. Each prescription group was administered at a dose of 2.4 mL/kg once a day for 7 consecutive days. The infected control group and the blank group were not treated with any drugs. During the test， the clinical mani-festations of chickens were observed. Meanwhile， the relative weight gain rate， survival rate， bloody stool and cecal lesion score， oocyst value and anticoccidial index（ACI） were determined. At the same time， intestinal pathological sections were made and observed which were used to evaluate the clinical treatment effect of drug prescription on chicken coccidiosis comprehensively. 【Result】After administration， the mental state of coccidiosis chickens recovered varying degrees in each drug group， the feed intake increased， and the blood stool decreased， especially prescription ① and ③. In six drug groups， the prescription ③ had the highest average daily gain and the lowest feed-to-weight ratio.Chickens died in other prescription treatment groups except for prescription ③， and the anticoccidial index （ACI） of prescription ③ was 170.41. According to the judgment standard of drug efficacy， the prescription ③ had a good therapeutic effect on coccidiosis chickens， the cecal histopathological section observation showed that the cecal tissue structure of prescription ① and ③ were normal， the epithelial cells were arranged in order， and no obvious tissue damage was observed. There was no significant difference in pathological damage compared with the blank control group. 【Conclusion】Prescription ③（Artemisia annua∶Changshan∶agrimony∶sanguisorba=5∶2∶2∶1） have a good therapeutic effect on chicken coccidiosis， the ACI is 170.41 and it can improve the intestinal damage caused by coccidia infection of the cecum and accelerate the recovery of intestinal function.

Key words： chicken coccidiosis; Chinese veterinary drug prescription; bloody stool; cecal lesions; anticoccidial index（ACI）; histopathology

0 引言

【研究意义】鸡球虫病是由艾美耳属（Eimeria）多种球虫混合感染引起的一种肠道寄生虫病，以15～45日龄的雏鸡最易感，发病率一般高达50%～70%，死亡率为20%～30%，严重者可达80%（李超等，2018）。艾美耳球虫主要侵染肠道上皮细胞，导致病鸡生长缓慢，饲料转化率低，产蛋量下降。全球每年因鸡球虫病造成的经济损失高达30亿美元，在波兰每年因球虫病造成的直接和间接经济损失约5100万欧元（林雨鑫等，2014;Zhang et al.，2019），而我国每年支出的抗球虫药物成本在6亿～8亿元，约占鸡病防治总费用的1/3，随着我国集约化养鸡业的迅速发展，这一数据还将急剧上升（郭志廷等，2015）。目前，鸡球虫病的防治主要使用疫苗和抗球虫药物，但由于鸡球虫基因组庞大、种类繁多，致使鸡球虫疫苗在应用过程中存在诸多问题，尚未得到大面积推广应用（Lehman et al.，2009）。化学药物在控制鸡球虫病暴发和流行中发挥了重要作用，但养殖场大规模、长时间使用极易产生球虫耐药性和药物残留等问题（Chapman and Jeffers，2014;毕菲菲等，2018;李超等，2018）。因此，寻找不易产生耐药性且无药物残留的化学药物替代品用于鸡球虫病防治已迫在眉睫。【前人研究进展】大量研究表明，单味中药或复方制剂对鸡球虫病有较好的治疗效果。王伟伟等（2009）研究发现，中药复方口服液对鸡柔嫩艾美尔球虫病有一定的防治效果，抗球虫指数（ACI）为178.22;杨峰昆（2010）研究表明白头翁、血见愁和仙鹤草提取物的抗球虫效果评价为中效;林青等（2011）研究证实由常山、黄连和大黄组成的中药复方制剂具有一定的抗球虫效果;郭志廷等（2013）研究表明，常山提取物具有良好的抗球蟲效果，主要是减轻病鸡盲肠和十二指肠的病理症状，具有绿色环保、低毒低残留的特点;阮祥春等（2014）研究发现，2%中药添加剂对鸡球虫病有一定的预防效果;宋萍等（2014）研究发现，青蒿素与柳氮磺胺吡啶联用后能在减少磺胺类药物剂量的前提下提高抗球虫疗效，且无明显毒副作用;郑寅等（2014）研究表明，中药肠血平颗粒对人工感染鸡球虫病有一定防治效果，其抗球虫效果评价为中效;蓝丽华（2016）研究发现，鸦胆子提取物具有明显的抗鸡球虫病作用，抗球虫效果可达中等或良好;黄鑫（2017）研究表明，青蒿粉能减轻柔嫩艾美耳球虫侵染鸡盲肠所致的病理症状和组织病变，减少卵囊排出，具有较好的抗球虫效果，且存在剂量依赖关系。【本研究切入点】目前，已有大量研究根据中兽医药理论及临床辨证论治原则，以中药为组分针对鸡球虫病进行组方，但其治疗效果尚未明确。【拟解决的关键问题】以患球虫病的自然病例鸡为研究对象，进行中药处方临床治疗效果筛选，旨在筛选出对鸡球虫病具有良好治疗效果的中兽药处方，确保养鸡业的持续健康发展。

