鸡滑液囊支原体分离鉴定及临床治疗

摘要：研究主要结合一个养殖场的实际发病情况，分析了鸡滑液囊支原体的形态培养特征、生化鉴定、生长抑制试验，并对分离得到的滑液囊支原体进行了药敏试验，根据药敏试验，选择高敏抗生素进行临床治疗，取得了很好的治疗效果。通过本次研究表明，发病养殖场确诊为滑液囊支原体感染，分离得到的致病原对泰乐菌素、恩诺沙星药物敏感，通过选择敏感药物进行对症治疗，起到很好治疗效果。

关键词：鸡滑液囊支原体;分离鉴定;临床治疗

中图分类号：S858.31 文献标识码：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.19.007

0 引言

鸡滑液囊支原体是危害鸡健康生长的常见致病原，该种致病原不具备细胞壁，是一种单细胞核的微生物，外观呈球形或卵圆形，任何年龄和品种的鸡均可以感染该种致病原，其中对3～16周龄的鸡造成的危害最严重，呈现急性感染，随着鸡日龄的升高，逐步呈现慢性持续性感染，会严重影响到鸡的正常生长和正常生产。临床上该种疾病主要表现为关节肿胀、滑叶囊炎，病理学变化可以发现患病黏膜表面会附着大量粘液和渗出物，渗出颜色呈灰白色。近年，很多地区的鸡养殖规模不断扩大，使该种疾病的发病率呈现逐步提升的趋势，造成的损失日趋严重，因此要加强防控。

1 材料与方法

1.1 养殖场发病情况

2018年2-5月，某养殖场出现疑似发病情况，结合具体临床表现兽医初步判定为鸡滑液囊支原体病。整个养殖场发病率相对较高，患病及主要表现为精神状态较差，采食欲望不高，大多数患病鸡出现关节发炎症状不能正常行走，卧地不起，它表现为跗关节、趾关节肿大，解剖发现病死鸡滑液囊膜上附着大量黄白色的粘稠样干酪物质。病死鸡的气管中也存在大量黄色粘液性或白色干酪样渗出物，气囊囊膜显著增厚，肝脏、肾脏、脾脏等器官表现为充血肿大和典型的器官病变，初步判定为是鸡滑液囊支原体。

1.2 仪器设备

致病原分离选择的仪器设备主要包括超净工作台、-p温振荡培养箱、二氧化碳培养箱、支原体液体培养基、固体培养基、葡萄糖、精氨酸、尿素、四氮唑生化培养管，鸡滑液囊支原体标准阳性血清滤纸片、恩诺沙星、泰乐菌素、太妙菌素、氟苯尼考、土霉素、林可霉素、卡那霉素。

1.3 方法

第一，病料采集。在无菌条件下收集病死及关节腔中的内容物，采集到的内容物放置到消毒过的试管中，密封后带回实验室进行细菌分离鉴定;第二，致病原分离培养。将采集到的病料先接种到支原体液体培养基上，放置在37℃温度条件下持续培养，直到液体培养基的颜色变成橘黄色为止。将培养物收集起来进行过滤，再次接种到液体培养基上进行代代培养，收集第2代菌液进行病原菌鉴定。将分离得到的菌液制成涂片选择使用姬姆萨充分染色观察致病原形态。选择上述得到的菌液0.1mL，接种到2种液体培养基上，一种含有辅酶a，一种不含辅酶a，相同的培养条件下，持续培养一段时间后，观察培养基的变化。再将液体培养机中的内容物分别转移到含有和不含有辅酶a的固体培养基上，5%的二氧化碳浓度下持续培养3～5d，观察致病菌菌落形态，后将致病菌菌落放置在低倍显微镜下观察。选择使用葡萄糖、精氨酸、尿素、四氮唑生化培养管，将分离得到的致病原接种到上述几种生化培养管中，温度控制为37℃，持续培养一段时间后，观察致病菌的生化特性;第三，红细胞吸附试验。取少量添加辅酶a的培养基液体，制作成涂片后，充分固定，然后滴加1%的鸡红细胞悬浊液，37℃作用30min后，选择PBS缓冲稀释液对涂片进行充分冲洗，连续冲洗3次，然后放置在显微镜下观察红细胞形态;第四，致病原坚定。将添加有辅酶a的液体培养基中的培养液转移到含有青霉素和醋酸铊的支原体液体培养基上，传代培养10次，将培养液体转移到支原体固体培养基，持续培养一段时间后观察培养基菌落形态;第五，血清学分析。将分离得到致病菌菌，均匀的涂布在固体培养基上，然后选择使用鸡滑液囊支原体标准阳性血清滤纸片放置在培养基上[1]，37℃培养一段时间后，观察到抑菌圈大小如果直径在2mm以上，表示致病原抑制生长阳性反应;最后，药敏试验。选择使用常规纸片法进行药敏试验，明确高敏抗生素和低敏抗生素。