1 材料与方法

1. 1 试验动物

患球虫病的自然病例鸡为20～25日龄重庆青脚鸡，经执业兽医师通过临床症状和实验室检测每克粪便球虫卵囊数（OPG）超过105个，共84羽。健康仔鸡由重庆永川一品种鸡场提供，体重200～230 g/羽，共12羽。球虫病鸡纳入原则：（1）临床上精神沉郁，羽毛蓬松，头卷缩，食欲减退，鸡冠和可视黏膜贫血、苍白，逐渐消瘦，病鸡常排红色葫萝卜样粪便、咖啡色粪便或血粪;（2）对疑似球虫病鸡逐只进行粪便采样，并参照GB/T 18647—2002《动物球虫病诊断技术》进行检测，将确诊为球虫感染且依据国家标准判定为重度感染（OPG>10×104个）的鸡纳入试验动物。

1. 2 受试药物

1. 2. 1 受试药品 青蒿、茜草、常山、仙鹤草、地榆、黄芪、甘草、白头翁和肉桂等均购自重庆荣昌区华森大药房，按照处方比例配制后进行煎煮提取，煎煮3次，每次1 h，合并煎煮液并进行浓缩，浓缩至1 mL药液含原生药1 g，备用。

1. 2. 2 处方设计 将上述药材进行合理组方，按以下比例进行配伍。处方①：青蒿;处方②：青蒿∶茜草=3∶2;处方③：青蒿∶常山∶仙鹤草∶地榆=5∶2∶2∶1;处方④：常山∶仙鹤草∶黄芪∶白头翁∶肉桂=20∶10∶10∶6∶5;处方⑤：青蒿∶仙鹤草∶黄芪∶白头翁∶肉桂=60∶10∶10∶6∶5;处方⑥：青蒿∶常山∶仙鹤草∶白头翁∶苦参∶茜草∶乌梅∶黄芪∶甘草=8∶5∶5∶4∶4∶4∶4∶4∶2。

1. 3 试验鸡饲养管理

纳入的球虫病鸡在相同环境下饲喂，笼养，每组1笼，每笼12羽，各组间相互隔开;以保温灯供暖，环境温度23～25 ℃，正常免疫，饲喂不含任何药物添加剂的饲料，自由饮水和采食。

1. 4 试验鸡分组及处理

将84羽确诊为球虫感染且OPG超过105个的病鸡随机分为7组，每组12羽，另取12羽同日龄的健康仔鸡作为空白对照组。给药方式采用饮水给药，即给药前先断水4 h，然后将药液放入饮水器中供试验鸡自由饮取，给药剂量为2.4 mL/kg。试验分组及处理方法详见表1。

1. 5 临床症状观察

试验期间分别在上午9：00和下午16：00打扫圈舍卫生前观察试验鸡的精神状态、采食、饮水、运动状况及粪便情况，并详细记录。

1. 6 生长性能测定

试验鸡于试验前后分别称重，记录给料量和剩余料量，计算日采食量、日增重和料重比，综合评判中兽药处方对患球虫病仔鸡生长性能的影响。

相对增重率（%）=各组病鸡平均增重/空白对照

组的平均增重×100

日均增重=（末重-初重）/试验天数

平均增重=（末重-初重）/每组试验动物数

料重比=日均采食量/日均增重

存活率（%）=组内存活鸡数量/试验前组内总鸡

数×100

1. 7 血便及盲肠病变计分

血便计分：从给药前1 d至试验结束，每天检查粪便并记录血便情况。0分：100%粪便不带血;1分：1%～25%粪便带血;2分：26%～50%粪便带血;3分：51%～75%粪便带血;4分：76%～100%粪便带血。试验结束时解剖所有试验鸡，根据盲肠病变的严重程度进行计分（表2），若两侧盲肠病变不一致，则以严重一侧为准进行判定，并计算其病变值。病变值=每组平均病变计分×10。

1. 8 粪便球虫计数

于给药后第0、3、5和7 d采集每羽试验鸡的粪便样品进行称重处理，参照GB/T 18647—2002《动物球虫病诊断技术》计算OPG。具体方法：将收集的粪便样品称重，加入少量自来水搅匀，经60目尼龙网过滤后自来水冲洗滤网。滤液经2500 r/min离心10 min，弃上清液，沉淀加入一定量饱和食盐水搅匀，然后用麦氏计数板进行计数，并计算卵囊值。

卵囊值（%）=各组卵囊排出量/感染对照组卵囊

排出量×100

1. 9 抗球虫指数测定

通过评估试验鸡的血便情况、OPG、增重率、病变计分和死亡率，以综合评价各处方的药物效果（李龙瑞等，2019）。药物效果判定标准：ACI小于120，治疗效果差;ACI为120～160，治疗效果中等;ACI为161～180，治疗效果良好;ACI大于180，治疗效果优秀。ACI计算公式：

ACI=（相对增重率+存活率）-（病变值+卵囊值）

1. 10 盲肠组织病理切片制作

试验结束时，解剖试验鸡并采集其盲肠组织，采用4%多聚甲醛固定组织样本，经修块、包埋、切片及HE染色后，于显微镜下观察组织病理学变化，并以显微成像系统进行拍照，记录组织学损伤情况。

1. 11 统计分析

试验数据采用SPSS 20.0進行统计分析，分别进行单因素方差分析（One-way ANOVA）和Duncan’s多重比较。

2 结果与分析

2. 1 临床症状观察结果

试验前，球虫病鸡均表现出精神状态不良，运动量减少，羽毛蓬松无光泽，头卷缩，多聚堆，怕冷，采食量降低，消瘦，排血便。给药后，除感染对照组外，各处方处理组球虫病鸡精神状态明显好转，采食量增加，运动量增多，血便减少，羽毛开始平整，恢复光泽，尤其以处方①和处方③的恢复效果较好。

2. 2 抗球虫中兽药处方对球虫病鸡生长性能的影响

由表3可知，试验前各组试验鸡的体重间无显著差异（P>0.05，下同）;至试验结束时，处方①、处方③和处方④球虫病鸡的体重明显升高，但与感染对照组球虫病鸡相比差异不显著;处方③的球虫病鸡平均增重显著高于处方②和处方⑤的球虫病鸡（P<0.05，下同），与空白对照组试验鸡相比差异不显著;在平均日增重方面，处方③的球虫病鸡显著高于处方②、处方⑤和处方⑥的球虫病鸡，与空白对照组试验鸡相比差异也不显著;在6个抗球虫中兽药处方中以处方③的料重比最低。

2. 3 抗球虫中兽药处方对球虫病鸡存活率的影响

由表4可知，除处方③外，其他5个处方组均有球虫病鸡死亡，其中，处方②和处方⑥的球虫病鸡死亡数最多（4羽），处方①、处方④和处方⑤的球虫病鸡各死亡1羽。处方①～处方⑥的球虫病鸡成活率分别为91.67%、66.67%、100.00%、91.67%、91.67%和66.67%。

2. 4 抗球虫中兽药处方对球虫病鸡血便计分的影响

由表5可知，各处方试验组球虫病鸡的血便计分整体上随给药天数的增加呈逐渐降低趋势，至给药第7 d球虫病鸡的血便明显减少;感染对照组球虫病鸡的血便计分虽然降低，但降幅不明显。