2 结果

2.1 病原鉴定结果

第一，致病菌形态。致病原涂片染色镜检，可以发现姬姆萨能将致病原染成蓝色，外观成球形或圆形。分离得到的致病菌接种到含有辅酶a的液体支原体培养基24～48h后，培养液变浑浊，颜色变成橘红色。而不含有辅酶a的液体支原体培养极少，致病原不能很好生产，培养基形态没有发生变化[2]。第二，将分离得到的致病原接种到含有辅酶a的固体培养基上，接种3d后，在低倍显微镜下能看到煎蛋状的菌落。在不含有辅酶a的固体支原体培养基上不生长致病原;第三，生化和凝集试验。生化试验结果显示该种致病菌能发酵葡萄糖产酸不产气，能还原四氮唑，不分解静氨酸尿素。分离得到的致病菌能凝集1%的鸡红细胞;第四，菌体形态。连续传代培养10次后，菌體形态没有发生变化，分离结果表明均体为L型阴性;第五，生长抑制试验。本次选择的标准阳性血清，在致病菌菌落周围能形成大于2mm的抑菌圈，由此可以表明，阳性血清能抑制分离得到的致病菌生长。

2.2 临床治疗

结合药敏试验，选择高敏抗生素进行对症治疗。本次研究结果表明，恩诺沙星、泰乐菌素、林可霉素对分离得到的致病菌较敏感，可以选择上述3种药物交替使用。在鸡群的饮用水中添加98%的酒石酸泰乐菌素粉剂，每升水添加0.25g，连续使用1周。同时对临床症状较严重的患病鸡肌肉注射20%的恩诺沙星注射液，使用剂量为0.1mL/kg体重，1次/d，连续使用5d为1个疗程。综合采用上述手段治疗，1周后养殖场的发病情况得到有效改善，治愈率高达98%[3]。养殖场的病情控制后，按照随机原则采集患病鸡的新鲜血液，进行血清凝集试验，检测出隐性带菌鸡后立即淘汰处理，逐步净化鸡群，直到连续3次检测不出带菌鸡表示净化完全。

3 讨论与结论

在进行病情诊断中，一定要明确具体的临床表现和病理变化，然后根据具体的脏器病变情况对病情做出初步判断。有条件的地区，针对上述疾病，应该立即采集病料，进行严格的实验室诊断。在病料采集中，应该采集典型的病变脏器组织，通过病原学分离、菌体形态培养、生化鉴定、红细胞凝集和生长抑制试验，证明是鸡滑液囊支原体感染。该种疾病传播流行具有一定的季节性，在每年1-4月发病率最高，发病鸡群主要集中在60日龄左右，通常呈急性感染，慢性感染或持续性感染。目前鸡滑液囊支原体治疗主要采用抗菌药物治疗为主，一旦出现发病情况，应该立即采用抗菌药物进行治疗。但由于鸡滑液囊支原体很容易产生耐药性，在药物防治中，如果没有提前做好药敏试验，选择的药物针对性不强，使致病原的耐用性逐步增加，错过最佳治疗时期，导致治疗效果变差，治疗周期变长。因此在药物治疗前，应在分离致病原的基础上，进行严格的药敏试验，选择高敏抗生素进行对症治疗，这样才能提高治疗效果，降低发病率。

参考文献

[1]王昆，宫晓炜，陈启伟，等.禽滑液囊支原体诊断与防控技术研究进展[J].黑龙江畜牧兽医，2018（9）：31-34，245.

[2]马爽，郭莉莉，宋新宇，等.鸡滑液囊支原体感染的流行病学调查与分析[J].中国家禽，2016，38（23）：68-71.

[3]刘轶秋，薛青红，张媛，等.恩诺沙星及其他抗菌药对鸡滑液囊支原体的体外联合抑菌试验[J].中国家禽，2013，35（22）：13-16.

作者简介：陈兴龙（1983-），男，山东平阴人，本科，助理兽医师，研究方向：畜禽疾病预防与治疗。