2. 5 抗球虫中兽药处方对球虫病鸡病变值的影响

由表6可知，各处理组球虫病鸡均有盲肠病变，且感染对照组、处方①、处方②和处方⑥的病变较严重，病变值均在10.00以上，而处方③、处方④和处方⑤的病变较轻微。

2. 6 抗球虫中兽药处方对球虫病鸡治疗效果的影响

由表7可知，处方①～处方⑥的ACI分别为122.40、28.58、170.41、125.16、99.41和48.76，其中以处方③的ACI最高。依据药物效果判定标准可知，处方③对球虫病鸡的治疗效果良好，处方①和处方④对球虫病鸡的治疗效果中等，处方②、处方⑤和处方⑥对球虫病鸡的治疗效果差。

2. 7 抗球虫中兽药处方对球虫病鸡盲肠组织形态的影响

由图1可看出，空白对照组、处方①和处方③试验鸡盲肠组织结构正常，上皮细胞排列有序，未见有明显的组织病理损伤;感染对照组和处方⑥试验鸡盲肠组织有大量黏膜上皮细胞坏死脱落、黏膜固有层和黏膜下层有大量炎性细胞浸润;处方②试验鸡盲肠黏膜上皮有少量细胞坏死脱落;处方④试验鸡盲肠黏膜固有层中有少量炎性细胞浸润;处方⑤试验鸡盲肠黏膜固有层中有较多炎性细胞浸润。

3 讨论

目前，鸡球虫病的防治主要使用磺胺类及地克珠利等抗球虫药物，但大规模、长时间添加使用极易带来鸡球虫耐药性和药物残留等安全隐患。大量研究表明，中药对鸡球虫病具有良好的治疗效果（王伟伟等，2009;蓝丽华，2016;黄鑫，2017）。del Cacho等（2010）研究发现，青蒿素能显著抑制卵囊壁形成及降低卵囊孢子化率，进而起到抗球虫的作用。郭志廷等（2013）研究表明常山提取物对人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫病的疗效显著。本研究依据中兽医理论对鸡球虫病进行临床辨证论治，发现鸡球虫病初期表现为食少神怠，便溏带血，口渴喜饮，证见实热入侵胃肠，药物选择时宜用苦寒泻下、杀虫除积类中药，因此选用抗虫中药、抗虫中药+凉血止血中药、抗虫中药+补益中药进行组方。

本研究选用OPG超过105个的球虫病鸡为研究对象，依据国家标准判定均属于重度感染（OPG>10×104个），经过7 d的自由饮水给药，结果显示，处方③球虫病鸡的相对增重率和存活率相对较高，而病变值及卵囊值相对较低，抗球虫效果明显;处方①和处方④有一定的抗球虫作用但效果不明显，处方②、处方⑤和处方⑥的ACI较低，无明显抗球虫效果。依据鸡球虫病治疗原则，应以清热燥湿、凉血止痢为主（郭志廷等，2015）。处方③中，青蒿、常山和仙鹤草等均性味苦寒以清热，而配合地榆酸涩以敛血止血又止泻，可能是其治疗效果良好的主要原因;而在处方④和处方⑤中黄芪性微温，肉桂大热，降低抗球虫药的寒性，清热效果降低，因此治疗效果不明显;此外，本研究选用重度感染的球虫病鸡，血便明显且次数多，此时病鸡津液流失严重，性寒类中药多起泻下作用，进而加重其腹泻程度。

盲肠是鸡的重要消化器官之一，其组织结构完整是行使消化吸收功能的前提条件。艾美耳球虫主要侵染鸡盲肠，使盲肠黏膜上皮细胞坏死脱落，损伤盲肠组织，从而导致鸡增重缓慢、饲料转化率低，严重者甚至死亡（Blake and Tomley，2014）。本研究的盲肠病理切片观察结果显示，鸡感染球虫后其盲肠组织损伤严重，上皮细胞脱落，黏膜层有大量炎性细胞浸润;给药7 d后，除处方⑥球虫病鸡的盲肠组织无好转外，其他处方药物组均有好转趋势，尤其以处方①和处方③的恢复效果较好，与空白对照组相比无明显差异，说明处方①和处方③可有效改善球虫病鸡受损的盲肠组织，加快肠道功能恢复。

4 结论

综合各项评价指标，以处方③对鸡球虫病的治疗效果良好，其抗球虫指数为170.41，且能有效改善球虫病鸡受损的盲肠组织，加快其肠道功能恢复。

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（责任编辑 兰宗宝）